Süüfilise seroloogiline diagnoos: kiirabiarsti meditsiiniblogi. Millist testi tehakse süüfilise suhtes ja kuidas seda nimetatakse? Algoritm süüfilise infektsiooni diagnoosimiseks erinevatel etappidel

Treponemaalsed testid süüfilise tuvastamiseks. Üldkirjeldus.

Süüfilise usaldusväärseks diagnoosimiseks ja süüfilisevastaste antikehade tuvastamiseks patsiendi kehas (vereseerumis või tserebrospinaalvedelikus) kasutatakse spetsiaalseid laboriuuringute tehnoloogiaid - nn seroloogilisi meetodeid.

Süüfilise diagnostiliste testide läbiviimisel kasutatakse erinevaid seroloogilisi reaktsioone: aglutinatsioon, sadestumine, immunofluorestsents, komplemendi sidumine, ensüümi immunoanalüüs jne. Kõik need seroloogilised reaktsioonid põhinevad antigeenide ja antikehade koostoimel.

Spetsiifilisi seroloogilisi teste nimetatakse treponemaalne sest nendes testides kasutatakse Treponema pallidum'i või nende antigeene, st treponemaalse päritoluga antigeene. Treponemaalsete testide eesmärk on tuvastada spetsiifilised antikehad süüfilise tekitaja antigeensete struktuuride vastu, st antikehad, mis on suunatud spetsiifiliselt T. Pallidum bakteri enda, mitte treponeemiga kahjustatud kehakudede vastu. Spetsiifilisi IgM klassi treponemaalseid antikehi saab tuvastada juba haiguse teise nädala lõpus.

7. Valepositiivsed ja valenegatiivsed tulemused

Süüfilise positiivseid RV tulemusi inimestel, kes seda haigust ei põe, nimetatakse valepositiivseteks. Tervetel inimestel on valepositiivsete tulemuste määr 0,2-0,25%. Kui tervetel inimestel on mittespetsiifiliste valepositiivsete RT tulemuste protsent väga väike, siis mõne haiguse puhul võib see olla kõrge.

Kõik seroloogiliste reaktsioonide mittespetsiifilised tulemused võib jagada järgmistesse põhirühmadesse:

1. Haigused, mis on põhjustatud tavaliste antigeenide esinemisest sarnastes patogeenides (spiroheedid): retsidiiveeruv palavik, õõtsik, bejel, pinta, suu treponema, leptospira.

2. Lipiidide metabolismi muutustest ja seerumi globuliinide sisalduse muutustest põhjustatud positiivsed reaktsioonid. Need sisaldavad positiivseid tulemusi rasedatel, podagraga patsientidel, plii-, fosfori-, naatriumsalitsülaadi, digitaalise jm mürgistuse tagajärjel tekkinud lipiidide häired. Need reaktsioonid peaksid hõlmama ka positiivseid reaktsioone mõne nakkushaigused (tüüfus, malaaria, kopsupõletik, pidalitõbi, endokardiit, kollagenoos, müokardiinfarkt, põrutus, vähk, maksatsirroos jne)

3. Tehnilised vead. Komplemendi annuse vale valik, reaktiivide säilitustingimuste ja -perioodide mittejärgimine, kontrollvere seerumi proovide väljajätmine uuringust, saastunud katseklaaside ja instrumentide kasutamine.

8. Wassermani reaktsiooni modifikatsioon

Wassermani reaktsiooni modifikatsioonid on kvalitatiivses ja kvantitatiivses versioonis, külmas, tserebrospinaalvedelikuga.

RV muutmine külmas osutus tundlikumaks. Wassermani reaktsiooni külmas lavastamise meetodi eripäraks on kolmefaasilised temperatuurirežiimid, mille juures toimub komplemendi sidumine. See reaktsioon viiakse läbi ka kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega.

Lisaks RF kvalitatiivsele hindamisele on selle jaoks olemas meetod kvantitatiivne avaldus vereseerumi erinevate lahjendustega (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Reagiini tiiter määratakse maksimaalse lahjenduse järgi, mis annab siiski teravalt positiivse tulemuse (4+). RV kvantitatiivne staadium on oluline teatud süüfilise vormide diagnoosimisel ja ravi efektiivsuse jälgimisel.

9. Kohaldamisala

Venemaal on RSKt osa süüfilise (SSR) standardsete seroloogiliste testide komplektist.

Selleks kasutatakse Wassermani reaktsiooni treponemaalse ja kardiolipiini antigeeniga (RSKt).

• süüfilise kõigi vormide diagnoosimine,
• ravi efektiivsuse jälgimine,
• süüfilisega patsiendiga seksuaalkontaktis olnud isikute läbivaatused,
• süüfilise kliinilise ja anamneetilise kahtlusega isikute läbivaatus
• psühhiaatria- ja neuroloogiahaiglate, doonorite ja rasedate, sealhulgas abordi tegemiseks saadetud isikute süüfilise ennetava läbivaatuse käigus.

Praegu on Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi korraldusel soovitatav RSCT asendada tundlikumate treponemaalsete meetoditega (ELISA või RPGA).

Välismaal pole Wassermani reaktsiooni treponemaalse antigeeniga kliinilises laboripraktikas pikka aega kasutatud ja see ei sisaldu Maailma Terviseorganisatsiooni soovitatud standardtestide nimekirjas.

Klassikaliste seroloogiliste reaktsioonide kompleks (CSR)

KSR- See reaktsioonide kompleks, kasutatakse süüfilise serodiagnostikaks kui standardmeetod. See reaktsioonide kompleks sisaldab Wassermanni reaktsiooni kardiolipiini antigeeniga (letsitiini ja kolesterooliga rikastatud veise südame ekstrakt) ja treponemaalse antigeeniga (apatogeensete kultiveeritud treponemes pallidum'i ultraheliga töödeldud suspensioon), samuti mikrosadestamisreaktsiooni (MPR) plasma või inaktiveeritud seerum, mis on lisatud kardiolipiini antigeeniga

CSR-id muutuvad positiivseks esmase perioodi keskel (selle jagunemise seronegatiivseks ja seropositiivseks määrab täpselt CSR), sekundaarsel perioodil on CSR-id positiivsed 98-100% patsientidest ja kolmandal perioodil - ainult 60-70%. See tähendab, et haiguse kestuse pikenedes väheneb järk-järgult CSR-i positiivsus.

DAC-i eelised:

1) Paigaldamise odavus, lihtsus ja kiirus. See kehtib eriti mikrosadestamisreaktsiooni kohta: RMP on praegu peamine sõelumis- (selektsiooni-) meetod;

2) Süüfilise paranemise jälgimiseks on mugav kasutada mittetreponemaalseid teste.

DAC-i puudused:

1) Subjektiivsus reaktsioonide tulemuste hindamisel ("silma järgi");

2) Madal tundlikkus süüfilise hiliste vormide korral;

3) Spetsiifilisuse puudumine võrreldes kaasaegsemate testidega. Nende läbiviimisel täheldatakse sageli valepositiivseid reaktsioone (FPR).

LPR-i võib põhjustada kahvatu spiroheedi ja teiste mikroobide ristreaktiivsus, lipiidide ja valkude metabolismi häired, rakumembraanide ebastabiilsus ja autoantikehade moodustumine. LPR-e täheldatakse ägedate (malaaria, nakkuslik mononukleoos jne) ja krooniliste (tuberkuloos, pidalitõbi, hepatiit, borrelioos jne) infektsioonide, müokardiinfarkti, maksatsirroosi, kollagenoosi (eriti SLE korral), onkopatoloogia, vaktsineerimise, uimastitarbimise, alkoholi ja rasvaste toitude kuritarvitamine. Valepositiivsed tulemused võivad ilmneda raseduse viimastel nädalatel, pärast sünnitust ja mõnel naisel menstruatsiooni ajal. Valenegatiivsed DSC tulemused võivad olla seotud HIV-nakkusega.

RIT, RIBT – Treponema pallidum immobilisatsioonireaktsioon

Treponema pallidum immobilisation test (TPI) on klassikaline meetod, mida kasutatakse spetsiifiliste treponemaalsete antikehade tuvastamiseks. RIBT reaktsioonis kasutatakse antigeenina küüliku munandis kasvatatud patogeenset Treponema pallidum T. pallidum'i (Nicholsi tüvi). RIBT põhineb elava Treponema pallidum'i motoorika kadumisel pärast kokkupuudet patsiendi vereseerumi ja komplemendi antikehadega. Tulemusi hinnatakse tumevälja mikroskoopia abil. Kuigi RIBT-test viidi kliinilisse praktikasse süüfilise spetsiifilise testina, on see töömahukas, tehniliselt keeruline, aeganõudev ja kulukas kasutada.

1. RIBT-meetodi ajalugu

Treponema pallidum immobilisatsioonitest (TPI) on tegelikult esimene spetsiifiline test süüfilise diagnoosimiseks. Selle reaktsiooni tutvustasid 1949. aastal Ameerika teadlased R. W. Nelson ja M. M. Mayer ning seda käsitleti üksikasjalikult järgmistel aastakümnetel teaduslikes töödes. Ebaõnnestunud katseid elustreponeeme testides kasutada on tehtud varemgi. Tänu sellele, et Nelson suutis luua keskkonna, milles treponeemid püsisid elujõulisena kuni 8 päeva, oli tema uurimistöö edukas.

2. RIBT meetodi põhimõte

Meetod põhineb motoorika kadumisel treponema pallidums'i poolt uuritava vereseerumi ja komplemendi immobiliseerivate antitreponemaalsete antikehade juuresolekul anaeroobsetes tingimustes. Antigeen on elus patogeenne Treponema pallidum, mis on saadud süüfilisega kunstlikult nakatunud küülikutelt.

3. RIBT testi seadistamine

Reaktsioon hõlmab testitavat seerumit, komplementi ja antigeeni. Subjekti vereseerumi lisatakse pärast kunstlikku nakatumist küüliku munandikoest saadud elustreponeemile. Kui seerumis on anti-treponemaalsed antikehad-immobilisiinid, lakkab treponema pallidums liikumine (immobiliseerub). Immobilisiini antikehad on hilised antitreponemaalsed antikehad.

Reaktsioon viiakse läbi kuumusega inaktiveeritud seerumite või vahapaberil kuivatatud seerumiproovidega (kuivad tilgad). Seerumi inaktiveerimine kuumutamisega viiakse läbi 30 minutit temperatuuril 56 °C. Enne vere võtmist ei tohiks uuritav saada ravimeid, eriti penitsilliini. Ravimite võtmine lõpetatakse nende kasutamise ajaks võimalik viivitus organismis.

Antigeenina kasutatakse Nicholsi tüve baktereid, mis on saadud 7–10-päevase küüliku süüfilise orhiidi (munandipõletiku) tagajärjel. Ajavahemik reaktsiooni loomise hetkest kuni selle tulemuste registreerimiseni kestab 18-20 tundi, seetõttu on mikroorganismide elujõulisuse ja hea liikuvuse säilitamiseks vajalik ellujäämiskeskkond.

RIBT kasutab merisea komplementi. Komplemendi saamiseks tuleb steriilsetes tingimustes võtta verd mitmelt merisealt.

Bakteriaalse saastumise korral lükatakse komplement tagasi. Konserveeritud komplementi ei saa kasutada Treponema pallidum'i immobiliseerimisreaktsioonis, kuna see on mikroorganismidele toksiline.

Immobiliseerimisreaktsioonis kasutatakse liigset komplementi. Selle kogus sõltub suuresti Treponema pallidum'i ellujäämiskeskkonnast.

RIBT asetatakse steriilsetesse karpidesse, mida on eelnevalt kiiritatud bakteritsiidse kvartslambiga 45-60 minutit. Iga vereseerumit uuritakse kahes katseklaasis: kogenud Ja kontroll. Testseerum ja antigeen lisatakse mõlemasse katseklaasi. nõutavad kogused. Katseklaasi valatakse aktiivne komplement ja kontrollkatsutisse sama kogus inaktiveeritud merisea vereseerumit. Pärast täitmist segatakse tuubide sisu õrnalt loksutades.

RIBT esineb anaeroobsetes tingimustes. Katseklaasid koos koostisainetega asetatakse mikroanaerostaati, millest imetakse vaakumpumbaga välja atmosfääriõhk ja pumbatakse silindrist gaasisegu (95 osa lämmastikku ja 5 osa süsinikdioksiid). Mikroanaerostaat koos katseklaasidega asetatakse 18-20 tunniks termostaati (35°C).

RIBT tulemusi hinnatakse pärast torude eemaldamist termostaadist ja mikroanaerostaadist (st pärast 18-20 tundi kestnud katset). Pasteur pipeti abil kantakse tilk katseklaasi sisust klaasklaasile, mis kaetakse katteklaasiga ja uuritakse tumevälja mikroskoobiga (objektiiv 40, okulaar 10X). Preparaadi erinevates osades uuritakse mitut vaatevälja, loendades igaühes liikuvate ja liikumatute treponemes pallidum'i arvu. Loendamine algab ravimiga kontrollist ja seejärel katseklaasist.

Reaktsiooni seadistamisel kasutatakse 5 kontrolluuringut: ilmselgelt positiivse ja negatiivse vereseerumiga, aktiivse ja inaktiveeritud komplemendiga ning Treponema pallidumi ellujäämissöötmega. Selles katses kasutatakse Treponema pallidum'i motoorika määra määramiseks negatiivset kontroll-vereseerumit. Kontrolli positiivset vereseerumit – immobiliseeriva aktiivsuse taseme hindamiseks selle katse tingimustes. Uuritakse aktiivset ja inaktiveeritud komplemendi ja keskkonda, et teha kindlaks nende mõju Treponema pallidum'i motoorikale.

Kui katses puudub komplement, ei näita immobiliseerivad antikehad oma aktiivsust korralikult ja treponeemid jäävad liikuvaks. Seetõttu määratakse pärast katset jääkkomplement, et hinnata, kas Treponema pallidum'i liikuvus katseklaasides oli tingitud komplemendi puudumisest. Sel eesmärgil kasutatakse hemolüütilist süsteemi - lamba erütrotsüütide suspensiooni ja lahjendatud hemolüütilise seerumi segu, mida hoitakse termostaadis.

Jääkkomplemendi määramiseks lisatakse igasse katsutisse vajalik kogus hemolüütilist süsteemi. Torud asetatakse 45 minutiks 37° temperatuuriga termostaadi. Katseklaasides peaks toimuma punaste vereliblede hemolüüs, kontrollkatseklaasides hemolüüsi hilinemine. Hemolüüsi puudumine katseklaasides näitab komplemendi ebapiisavat kogust, sellistel juhtudel tuleb uuringut korrata. Korduvat vereseerumi analüüsi ei tehta ainult siis, kui on täheldatud Treponema pallidum'i 100% immobilisatsiooni.

4. RIBT tulemuste arvestus

Liikuvuse kaotanud immobiliseeritud treponeemide loendamine toimub mikroskoobi all tumevälja mikroskoopia meetodil. Uurijalt nõutakse treponeemide liikumise hindamise oskust. Ta peaks pöörama tähelepanu Treponema pallidum'i liigutuste intensiivsusele. Selles bakteris ei ole alati võimalik jälgida lainelaadseid kokkutõmbeid ja painutusliigutusi, mõnikord ainult pöörlevaid. Samuti peaksite suutma eristada treponeemide aktiivset liikumist vedelikuvooluga liikumisest.

Reaktsiooni tulemuste hindamiseks arvutatakse kahvatu treponema immobilisatsiooni protsent, st liikuvate ja liikumatute treponeemide suhe katses (aktiivse komplemendiga) ja kontrollis (inaktiivse komplemendiga) vastavalt valemile:

X = (M – C) × 100/M

kus M on liikuvate treponeemide arv kontrollis; C on liikuvate treponeemide arv katses; X - % immobilisatsioon. Praktilises töös määratakse immobilisatsiooni protsent eelnevalt koostatud tabelist ülaltoodud valemi abil.

Treponema pallidumi immobiliseerimisreaktsiooni hinnatakse järgmiselt

• positiivne immobiliseerimise ajal 51 - 100% Treponema,
• nõrgalt positiivne: 31 - 50% liikumatud treponeemid,
• kahtlane: 21 - 30% liikumatud treponeemid,
• negatiivne: 0 - 20% liikumatud treponeemid.

Treponema pallidum'i immobilisatsioonireaktsioon muutub positiivseks süüfilise esmase perioodi lõpus - sekundaarse perioodi alguses (alates 7-8 nädalast nakatumise hetkest või rohkem). RIBT-st on aga süüfilise varajases staadiumis diagnoosimisel vähe kasu, kuna Treponema pallidum'i immobiliseerivad ja reaktsiooni käigus tuvastatavad antikehad ilmuvad alles 3-6 nädalat pärast nakatumist. Immobilisiini antikehad kuuluvad immunoglobuliinide IgG klassi. Need ilmuvad verre hiljem kui reagins (antikardiolipiini antikehad), hiljem kui fluorestseiini antikehad (tuvastatud RIF ja ELISA abil) ja sademed (tuvastatud põievähiga).

Tulevikus jääb RIBT positiivne. Süüfilise hiliste vormide korral on reaktsioon kõrge. Sekundaarse, hilise süüfilise, neurosüüfilise, kaasasündinud süüfilise korral registreeritakse RIBT positiivne tulemus 95–100% juhtudest. Tertsiaarse süüfilise, siseorganite ja närvisüsteemi spetsiifiliste kahjustustega, kui RV on sageli negatiivne, annab RIBT positiivseid tulemusi 98–100% juhtudest.

RIBT on pikka aega tunnistatud kõige spetsiifilisemaks süüfilise testiks. Kirjanduse andmetel on RIBT spetsiifilisus 99%, tundlikkus jääb vahemikku 79-94%. TsNIKVI andmetel on RIBT tundlikkus (kokku kõigi süüfilise etappide puhul) 87,7%.

7. Meetodi rakendusala

RIBT kasutusala kitseneb järk-järgult paigalduse kestuse, kõrge hinna ja töömahukuse tõttu. RIBT on üsna keeruline ja kulukas analüüs, mis nõuab kõrgelt kvalifitseeritud personali ja vivaariumi olemasolu. Sellega seoses on selle meetodi kasutamine viimastel aastatel oluliselt vähenenud. Ameerika Ühendriikides kasutatakse seda testi praegu ainult uurimislaborites.

Võttes arvesse RIF-i ja RIBT-i keerukust ja kõrget hinda, on mõttekas neid kasutada süüfilise hiliste ja varjatud vormide diagnoosimiseks. RIBT säilitab oma positsiooni "reaktsioonikohtunikuna" süüfilise varajaste varjatud vormide ja valepositiivsete tulemuste diferentsiaaldiagnostikas. See reaktsioon võib olla kasulik neurosüüfilise diagnoosimisel ja kui teiste seroloogiliste testide tulemused on lahknevad.

RIBT muutub positiivseks palju hiljem kui RIF ja RV. Seetõttu ei kasutata seda süüfilise nakkuslike vormide diagnoosimiseks.

RIBT, nagu ka RIF, on antisüüfilise ravi ajal väga aeglaselt negatiivne. Seetõttu ei sobi see antisüüfilise ravi edenemise jälgimiseks.

Valepositiivsed tulemused (FPR) RIBT-ga on haruldased ja neid täheldati peamiselt mitmete treponematooside (yaws, pinta, bejel) puhul, mida Venemaal ei leidu, samuti pidalitõve, sarkoidoosi, SLE, tuberkuloosi ja tsirroosi korral. maks ja mõned teised haruldased haigused mittesüüfilise iseloomuga. Patsientide vananedes suureneb valepositiivsete RIBT tulemuste arv.

RIBT võib olla valepositiivne, kui testitav seerum sisaldab treponemotsiidseid aineid (nt penitsilliinid, tetratsükliinid, erütromütsiin), mis põhjustavad Treponema pallidum'i mittespetsiifilist immobilisatsiooni. See võib olla tingitud sellest, et patsient võtab treponemotsiidseid antibiootikume, mistõttu uuringut ei tehta isikutele, kes on saanud viimase kuu jooksul antibiootikume. RIBT-i verd saab testida mitte varem kui 2 nädalat pärast antibiootikumide ja muude antisüüfiliste ravimite võtmise lõpetamist.

9. Treponema pallidum'i immobiliseerimisreaktsiooni modifikatsioonid

Lisaks mikroanaerostaadi tehnikale on RIBT-i melange meetod vastavalt N.M. Ovtšinnikov. Anaeroobsed tingimused reaktsiooni käivitamisel luuakse reageeriva segu asetamisega melanngerisse (leukotsüütide segistisse), mille mõlemad otsad on suletud kummirõngaga. Melange-reaktsiooni tehnika võimaldab ilma vaakumpumbata, lämmastiku ja süsinikdioksiidi seguga silindri või mikroanaerostaadita. Suure kliinilise materjali võrdlev uuring andis tulemusi, mis ei jää klassikalisele anaerostaatilisele tehnikale alla.

10. RIBT omadused, eelised ja puudused

RIBT on tehniliselt keeruline ja kallis diagnostikameetod. Tehnoloogia nõuab märkimisväärseid vahendeid küülikute pidamiseks ja katsete läbiviimiseks. Seda töömahukat testi kasutatakse praegu peamiselt teaduslikel eesmärkidel. Enamikus välisriikides on RIBT-d peaaegu 40 aastat praktiliselt kasutatud mitte diagnostilistel eesmärkidel, vaid ainult uurimistöös.

Reaktsiooni puudused:

• RIBT nõuab tööd Nicholsi tüve patogeense Treponema pallidum'iga, mis jääb inimestele nakkavaks vaatamata küülikutega kohanemisele.
• reaktsiooni lavastamine on keeruline, aeganõudev ja kulukas
• vivaarium on vajalik
• Reaktsiooni seadistamiseks, tulemuste registreerimiseks ja vivaariumi hooldamiseks on vaja kõrgelt kvalifitseeritud töötajaid
• tulemuste hindamise subjektiivsus
• automatiseerimise puudumine
• seda seroloogilist meetodit ei ole võimalik standardida.
• reaktsioon ei ole rakendatav käimasoleva antisüüfilise ravi taustal
• võimetus kasutada ravi kontrolli all hoidmiseks. RIBT võib süüfilisega patsientidel püsida positiivsena mitu aastat (ja isegi kogu elu), hoolimata täielikust ravist.
• reaktsioon võib anda valepositiivseid tulemusi pahaloomuliste kasvajate, diabeedi, leepra, autoimmuunhaiguste, kopsupõletiku ja raske kardiovaskulaarse patoloogiaga patsientidel.

RIBT eelised on järgmised:

1) piisavalt kõrge tundlikkus;

2) Kõrge spetsiifilisus.

RIF (immunofluorestsentsreaktsioon)

Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF) on kiire diagnostiline meetod mikroobsete antigeenide tuvastamiseks või antikehade määramiseks. Fluorestsentssignaali tuvastamisel põhinevaid teste peetakse üheks parimad testid süüfilise jaoks.

1. Meetodi ajalugu

Fluorestseeruva treponemaalse antikeha (FTA) testi töötasid esmakordselt välja 1957. aastal Deacon ja kaasautorid (Deacon, Falcone ja Harris).

2. Meetodi põhimõte

RIF-meetod põhineb asjaolul, et fluorokroomidega märgistatud antikehadega immuunseerumiga töödeldud koe antigeenid või mikroobid on võimelised fluorestsentsmikroskoobi UV-kiirtes helendama. Sellise luminestseeruva seerumiga töödeldud määrdis olevad bakterid helendavad mööda raku perifeeriat rohelise äärisena

Antigeenina RIF-is kasutatakse küülikuorhiidist pärit elava patogeense kahvatu Treponema tüve Nichols suspensiooni, mis kuivatatakse klaasklaasil ja fikseeritakse atsetooniga. Patsiendi vereseerum lisatakse Treponema pallidumile, kuivatatakse ja fikseeritakse klaasis atsetooniga.

Pärast pesemist töödeldakse ravimit seerumiga, mis sisaldab fluorestseiiniga märgistatud inimese immunoglobuliinide vastaseid antikehi. Preparaati pestakse uuesti ja uuritakse fluorestsentsmikroskoobi all. Kui testitav seerum sisaldab treponemaalseid fluorestseiinivastaseid antikehi, täheldatakse treponeemide kollakasrohelist sära.

3. Uurimistöö läbiviimise meetod RIF-meetodil

Objektiklaasile fikseeritud antigeeni (patogeenne Treponema pallidum) töödeldakse uuritava seerumiga. Pärast pesemist töödeldakse ravimit inimese immunoglobuliinide vastase fluorestseeruva seerumiga, mis on märgistatud fluorokroomiga. Sel juhul seostub tekkiv fluorestseeruv kompleks (anti-inimese globuliin + fluorestseiini tioisotsüanaat) inimese globuliiniga treponema pallidum'i pinnal, tagades fluorestsentsmikroskoobi all kahvatu treponema sära.

Antigeen-antikeha komplekside tuvastamiseks kasutatakse luminestseeruvat seerumit, mis esindab FITC-ga konjugeeritud liigivastaseid (inimesevastaseid) immunoglobuliine. Treponeemide vastaste antikehade olemasolu seerumis määrab treponeemide sära fluorestsentsmikroskoobi all uurides. Test viiakse läbi kvalitatiivses ja poolkvantitatiivses versioonis.

4. Tulemuste arvestus

RIF-i tulemuste visualiseerimine viiakse läbi fluorestsentsmikroskoobi abil. Tulemusi hinnatakse preparaadis olevate treponeemide luminestsentsi astme järgi. Antikehade juuresolekul on treponeemide sära näha, aga kui seerumis treponeemivastaseid antikehi ei olnud, siis treponeeme näha ei ole. Klaasile kinnitatud kuivatatud kahvatu treponema luminestsentsi aste on näidatud plussidega (alates "–" kuni "++++"). Negatiivne tulemus – puudub sära või taustatase – 1+.

5. Millistel haigusperioodidel on parem kasutada

Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF) on üsna tundlik infektsiooni kõikides etappides, inkubatsiooniperioodi lõpust hilise süüfiliseni. Klassikalise kulu süüfilise esmane periood algab 3-4 nädalat pärast nakatumist. RIF muutub positiivseks esmase perioodi esimestel päevadel või isegi inkubatsiooniperioodi lõpus, alates 3. nädalast pärast nakatumist. RIF-i tulemused jäävad positiivseks kõigil perioodidel, sealhulgas hilistel vormidel.

RIF muutub positiivseks veidi varem kui RV. Mõnedel andmetel esineb positiivne RIF 80% primaarse seronegatiivse süüfilisega patsientidest. Sekundaarsel perioodil on RIF positiivne peaaegu 100% juhtudest. See on alati positiivne latentse süüfilise korral ja annab 95–100% positiivseid tulemusi haiguse hiliste vormide ja kaasasündinud süüfilise korral.

6. Tundlikkus ja spetsiifilisus

Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF) on kõrge tundlikkuse ja spetsiifilisusega meetodite rühm. RIF on tundlik nakkuse kõikides staadiumides, alates inkubatsiooniperioodist kuni hilise süüfiliseni. WHO andmetel on RIF-i tundlikkus primaarse süüfilise suhtes 70-100%, sekundaarse ja hilise süüfilise korral - 96-100%, spetsiifilisus - 94-100%. TsNIKVI andmetel on RIF-i tundlikkus süüfilise kõigi vormide suhtes 99,1%.

RIF-i spetsiifilisust saab tõsta uuritava seerumi eeltöötlemisel sorbendi - ultraheliga töödeldud treponemaalse antigeeniga, mis seob rühmaantikehi (RIF-abs).

7. Meetodi rakendusala

RIF-i rakendatakse:

• kinnitava reaktsioonina varase, latentse süüfilise korral
• retrospektiivse diagnoosi seadmisel
• eristada süüfilise varjatud vorme ja süüfilise testi valepositiivseid tulemusi.
• neurosüüfilise kinnitava testina.

RIF-i kasutatakse laialdaselt kinnitava testina, kuid see ei ole mõeldud tavapäraseks kasutamiseks ega sõeluuringuks, kuna seda on tehniliselt keeruline teha. RIF-i läbiviimiseks on vajalik vivaarium või patogeense Treponema pallidum'i suspensioon, mis piirab reaktsiooni võimalusi. Kuid viimastel aastatel on siseturule hakanud ilmuma testimissüsteemid, mis võimaldavad reaktsiooni läbi viia ilma vivaariumi ja patogeense Treponema pallidum'i oma laboratoorse tüve puudumisel.

8. Tootmisel tekkivate vigade allikad ja põhjused, valepositiivsed ja valenegatiivsed tulemused

LPR-id on RIF-i diagnoosimisel harvad (kollagenoosi, borrelioosi korral).

RIF-i peetakse endiselt üheks parimaks süüfilise testiks, serodiagnoosi "kuldstandardiks". RIF-i on lihtsam seadistada kui RIBT-i,

Vaatamata kõrgele diagnostilisele väärtusele on RIF-i laialdane kasutuselevõtt igapäevane praktika mida takistab vajadus kasutada elus T. pallidum'i, uuringu kõrge hind ja kestus. Reaktsiooni seadistamine on töömahukas. Lisaks on RIF-i tulemuste hindamine subjektiivne.

RIF-i eelised ja RIBT on:

1) kõrge tundlikkus (eriti RIF-i jaoks);

2) Kõrge spetsiifilisus (eriti RIBT puhul).

RIF-i puudused ja RIBT:

1) Tehniline raskus, meetodite kõrge hind.

2) Tulemuste hindamise subjektiivsus, automatiseerituse puudumine;

3) RIF ja RIBT võivad süüfilisega patsientidel püsida positiivsed aastaid (ja isegi kogu elu), hoolimata täielikust ravist. Seetõttu ei saa neid reaktsioone ravimise jälgimiseks kasutada.

10. Meetodi modifikatsioonid

Praktikas kasutatakse ja on süüfilise serodiagnostikaks kasutatud mitmeid immunofluorestsentsreaktsiooni modifikatsioone:

• RIF-abs- kõige tundlikum süüfilise serodiagnostika meetod, see muutub positiivseks varem kui teised reaktsioonid (alates 3. nädalast pärast nakatumist);
• RIF-200(patsiendi seerumit lahjendatakse diagnoosimisel 200 korda) – väga spetsiifiline meetod süüfilise serodiagnostikaks.
• RIF-10(testitava seerumi 10-kordne lahjendus) on tundlikum meetod kui RIF-200.
• RIF-ts viidi läbi alkoholiga.
• RIF-abs-IgM- varajase IgM klassi antitreponemaalsete antikehade tuvastamine.

1. Kõige levinum modifikatsioon on RIF-abs- immunofluorestsentsreaktsioon koos imendumisega. Enne reaktsiooni läbiviimist tühjendatakse patsiendi seerum mittepatogeensete treponeemide seguga, et kõrvaldada ristreaktsioonid. Rühma antikehad eemaldatakse uuritavast seerumist ultraheliga hävitatud kultuuriliste treponeemide abil, mis suurendab oluliselt reaktsiooni spetsiifilisust. Kuna testitavat seerumit kasutatakse 1:5 lahjenduses, on RIF-abs väga tundlik.

Peamised näidustused RIF-abs-ide kasutamiseks kliinilises praktikas on:

• süüfilise latentse ja hilise vormi diagnoosimine,
• CSR-i ja põievähi valepositiivsete tulemuste tuvastamine, eriti rasedatel ja süüfilise kahtlusega somaatilistel patsientidel,
• haiguse retrospektiivse diagnoosi seadmiseks.

RIF-abs ei ole ravitulemuste hindamisel kuigi informatiivne: 85% patsientidest, kes said adekvaatset antisüüfilist ravi, püsivad RIF-i positiivsed tulemused aastaid.

Seda reaktsiooni nimetatakse süüfilise serodiagnoosi "kuldstandardiks". Seda kasutatakse vahekohtuasjades, kuid usaldusväärse tulemuse saavutamiseks on vaja küüliku seitsmepäevase orhiidi T. pallidum tüve Nichols värsket kontsentreeritud suspensiooni, mida ei saa külmutada.

2. NSV Liidus paigaldati see kahes modifikatsioonis - RIF-10 Ja RIF-200, st testitava seerumi lahjendamisega 10 ja 200 korda. RIF-200 - testitavat seerumit lahjendatakse 200 korda, et vähendada valepositiivsete tulemuste arvu. See tagab reaktsiooni kõrge spetsiifilisuse, kuid selle tundlikkus väheneb mõnevõrra. RIF-10 on tundlikum, kuid annab sagedamini mittespetsiifilisi positiivseid tulemusi kui RIF-200, mis on väga spetsiifiline. RIF-10 on tundlikum, RIF-200 ja RIF-abs on spetsiifilisemad.

RIF-200 ja RIF-abs-i tundlikkus on hinnanguliselt 84–99% ja spetsiifilisus 97–99%.

3. RIF-ts viidi läbi alkoholiga. Reaktsioon viiakse läbi terve tserebrospinaalvedeliku abil, et tuvastada kesknärvisüsteemi spetsiifilised kahjustused.

4. Reaktsioon RIF-abs-IgM pakutud IgM klassi varajase treponemaalsete antikehade tuvastamiseks. Seda reaktsiooni saab kasutada kaasasündinud süüfilise, süüfilise varajaste vormide diagnoosimiseks ning uuesti nakatumise ja serorelapsi juhtude diferentsiaaldiagnostikaks.

Sellel reaktsioonil on teada 2 modifikatsiooni:

– FTA-ABS-IgM, mis põhineb anti-IgM konjugaadi (fluorestseiiniga märgistatud antikehad inimese IgM vastu) kasutamisel reaktsiooni teises faasis inimese vastase fluorestseeruva globuliini asemel;

– RIF-abs-IgM venekeelne versioon, mida iseloomustab see, et testitavale vereseerumile lisatakse IgG antikehi eemaldavat sorbenti ja koos ülejäänud IgM antikehadega manustatakse RIF-abs.

Peamised näidustused RIF-abs-IgM testimiseks on järgmised:

- kaasasündinud süüfilise serodiagnoosimine, kui lapse nahal ja limaskestadel puuduvad kaasasündinud süüfilise ilmingud;

– süüfilise taasinfektsiooni ja kliinilis-seroloogilise või seroloogilise retsidiivi diferentsiaaldiagnostika, mille puhul RIF-abs-IgM on negatiivne ja RIF-abs positiivne;

- varakult omandatud või kaasasündinud süüfilise ravi efektiivsuse hindamine: pärast piisavat ravi muutub RIF-abs-IgM järgmise 3–6 kuu jooksul negatiivseks.

Seda reaktsiooni saab kasutada kaasasündinud süüfilise tuvastamiseks. On teada, et suured IgM molekulid ei pääse läbi terve platsenta. Järelikult võivad M-klassi antikehad treponema pallidum'i vastu ilmneda lapse kehas kas platsenta barjäärifunktsiooni rikkumise tõttu või neid toodab süüfilisega lapse keha. Süüfilise haige veres tekivad IgM klassi antikehad juba haiguse esimestel nädalatel ja antikehad IgG klass ilmuvad hiljem. Mõlema klassi antikehade eraldi määramine osutub laste kaasasündinud süüfilise diagnoosimisel äärmiselt kasulikuks, kuna IgM-klassi antikehade olemasolu lapsel esimesel elukuul viitab sellele, et need on moodustatud süüfilisega lapse kehas. , samas kui ainult IgG antikehade tuvastamine näitab viimaste ema päritolu.

Reaktsiooni seadistamine 19S(IgM)-RIF-abs hõlmab suuremate 19S IgM molekulide esialgset eraldamist, kasutades geelfiltratsiooni

väiksemate 7S IgG molekulide fraktsioonid. Täiendav uuring ainult 19S IgM fraktsiooni sisaldava vereseerumi RIF-abs reaktsiooni kohta,

kõrvaldab kõik võimalikud veaallikad. Kuid selle reaktsiooni lavastamise tehnika on keeruline ja töömahukas ning nõuab spetsiaalset varustust ja spetsialisti väljaõpet.

Immuunadhesioonireaktsioon (RIP, TPIA – Treponema pallida immuunadheents).

See reaktsioon põhineb Rieckenbergi 1912. aastal kirjeldatud nähtuse kasutamisel. RIP põhineb asjaolul, et süüfilisega patsiendi seerumi poolt sensibiliseeritud virulentne koetreponeem komplemendi ja erütrotsüütide juuresolekul kinnitub erütrotsüütide pinnale ja kantakse tsentrifuugimisel koos nendega settesse, kaob. supernatandist.

Reaktsiooni seadistamiseks kasutatakse järgmisi koostisosi: testseerum, antigeen, komplement, doonori punased verelibled, isotooniline naatriumkloriidi lahus. Antigeenina kasutatakse kahvatu treponema tüve Nichols suspensiooni.

Seda testi uurisid 50–60ndatel kodu- ja välismaised autorid enim seoses süüfilise serodiagnostikaga. Tõendid RIP-i kui diagnostilise testi väärtuse kohta on olnud ebajärjekindlad. Reaktsioon nõudis maksimaalset täpsust, kuna koostisosade ebatäpne väljastamine või katsematerjali liig või puudus preparaadis andis tulemuseks ebausaldusväärsed tulemused.

Venemaal viis ulatusliku uurimistöö läbi L.V. Sazonov, kes sai sarnased tulemused RIP-is ja RIT-is, kasutades värskelt valmistatud patogeense pallidum treponema tüve Nichols suspensiooni. Kuumutatud või fenooliga konserveeritud antigeeni kasutamine moonutas aga järsult reaktsioonitulemusi ja muutis antigeeni ebastabiilseks. Soovitage seda testi RIT L.V asendamiseks. Sazonova pidas seda võimatuks.

G.P. Avdeeva, kes kasutas antigeeni tootmisel muid temperatuuri- ja ajarežiime, sai RIP-i uurides erinevaid tulemusi. Tema andmetel on selle reaktsiooni tundlikkus kõrgem kui KCP ja RIT tundlikkus, kuid mõnevõrra madalam kui RIF ning RIP, RIT ja RIF spetsiifilisus on lähedane.

Kuid RIP-i antigeeni tööstusliku tootmise puudumine ei võimaldanud seda testi laiemalt uurida ja praktikas kasutusele võtta.

RPHA passiivne hemaglutinatsiooni reaktsioon

Passiivne hemaglutinatsioonireaktsioon (RPHA) on tavaline seroloogiline test, mis on laboripraktikas kindlalt kinnitatud. on uurimistöös üsna kõrge efektiivsusega.

1. RPGA meetodi ajalugu

Esimest korda teatasid RPHA kasutamisest süüfilise diagnoosimiseks G. Blumental ja W. Bachman (1932). 1965. aastal tehti süüfilise diagnoosimiseks ettepanek teha kaudne või passiivne hemaglutinatsiooni test. Reaktsiooni muutmisest erinevate antigeenide abil teatas Ratlev T. aastatel 1965–1967. RPGA mikromodifikatsiooni pakkus välja Sokh R.M. ja kaasautorid 1969. aastal. Esimese kaubandusliku katsesüsteemi töötasid välja Jaapani teadlased Tomisava et. al. aastal 1969

2. RPGA meetodi põhimõte

Valmistatud homogeensest erütrotsüütide suspensioonist, mis on "laetud" antigeenidega, sadestub antikehi sisaldava testitava seerumi lisamisel helveste kujul sade. Saadud sade koosneb punastest verelibledest, mis on "kokku liimitud" antikehadega ja mida nimetatakse "hemaglutinaat". Punaste vereliblede suspensioon valmistatakse eelnevalt ette ja tarnitakse diagnostiliste testsüsteemide osana.

Punaste vereliblede liimimise protsessi, mille pinnal on antigeene, nimetatakse hemaglutinatsiooniks. Sidumine toimub spetsiifiliste antikehade (aglutiniinide) mõjul. Reaktsiooni nimetatakse "passiivne", sest erütrotsüütide enda antigeenid ei reageeri ja erütrotsüüdid ise täidavad eranditult abiindikaatori funktsiooni.

Passiivne (kaudne) hemaglutinatsioonireaktsioon on teatud tüüpi aglutinatsioonireaktsioon, milles antigeenikandjatena kasutatakse erütrotsüüte (kreeka keelest háima - veri), mitte muid osakesi. Üldjuhul kleepuvad aglutinatsioonireaktsioonis antikehade mõjul kokku ja sadestuvad mikroobid või muud rakud - mitte tingimata punased verelibled, vaid näiteks lateksiosakesed, bakterid või muud antigeeni kandvad korpuskulaarsed osakesed.

Süüfilise diagnoosimise passiivses hemaglutinatsioonireaktsioonis kasutatakse antigeenina lamba või linnu erütrotsüüte, mis on kaetud Treponema pallidum antigeenidega. Spetsiifilisi antikehi sisaldava seerumi lisamisel kleepuvad punased verelibled kokku (aglutinatsioon).

RPGA reaktsioon klassifitseeritakse immunoloogiliseks meetodiks, kuna see põhineb patogeense Treponema pallidum antigeeni spetsiifilisel interaktsioonil antikehaga. "Võreteooria" kohaselt on aglutinatsioon pinnaantigeenimolekulide ja antikehamolekulide (immunoglobuliinide) "ristsidumise" tulemus.

3. Passiivse hemaglutinatsioonireaktsiooni seadistamine

RPHA asetatakse plasttablettidesse või katseklaasidesse patsiendi vereseerumi lahjendustega, millele lisatakse erütrotsüütide diagnostika.

Antigeeni erütrotsüütidega kombineerimise protsessi nimetatakse sensibiliseerimiseks ja nii saadud tehislikku korpuskulaarset antigeeni nimetatakse sensibiliseeritud erütrotsüütideks. Erütrotsüütide diagnostika nimetatakse antigeeniga sensibiliseeritud erütrotsüütideks.

Diagnostika valmistamiseks kasutatakse esmalt formaliini ja seejärel tanniiniga töödeldud lammaste või lindude (tavaliselt kana) erütrotsüüte, mis on sensibiliseeritud patogeense treponema pallidum'i (Nicholsi tüvi) või rekombinantsete treponema pallidum valkude (TpN15) ultraheli-antigeeniga. , TpN17, TpN47). Kasutada võib ka kultiveeritud Treponema pallidum'i ultraheliantigeeniga sensibiliseeritud lamba erütrotsüüte.

Testitakse ainult seerumit (ärge kasutage vereplasmat). Hemolüüsitud ja hägused proovid ei sobi. Sensibiliseerimata erütrotsüüdid toimivad negatiivse kontrollina (et välistada erütrotsüütide vastaste antikehade olemasolu). Igas tootmisseerias kasutatakse positiivseid ja negatiivseid kontrolle.

Immunoloogilise tableti süvenditesse (süvenditesse) lisatakse uuritava vereseerumi ja uuritavate punaste vereliblede proovid. Kui patsiendi vereseerum sisaldab spetsiifilisi treponemaalseid antikehi, siis testitava seerumi lisamisel süvendisse koos antigeeniga tekivad kandjate (erütrotsüütide) pinnaga seotud antigeen-antikeha kompleksid. Visuaalselt väljendub see punaste vereliblede liimimises ehk hemaglutinatsioonis, mis on nähtav palja silmaga. Immuunkompleksid "antikeha-antigeen-erütrotsüüt", mis raskusjõu mõjul järk-järgult alla langevad, jaotuvad kogu augu põhja pinnale ja moodustavad iseloomuliku pildi "ümberpööratud vihmavarjust".

Sõltuvalt uuritavas proovis sisalduvate antikehade hulgast varieerub "ümberpööratud vihmavarju" kujutis maksimumist, mis hõlmab kogu kaevu põhja pinda, kuni väikese alani keskmises, madalaimas osas (koos tühjendamisega keskus ja intensiivsema settinud punaste vereliblede rõnga teke perifeeriasse).

Immuunkompleksid ei moodustu, kui proovis pole spetsiifilisi antikehi või kui reaktsioonile lisatakse kontroll- (intaktsed) punased verelibled. Samal ajal kogunevad punased verelibled järk-järgult augu põhja madalaimasse punkti, moodustades kompaktse täpi või nupu kujul oleva kujundi, mille keskel on mõnikord kerge lõhenemine.

Kui inimese vereseerum sisaldab erütrotsüütidevastaseid antikehi, siis "vihmavari" tekib igal juhul - nii reaktsioonis testerütrotsüütidega kui ka kontrollerütrotsüütidega. Sellisel juhul on spetsiifiliste antitreponemaalsete antikehade tuvastamiseks soovitatav kasutada teisi meditsiinitehnoloogiaid.

Võimalik on prosooni fenomen (reaktsiooni võimatus liigsete antikehade tõttu), mida saab kõrvaldada seerumi lahjendamisega.

4. Passiivse hemaglutinatsioonireaktsiooni tulemuste arvestamine

RPGA tulemusi võetakse visuaalselt arvesse 60-120 minuti pärast mikromeetodi seadistamisel ja 2-4 tunni pärast või järgmisel päeval makromeetodi seadistamisel. Suuremate (tuumadega) lindude erütrotsüütide kasutamisel saadakse selgem pilt ja tulemused fikseeritakse varasemal ajal.

Tiitrit on võimalik määrata (kõrge tiiter RPHA ≥ 1:2 560).

Uuringu tulemusi hinnatakse 4+ süsteemiga (“–” kuni “++++”), lähtudes moodustunud kile suurusest. Aglutinatsiooni korral paiknevad punased verelibled augu pinnal “vihmavarju” kujul ja negatiivse tulemuse korral libisevad punased verelibled vabalt alla ja kogunevad augu põhja, augu keskele. “nupu” kujul.

RPGA tulemuste üldtunnustatud hindamine:

4+ – positiivne RPGA. Aglutineeritud punased verelibled "vihmavarju" kujul katavad ühtlaselt kogu augu pinda;

3+ – positiivne RPGA. Punased verelibled ääristavad kogu augu pinda, kuid mõned neist "libisevad" keskele. Sel juhul moodustub piki sette perifeeriat märgatav ring;

2+ - nõrgalt positiivne RPGA. Punased verelibled moodustavad augu alumise osa väikesel alal kile, moodustades punaste vereliblede setetest tiheda rõnga, mille keskel on märgatav puhastus;

1+ - määramatu RPHA, punased verelibled moodustavad kaevu põhjas lahtise sette, mille servad on ebaselged ja keskel on kerge valendik;

(–) – negatiivne RPGA, kõik punased verelibled asuvad kaevu põhjas kompaktse sette kujul (nupud või rõngad) puhta ümbritseva tausta taustal (ilma ümbritseva teralise setteta).

Välispraktikas hinnatakse RPGA tulemusi ka reaktiivseks (aglutinaadi moodustumise korral), nõrgalt reaktiivseks (kui moodustised on ebaolulised) ja mittereaktiivseks (kui aglutinatsiooni ei täheldata).

Reaktsioonitulemusi saab spetsiaalsete analüsaatorite abil automaatselt salvestada. Lisaks kvalitatiivsetele uuringutele pakuvad kõik testimissüsteemid kvantitatiivset analüüsi koos tiitri määramisega.

5. Millistel haigusperioodidel on parem RPHA-d kasutada?

RPHA muutub positiivseks esmase perioodi keskel (7-8 nädalat nakatumise hetkest, 3-4 nädalat pärast šankri tekkimist) ja püsib positiivsena aastaid pärast ravi.

Väga juures kõrge tase Treponema vastased antikehad testitavas seerumis (mis on kõige tüüpilisem sekundaarse süüfilise korral), on võimalik valenegatiivne RPGA tulemus (nn prosooni nähtus).

Pikka aega süüfilist põdenud inimeste veres tuvastatakse spetsiifilised aglutiniini antikehad, mistõttu ei saa RPGA-d soovitada uuesti nakatumise diferentsiaaldiagnostikaks ega nakkusprotsessi raskusastme määramiseks.

RPGA-d ei kasutata ravi kontrollimiseks, kuna võib jääda positiivseks palju aastaid pärast taastumist. Samas saab seda kasutada täiendava (põievähi või RPR-i) meetodina ravi efektiivsuse jälgimisel, uurides antikehade tiitrite languse dünaamikat. Nõutav tingimus see hõlmab sama RPGA testimissüsteemi kasutamist nagu patsiendi esimesel (enne ravi) läbivaatamisel, samuti uuringu läbiviimist samas laboris.

6. RPGA tundlikkus ja spetsiifilisus

RPGA-d peetakse väga tundlikuks ja spetsiifiliseks testiks. See reaktsioon on väärtuslik diagnostiline test süüfilise kõikide vormide puhul, kuid see on eriti tundlik haiguse hiliste vormide korral. Sõltuvalt haiguse staadiumist on RPGA tundlikkus erinev. Primaarse süüfilise korral on RPGA tundlikkus 76% (ja kõrgem), sekundaarse süüfilise korral - kuni 100%. Varjatud varajase süüfilise korral - 97%, hilise süüfilise korral - 94%, spetsiifilisusega 98–100%. Värskete haigusvormide madalam tundlikkus on seletatav aglutiniinide hilisema moodustumisega.

Riigiasutuse TsNIKVI Roszdrav andmetel on RPGA tundlikkus diagnostikas erinevaid vorme süüfilis oli 99,4%. Enamik teadlasi märgib RPHA spetsiifilisust 98–99%.

Tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest ei jää RPGA alla ning hiliste vormide ja kaasasündinud süüfilise puhul on see isegi parem kui RIF ja RIBT.

7. RPGA meetodi rakendusala

RPGA-d saab kasutada nii sõeluuringu kui ka kinnitava testina; saab kasutada poolkvantitatiivses versioonis koos antikeha tiitri arvutamisega. Välja on töötatud kvantitatiivne meetod RPHA staadiumiks, mikromeetod, aga ka automatiseeritudn.

8. RPGA omadused, eelised ja puudused

Kirjanduse andmetel on RPGA võtnud kliinilises praktikas järjekindlalt juhtival kohal enamikus maailma riikides. RPGA on välismaal STI-kliinikutes kõige laialdasemalt kasutatav test.

RPGA tehnikat on lihtne teostada ja see ei vaja erivarustust: vaja on vaid hemaglutinatsiooniplaati. Uuring ei võta kaua aega; reaktsioon on väga tundlik ja spetsiifiline. Meetodi testimine kliinilises praktikas on näidanud, et see on äärmiselt lihtne, odav ja tundlik. Sarnaselt ELISA-ga on RPGA-d lihtne teostada, see ei vaja kõrgelt kvalifitseeritud töötajaid ja eriseadmeid ning selle automatiseerimine on võimalik.

RPGA testi eelised:

• lihtne seadistada ja tõlgendada,
• ei vaja erivarustust,
• aeg tulemuste saavutamiseks – 45 minutit,
• sobib massisõeluuringuks (vaja on ainult 25 µl 1:20 lahjendatud seerumit),
• kõrge standardiseerituse tase,
• sisekontrolli olemasolu,
• pikk säilivusaeg,
• vastuvõetav hind
• raamatupidamise automatiseerimise võimalus.

Samuti tuleks märkida RPGA puudusi:

• mittespetsiifiliste reaktsioonide võimalus erütrotsüütide vastaste antikehade juuresolekul,
• korrelatsiooni puudumine tiitri ja süüfilise staadiumid,
• hilisem positiivne reaktsioon varajastele süüfilise staadiumid,
• valepositiivsete reaktsioonide võimalus alkoholi tarvitanud isikutel, narkomaanidel,
• tundlikkus vibratsiooni ja temperatuuri suhtes laboris.

RPGA eelised võrreldes RIBT-i ja RIF-iga on järgmised:

• tööstuslike katsesüsteemide kasutamine,
• reaktsiooni automatiseerimise võimalus,
• pole vaja töötada elusate Treponema pallidumiga,
• vivaariumi pole vaja.

9. Vigade allikad ja põhjused RPGA sooritamisel, valepositiivsed ja valenegatiivsed tulemused

Passiivne hemaglutinatsiooni test on suhteliselt lihtne test; selle teostamisel on vaja järgida kõiki diagnostikaseadmete tootjate soovitusi ja tööreegleid kliinilise diagnostika laboris. Tehtud vead võivad viia nii valenegatiivsete kui ka valepositiivsete reaktsioonitulemuste ilmumiseni ja registreerimiseni. Valepositiivsed RPGA tulemused võivad olla tingitud inim- ja bioloogiliste tegurite mõjust.

Võib saada valepositiivseid tulemusi

• mittesuguhaigustega treponematoosidega patsientide vereseerumite uurimisel,
• reumatoidfaktori tõttu
• erinevate süsteemsete või ravimitest põhjustatud metaboolsete häirete käigus moodustunud treponemaalse antigeeniga ristreageerivate antikehade tõttu,
• immunoglobuliinide ebanormaalse taseme tõttu;
• vastsündinutel - ema IgG-vastaste IgM-antikehade moodustumise tõttu loote või lapse kehas, mis raskendab tulemuste tõlgendamist ja kaasasündinud süüfilise diagnoosimist.

Vead, mis on põhjustatud inimeste osalemisest uuringus:

• saastunud mikroplaadid
• vale pipeteerimine
• vibratsiooni olemasolu laboris
• Õhutemperatuur on laboris väljaspool temperatuurivahemikku: 18–25 kraadi

Kõige tüüpilisemad tehnilised vead RPGA installimisel, mis põhjustavad usaldusväärseid tulemusi, peaks sisaldama:

• koostisainete ebatäpne lahjendamine,
• temperatuuri rikkumine,
• reaktiivide inkubatsiooniaja rikkumine,
• tabletile reaktiivide pealekandmise tähtaegade rikkumine,
• lahknevus lahuste ja vajalike pH väärtuste vahel,
• laboratoorsete klaasnõude saastumine.

RPGA seadistamisel võivad vigade allikaks olla ka järgmised tehnilised probleemid.

• kontrollvereseerumite väljajätmine reaktsioonist;
• punaste vereliblede ebaühtlane kontsentratsioon diagnostikas, mis on tingitud ebapiisavast segamisest enne kasutamist;
• Diagnostiliste ja kontrollerütrotsüütide säilitamise tingimuste rikkumine; aegunud komplektide kasutamine;
• saastunud katseklaaside, pipetiotste, pipettide, immunoloogiliste plaatide, lahuste kasutamine reaktsioonide läbiviimisel;
• ebatäpsused seerumiproovi esialgses lahjendamises;
• ebapiisav ettevaatus järjestikuste topeltlahjenduste tegemisel;
• temperatuuritingimuste ja inkubatsiooniaja mittejärgimine;
• kõrvaliste vibratsioonide olemasolu ja immunoloogilise tableti raputamine inkubatsiooni ajal;
• RPGA lavastamise korra rikkumine, mis väljendub kontrolli erütrotsüütidega uuringu läbiviimisest keeldumises.

Vereplasma kasutamine, mis sisaldab antikoagulante, mis võivad põhjustada mittespetsiifilist erütrotsüütide aglutinatsiooni (RPGA), võib viia tulemusteni, mida ei saa tõlgendada.

Valepositiivsete ja valenegatiivsete tulemuste arv on väiksem kui teiste seroloogiliste testide puhul. LPR-id RPHA staadiumis on haruldased ja need on võimalikud treponematooside (yaws, bejel, pinta) korral. Samuti registreeriti valepositiivseid tulemusi (kokku alla 1%) narkomaanidel, patsientidel nakkuslik mononukleoos, borrelioos, pidalitõbi, kollagenoos, maksatsirroos, lümfosarkoom, samuti rasedatel.

Valenegatiivsed testitulemused võivad olla tingitud konkurentsist IgM ja IgG antikehade vahel. Valenegatiivsed tulemused on võimalikud ka HIV-nakkusega patsientidel.

10. RPGA meetodi modifikatsioonid

RPHA seadistuses on mikro- ja makromodifikatsioone, esimest kasutatakse sagedamini selle tõhususe, seadistamise kiiruse ja tulemuste salvestamise tõttu.

Lisaks töötati välja pildianalüüsi automaatne diagnostikakompleks, mis võimaldas teostada tulemuste kvantitatiivset automaatset hindamist ja välistada subjektiivsuse saadud andmete tõlgendamisel. Riist- ja tarkvarakompleks tunneb pildi ära, töötleb andmeid ja annab vastuse suhtelistes ühikutes.

RPGA tulemuste salvestamise automatiseerimiseks kasutatakse ka lugejaid ja automaatseid analüsaatoreid.

TPPA (Treponema pallidum particle agglutination) – tehisosakeste aglutinatsioonireaktsioon Treponema pallidum'i antikehade tuvastamiseks

TPPA testi lühikirjeldus

Praegu kasutatakse süüfilise diagnoosimiseks ka passiivse hemaglutinatsiooni meetodi modifikatsiooni - TPPA (Treponema pallidum particle agglutination), mille puhul on Treponema pallidum antigeen fikseeritud želatiiniosakestele. Kuna kunstlikel polümeeriosakestel ei ole oma antigeene, mis põhjustavad bioloogiline aktiivsus, siis nende põhjal süüfilise serodiagnostika komplekte on põhjust pidada arenenumateks. Bioloogiliselt inertsete tehisosakeste kasutamine minimeerib mittespetsiifilist aglutinatsiooni, mida tavaliselt täheldatakse teiste kandjate puhul.

TPPA-d kasutatakse patogeense treponema erinevate liikide ja alamliikide antikehade seroloogiliseks diagnoosimiseks. Seda testi saab kasutada süüfilise, pint, bejeli ja yaws patogeenide antikehade tuvastamiseks.

Uurimisprotseduur on väga lihtne ega vaja erivarustust – kasutatakse standardseid U-kujulisi mikroplaate. Test põhineb T. pallidum'i antigeenidega, patsiendi vereseerumis sisalduvate antikehadega, sensibiliseeritud želatiiniosakeste aglutinatsioonil.

TPPA on kinnitav treponemaalne test, mis on kasulik nii väikese proovi testimiseks kui ka massisõeluuringuks. Välismaal kasutatakse TPPA-d kinnitava testina ja mikrohemaglutinatsiooni testi MHA-TP (microhemaglutination assay for antibodies to T. pallidum) asendamiseks.

TPPA testi tundlikkus on 85–100% ja spetsiifilisus 98–100%. TPPA tundlikkus jaoks primaarne süüfilis- 88%, sekundaarse ja hilise latentse süüfilise korral 98% -100%.

Kui süüfilise diagnoosimiseks kasutatakse TPPA-d, võivad teiste treponeemide (nt T. pallidum endemicum, pertenuum või carateum) vastased antikehad põhjustada valepositiivseid tulemusi. Nende antikehade eemaldamiseks seerumiproovidest enne testimist on saadaval mitmeid meetodeid.

TPPA testi põhimõte

TPPA on meetod želatiiniosakeste passiivseks aglutineerimiseks inimese seerumis või plasmas. Patogeense treponema antikehi sisaldav seerum reageerib želatiiniosakestega, mis on sensibiliseeritud kahvatu treponema tüve Nicholsi antigeeniga, allutatud ultraheliuuringule. Reaktsiooni tulemusena moodustub mikrotiiterplaadi süvendis aglutineerunud želatiiniosakestest sile kile.

Kui antikehad puuduvad, settivad osakesed plaadi süvendi põhja, moodustades aglutineerimata osakestest kompaktse “nupu”. Sensibiliseerimata želatiiniosakestega kontrollsüvendid peaksid samuti näitama iga seerumi jaoks seda kompaktset „nuppu”, st aglutinatsiooni ei esine.

TPPA testi rakendamine

TRPA on universaalne test, mida saab võrdselt edukalt kasutada nii elanikkonnarühmade kohustuslikul süüfilise ennetusuuringul (sõeluuringul) kui ka spetsialiseeritud dermatoveneroloogiaasutustes. TPPA testi eeliseks on selle kõrge tundlikkus, mis ei jää alla klassikalistele testidele, mis kuni viimase ajani olid süüfilise serodiagnostika “kuldstandard”. Testi eelisteks on ka kõrge reprodutseeritavus, samuti reaktsiooni seadistamise lihtsus ja kiirus.

TPPA testi kasutatakse mittetreponemaalse süüfilise sõeluuringu (nt VDRL-testi) positiivsete tulemuste kinnitamiseks ja patsientide hindamiseks, kelle mittetreponemaalse testi tulemused on negatiivsed, kuid kellel on hilisele süüfilisele viitavad nähud või sümptomid. TPPA kasutamine ainsa süüfilise sõeltestina ei ole soovitatav.

Lisaks saab TPPA aglutinatsioonitesti kasutada tserebrospinaalvedeliku proovide uurimiseks neurosüüfilise diagnoosimisel. Sel juhul, nagu ka teiste seroloogiliste testide puhul, tuleb tulemuste tõlgendamine läbi viia kohustuslikus kombinatsioonis haiguse muude näitajate ja sümptomitega.

TPPA testi tulemused

Tulemust hinnatakse plusside süsteemi järgi - (–) kuni (2+). Katsetulemused on nähtavad palja silmaga ja neid tõlgendatakse järgmiselt:

Tulemusi võetakse arvesse ülaltoodud kirjeldusele vastavuse määramisel. Proovid, mis näitavad määramatut tulemust (±), tuleb uuesti testida. Kui proov näitab mitmes TPPA testis ebamäärast tulemust, on soovitatav testida muude meetoditega.

Analüüsi tulemusi ei tohiks vaadelda eraldiseisvana. Näiteks nakatumise algstaadiumis on antikehade hulk veel liiga väike, mistõttu puudub TPPA ja paljude teiste meetodite tundlikkus. Seetõttu tuleb süüfilise kahtluse korral proove uuesti analüüsida, isegi kui testi tulemused on negatiivsed. Diagnoosi tegemiseks on vaja arvesse võtta patsiendil esinevaid kliinilisi sümptomeid, kliiniline ajalugu ja muud andmed.

Sarnaselt RPHA-reaktsiooniga võib TPPA-l ilmneda prosooninähtus ja valenegatiivne tulemus, kui seerumiproov sisaldab liiga kõrget antikehatiitrit.

ELISA – ensüümi immuunanalüüs

Seotud immunosorbentanalüüs(ELISA; Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, ELISA) on üks paljudest nakkushaiguste seroloogilise diagnoosimise meetoditest. Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) süüfilise serodiagnostikas on M-, G- ja A-klassi antikehade (IgM, IgG, IgA) test Treponema pallidum'i antigeenide suhtes. ELISA-d on võimalik teha tserebrospinaalvedelikuga.

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) kasutuselevõtt Wassermani reaktsiooni ja teiste kardiolipiinitestide asemel on oluliselt parandanud süüfilise laboratoorse diagnoosimise kvaliteeti. Selle meetodi oluliseks eeliseks on võime automatiseerida uurimisprotsessi, mis vähendab inimfaktori mõju.

1. ELISA meetodi ajalugu

Tahkefaasilise kandja pinnal tehtava ensüümi immuunanalüüsi põhiprintsiibid töötasid välja E. Engvar ja kaasautor. (1971), B. Van Weeman ja A. Schuurs (1971). Nende välja töötatud ensüümi immuunanalüüsi pakkusid esmakordselt süüfilise diagnoosimiseks 1975. aastal J. Veldkamp ja A. Visser, kes hindasid selle automatiseeritud testi potentsiaali. ELISA-d hakati süüfilise diagnoosimisel laialdaselt kasutama 1980. aastatel, mil töötati välja ja sertifitseeriti diagnostilised testid ning standardiseeriti testimismeetodid. NSV Liidus töötasid ELISA meetodi süüfilise diagnoosimiseks välja V. N. Bednova, A. V. Babiy ja A. V. Kotrovsky (1982, 1983).

2. ELISA meetodi põhimõte

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) on reaktsioonimehhanismi poolest sarnane RIF-iga (tuvastatakse samad antikehad). Ensüümi immuunanalüüsi reaktsioon klassifitseeritakse immunoloogiliseks reaktsiooniks, mis põhineb treponema pallidum'i antigeenide väga spetsiifilisel interaktsioonil süüfilisega patsiendi antikehadega.

Süüfilidoloogilises praktikas kasutatakse peamiselt ELISA kaudset versiooni. Kõige sagedamini kasutatava kaudse reaktsiooni põhimõte on järgmine. Polüstüreentableti süvendite pinnale on fikseeritud immuunkompleksid, mis tekivad süüfilisehaige antikehade interaktsioonil Treponema pallidum antigeenidega. Pärast seda tuvastatakse need värvireaktsioonis, kasutades spetsiifilisi konjugaate ja sobivaid substraat-kromogeenseid lisandeid.

Testi läbiviimise protseduur on järgmine: patsiendi seerum asetatakse tahkefaasilisele kandjale, millele on kinnitatud antigeen. Kui selles on antikehi, moodustub kandja pinnale antigeen-antikeha kompleks. Reaktsiooni tulemuste "avaldamiseks" kasutatakse inimese Ig-vastaseid antikehi, mis on konjugeeritud ensüümmarkeritega. Positiivse reaktsiooni korral lagundab antigeen-antikeha kompleksiga seotud ensüüm süsteemi lisatud substraadi, mille tulemusena tekib erineva intensiivsusega värvumine.

Reaktsioonis tehakse tahkel faasil sorbeeritud AG ja AT kompleksi määramine ensüümiga märgistatud antiglobuliini antikehade abil, mis põhineb ensüümi värvusreaktsioonil substraadiga.

Reaktsioonis määratakse tahkel faasil sorbeeritud antigeenide ja antikehade kompleks, kasutades ensüümiga märgistatud antiglobuliini antikehi.

ELISA võimaldab tuvastada erinevate klasside seerumi Ig-sid. Turul on süsteeme, mis võimaldavad teil eraldi määrata IgM ja IgG ning koguantikehi.

ELISA jaoks kasutatavad spetsiifilised antigeenid võivad olla erineva päritoluga:

ultra-hääl- need saadakse bakteriraku T. pallidum hävitamisel ultraheli või muul meetodil;

rekombinantne- need saadakse geenitehnoloogia tehnoloogiate abil, lisades bakteriraku (näiteks E. Coli) genoomi geeni, mis vastutab spetsiifilise T. pallidum'i antigeeni sünteesi eest, millele järgneb tootva raku bakterimassi suurenemine. mikroorganism, nende rakkude hävitamine, antigeeni eraldamine ja puhastamine;

peptiid- saadud järjestikuse tulemusel keemiline süntees T. pallidum valkude antigeensed epitoobid.

Keha on võimeline moodustama antikehi peaaegu iga antigeeni molekuli osa vastu. Normaalse immuunvastuse korral seda tavaliselt ei juhtu. Ühel või mitmel valguantigeenist eraldatud immunogeensel peptiidil on eriline antigeensus ja enamik antikehi moodustub spetsiifiliselt nende vastu. Neile areneb kõige intensiivsem immuunvastus. Treponema pallidum valkude immunodominantsed piirkonnad koos molekulmass 15 kD, 17 kD ja 47 kD. Antigeenina kasutati Nicholsi tüve patogeensete treponeemide pesuaineekstrakti või sonikaati.

3. Uurimistöö läbiviimise meetod meetodil

Meetodi põhimõte on tuvastada tahkel faasil (plastplaadi süvendite pinnal) sorbeeritud spetsiifiline antigeen-antikeha kompleks ensüümiga (peroksidaasiga) märgistatud antiglobuliini antikehadega, kasutades substraadiga värvireaktsiooni. arvestada kvantitatiivselt spektrofotomeetriliselt.

Polüstüreenplaadi süvendite sensibiliseerimiseks kasutatavad antigeenid võivad olla:

• lüsaat- saadud Treponema pallidum'i ultraheliga hävitamise tulemusena;
• peptiid- saadud Treponema pallidum valgu fragmentide keemilise sünteesi tulemusena ja millel on patogeeni algsete valkudega sarnane antigeenne reaktiivsus;
• rekombinantne- saadud geenitehnoloogia meetoditega, sisaldades Treponema pallidumiga identseid antigeenseid determinante.

Süüfilidoloogilises praktikas kasutatakse tavaliselt ELISA kaudset versiooni.

4. Tulemuste arvestus

ELISA-s reageerib antigeen-antikeha reaktsiooni visualiseerimiseks ensüüm (leeliseline fosfataas või mädarõika peroksidaas) substraadiga, mis muudab värvi. Värvi intensiivsus määrab reaktsiooni positiivsuse (“–” kuni “++++”). ELISA tulemusi saab hinnata visuaalselt, kasutades 4-punktilist süsteemi või instrumentaalselt digitaalsete optilise tiheduse indikaatorite kujul, mis saadakse spetsiaalsetel lugejatel (nt Multiscan) lainepikkusel 492 nm. Sest Tulemusi hinnatakse spektrofotomeetriliselt, see välistab subjektiivse tõlgendamise.

5. Millistel haigusperioodidel on parem kasutada

ELISA positiivsuse ajastus on alates 4. nädalast pärast nakatumist. ELISA (nagu ka RIF) tulemused muutuvad positiivseks esmase perioodi esimestel päevadel või inkubatsiooni lõpus ja jäävad positiivseks kõigil perioodidel. ELISA on eriti väärtuslik varajane diagnoosimine süüfilis - positiivseid antikehade tuvastamise tulemusi võib saada juba haiguse inkubatsiooniperioodi lõpus (st 4–6 nädalat pärast nakatumist).

6. Tundlikkus ja spetsiifilisus

ELISA on väga tundlik ja spetsiifiline test, mis on selle eelis. ELISA on reaktsioonimehhanismi, tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest lähedane RIF-ile, sest Mõlemas reaktsioonis osalevad samad antikehad. Enamik teadlasi märgib kõrget spetsiifilisust ja tundlikkust haiguse kõigil etappidel. Tundlikkus erinevaid valikuid ELISA saavutab G. A. Dmitrievi sõnul 98–100% ja spetsiifilisus 96–100%. TsNIKVI andmetel on ELISA tundlikkus süüfilise suhtes 99,1% (Vene Föderatsiooni korraldus nr 87 M3).

Tahkefaasiline ELISA variant (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) on üks tundlikumaid seroloogilisi reaktsioone, mis võimaldab tuvastada 0,0005 μg/ml antikehi ja 0,000005 μg/ml antigeene.

7. Meetodi rakendusala

Meetodit soovitatakse kasutada rasedate naiste uurimisel, kontaktisikud, doonorid ja riskirühmade esindajad. ELISA-t saab kasutada nii sõeluuringu kui ka kinnitava testina. ELISA on suhteliselt lühikese ajaloo jooksul arenenud indikatiivsest testist kinnitavaks testiks. Süüfilise diagnoosimisel kasutatakse testi ka kinnitava testina proovide puhul, mis näitavad positiivseid tulemusi erinevate mittetreponemaalsete testide ja RPGA abil.

ELISA meetodit saab kasutada kvantitatiivses versioonis koos positiivsuse ehk reaktiivsuse indeksi arvutamisega, mis võimaldab hinnata antikehade taset proovis.

Praegu reguleerib Venemaal ensüümimmuunanalüüsi kasutamist süüfilise diagnoosimisel Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi 26. märtsi 2001. aasta korraldus nr 87 “Süüfilise seroloogilise diagnoosimise parandamise kohta” (lisa nr 1 “ Süüfilise sõeluuringu ja diagnostiliste testide määramine). Tellimuses on kavas asendada RSC seroreaktsioonide kompleksis (SRC) ELISA ja RPGA-ga.

8. Tootmisel tekkivate vigade allikad ja põhjused, valepositiivsed ja valenegatiivsed tulemused

Ensüüm-immunoanalüüs on keeruline mitmeetapiline uuring, mille käigus on vaja rangelt järgida kõiki diagnostikakomplektide tootjate soovitusi, uuringus kasutatud seadmete reguleerimise ja konfigureerimise reegleid.

ELISA tegemisel võivad vigade allikad olla järgmised:

Hüperlipideemilise, hemolüüsitud vereseerumi või bakterite kasvu tunnustega proovide reaktsiooni uurimine;

Ärge harjutage bioloogilise materjali proovi külmutamist kaks või enam korda, vajadusel korrake uuringut, kasutage seerumit dubleeritud katseklaasist;

Immunosorbendi ja pesulahuse säilitamise tingimuste ja tingimuste rikkumine; aegunud testikomplektide kasutamine;

Reaktsioonikomponentide kasutamine muudest diagnostikakomplektidest;

Reaktsioonietappide ajastuse rikkumine;

Immunoloogilise plaadi süvendite kuivatamine reaktsioonietappides;

Plastnõude (plastist kandikute) taaskasutamine kromogeeni ja substraadi segu valmistamiseks;

Kasutatavate seadmete (seib ja spektrofotomeeter) tööparameetrite metroloogilise kontrolli sageduse mittejärgimine;

Saastunud laboriklaaside kasutamine reaktsioonide seadistamisel: kolvid, mõõtsilindrid, katseklaasid, pipetid, pipetiotsad;

Bioloogilise materjali proovide lahjendamise ebapiisav põhjalikkus;

Vead bioloogilise materjali proovi sisestamisel plaadi vastavasse süvendisse;

Vead uuringutulemuste kandmisel registreerimispäevikusse, uuringuprotokolli või vastusevormi.

Diagnostiliste testikomplektide kasutamise juhendi soovituste hoolikas rakendamine, pipetidosaatorite ja automaatsete seadmete täpsuse regulaarne kontrollimine ning sisemiste positiivsete ja negatiivsete kontrollide kasutamine võimaldab saada ELISA testi tulemusi suure reprodutseeritavusega.

9. Omadused, eelised ja puudused

ELISA on oma lihtsuse, reprodutseeritavuse ja ligipääsetavuse tõttu kaasaegne ja paljutõotav meetod süüfilise serodiagnostikaks. Antikehade määramine ELISA abil on ideaalne diagnostiline meetod, mis sobib suure hulga proovide samaaegseks uurimiseks. Oma eeliste tõttu on see populaarsust kogunud kõigis riikides.

ELISA uurimistehnoloogia nõuab kõigi kaubanduslike diagnostiliste testikomplektide tootjate soovituste järgimist ja uurimisprotseduuri põhjalikkust. ELISA uuringute läbiviimiseks on vaja osta täiendavaid spetsiaalseid seadmeid. Lavastustehnika võtab RMP, RPR ja RPGA-ga võrreldes kauem aega.

Mitme etapi või kogu protsessi kui terviku automatiseerimise olemasolu võimaldab teil üheaegselt õppida suur hulk bioloogilise materjali proovid koos uuringu kõrge standardiseerituse astmega, subjektiivse elemendi minimeerimine tulemuste hindamisel, fikseeritud uuringuprotokollide salvestamise võimalus, mis võimaldab uuringuandmeid arhiveerida ja neile tagasiulatuva analüüsi jaoks uuesti juurde pääseda.

Eelised:

• Võimaldab süüfilise tekitaja vastaste IgM ja IgG antikehade diferentseeritud ja täielikku määramist.
• kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus läheneb 100%
• reprodutseeritavus
• automatiseerimisvõimalused

ELISA eelised hõlmavad kõrget spetsiifilisust (96-100%) ja tundlikkust (98-100%), mida märkis enamik teadlasi.

Mitme etapi või kogu protsessi kui terviku automatiseerimise olemasolu võimaldab samaaegselt uurida voogu suure hulga bioloogilise materjali proovidega koos uuringu kõrge standardiseerimisega, minimeerides subjektiivse elemendi tulemuste hindamisel. , võimalus salvestada fikseeritud uurimisprotokolle, mis võimaldab teil uurimisandmeid arhiveerida ja neile tagasiulatuva analüüsi jaoks uuesti juurde pääseda.

Manuaalsete meetodite, sealhulgas T. pallidum'i antigeenide vastaste antikehade määramise ELISA abil, olulised puudused on:

~ võimalikud kaadrivead uurimistöö käigus (järelvalve, hooletus, tehnoloogia rikkumine);

~ uurimisprotsessi täieliku standardimise võimatus ELISA manuaalse versiooniga;

~ personali suurenenud nakatumisoht.

10. Meetodi modifikatsioonid

Koos klassikalise kaudse ELISA-ga meetod lõksu ELISA. Selle pakkusid 1989. aastal välja O. E. Ijsselmudien jt. tuvastada Tr antigeenide vastaseid IgM antikehi. pallidum. Meetod on kõrge spetsiifilisuse ja tundlikkusega.

Klassi M inimese immunoglobuliinide vastased puhastatud antikehad sorbeeritakse plaadi süvendite pinnale ja pärast testitava seerumi inkubeerimist seondub kogu IgM kandjaga. Antigeenispetsiifilise Tr olemasolu seotud IgM-i hulgas. pallidum tuvastatakse Tr abil. pallidum konjugeeritud ensüümiga.

See meetod võimaldab tuvastada mitte ainult IgM klassi, vaid ka IgG ja IgA klassi antikehi. Selleks sensibiliseeritakse plaatide süvendid teatud klassi inimese immunoglobuliinide vastaste afiinsuspuhastatud antikehadega. Sel juhul püütakse selle klassi antikehad seerumist ja treponemispetsiifiliste antikehade tuvastamine viiakse läbi, ühendades need konjugaadiga, mis esindab treponemaalse antigeeni seost ensüümiga.

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi püünisversiooni kasutamine vähendab reumatoidverefaktori poolt vahendatud valepositiivsete reaktsioonide riski, M ja G klassi immunoglobuliinide ristreaktsioone. Vastsündinute uurimisel antud juhul valepositiivne test Samuti on välistatud tulemused, mis on seotud ema treponemaalse IgG vastu suunatud IgM tuvastamisega.

ELISA-uuringud on leidnud laialdast kasutamist välismaal. ensüümi immuunanalüüs (EIA) ja süsteem ICE süüfilis. Viimases sorbeeritakse plaadi rakkudes IgM-i ja IgG-vastaste antikehade segu, samuti kolm T. pallidum'i rekombinantset valku. Positiivseid tulemusi testitakse samas testimissüsteemis kahes eksemplaris, et saada lõpptulemus.

Venemaal on kodumaiste reaktiividega ELISA meetodil süüfilise serodiagnostikaks välja töötatud mitmeid katsesüsteeme. Nendel süsteemidel on kõrge spetsiifilisus ja tundlikkus.

Lisaks eelmainitule on ka teisi ELISA võimalusi, sealhulgas neid, mis võimaldavad otsest patogeeni tuvastamist verest (otsene ELISA), punkt-ELISA reaktsiooniga nitrotselluloosi ribadel, ELISA kapillaarverega, samuti immunoblotanalüüs, või Western blot, millega samaaegselt tuvastatakse patogeeni erinevate komponentide AT.

ELISA kaasaegne täiustatud modifikatsioon on immunoblotanalüüs.

ICA (immunokemiluminestsentsanalüüs), ICL (immunokemiluminestsentsanalüüs)

Vene Föderatsiooni tervishoiu moderniseerimise kontekstis laboridiagnostika arenguga on laborite praktikasse jõudnud laboriuuringute automatiseerimine, mis võimaldab standardiseerida uuringute analüütilisi etappe. See aitab parandada diagnoosi kvaliteeti. Automatiseerimise kasutuselevõtuga hakati kasutama uusi kõrgtehnoloogilisi kõrge tundlikkuse ja spetsiifilisusega meetodeid, nagu kemoluminestsents-immunoanalüüs (CLIA)

Kemiluminestsents on footonite emissiooniprotsess oksüdatiivsete keemiliste reaktsioonide elektrooniliselt ergastatud produktide üleminekul nende algsesse energiaolekusse. Kemoluminestsentsreaktsiooni käigus vabaneb märkimisväärne kogus energiat ja kiiratava valguse kvantsaagis on üsna kõrge. Kõigist mitteisotoopsetest meetoditest tagab kemoluminestsents kõrgeima tundlikkuse. Immunomeetriliste meetodite puhul on kemoluminestsentsi tundlikkus suurusjärkude võrra suurem kui radioimmunoanalüüsi tundlikkus.

Immunokemiluminestsentsi (ICL) meetodit on praegu kasutatud kasvajamarkerite, autoimmuunhaiguste, diabeedi, südamemarkerite, hormoonide (kilpnääre, neerupealised, nais- ja meessuguhormoonid), tõrvikuinfektsioonide, viirushepatiidi ja herpesviiruste diagnoosimisel.

Immunokemiluminestsentsmeetodi põhjal on süüfilise diagnoosimiseks välja töötatud mitmeid ülitundlikke ja spetsiifilisi (98-100%) testisüsteeme, mida kasutatakse peamiselt välismaal.

Meetod kasutab antigeenidena geenitehnoloogia meetoditega saadud rekombinantseid lipoproteiine, mis on T. pallidum antigeenide täielikud analoogid.

Kliinilise uuringu tulemustel põhinev ICA-meetod on pälvinud tunnustuse ja seda soovitatakse kasutada süüfilise laboratoorsel diagnoosimisel. Venemaa Föderatsioon sõeluuringu ja kinnitava testina, kui laboritel on olemas vastav varustus. 2012. aastal lisati ICA sugulisel teel levivate ja urogenitaalinfektsioonidega patsientide ravimise kliinilistesse juhistesse süüfilise diagnoosimise sõeluuringu ja kinnitava testina.

Seega pakub kõrgtehnoloogilise ICA kasutamine, mis on automatiseerimise kasutuselevõtuga saanud osaks nii globaalse kui ka kodumaise laboridiagnostika praktikast, järgmised eelised:

• subjektiivsete tegurite mõju kõrvaldamine uuringu analüütilises etapis
• personali ohutus potentsiaalselt nakatunud bioloogilise materjali uurimisel
• patsiendi tulemuste saamise kiiruse suurendamine
• õppetöö standardimine ja õppekvaliteedi kontroll
• pakkuda patsientidele usaldusväärseid tulemusi
• kliiniliste laboratoorsete uuringute kõrge kvaliteet.

Tundlikkuselt on ICA meetod võrreldav radioimmunoanalüüsi meetodiga ning teostamise lihtsuse, personali ohutuse ja paljude muude parameetrite poolest ületab seda.

Kõrge tundlikkuse ja spetsiifilisusega (98–100%) ICA meetod võimaldab kvantitatiivselt määrata süüfilise tekitaja vastaste antikehade taset ning seda saab kasutada süüfilise infektsiooni kinnitamiseks ja sõeluuringuks. Kasutuspiirangud: ei saa kasutada ravi efektiivsuse jälgimiseks, võib anda valepositiivne tulemus.

Immunokromatograafia (ICH).

Immunokromatograafia (ICH) meetoditel põhinevad treponeem-spetsiifiliste antikehade tuvastamise meetodid on Vene Föderatsioonis kasutamiseks suhteliselt uued. Nagu ICA meetodi puhul, kasutatakse antigeenidena geenitehnoloogia meetoditega saadud rekombinantseid lipoproteiine (näiteks: antigeenid Tp15, Tp17, Tp47) ja biosünteetilist peptiidi TmpA. Loetletud antigeene kasutatakse ka erinevates kombinatsioonides immunosorbentide osana ELISA ja immunoblotanalüüsis.

ICG meetod võimaldab kiiresti määrata süüfilise tekitaja vastaste treponeem-spetsiifiliste antikehade sisaldust seerumi- ja täisvereproovides ilma spetsiaalseid laboriseadmeid kasutamata ning seda kasutatakse esmatasandi tervishoiuteenuste osutamisel, sealhulgas epidemioloogiliste näidustuste korral.

Kasutuspiirangud: ei saa kasutada ravi efektiivsuse jälgimiseks, võib anda valepositiivse tulemuse.

PBT (lihtsad kiirtestid voodi kõrval)

Suhteliselt hiljuti on süüfilise serodiagnostikas hakatud välja töötama nn lihtsaid kiirteste (SRT) ehk vooditeste (Point-of-care – POC). Lihtsad kiirtestid ehk immunokromatograafilised testid võimaldavad kiiresti määrata süüfilise tekitaja vastaste treponeemspetsiifiliste antikehade sisaldust seerumi- ja täisvereproovides ilma spetsiaalseid laboriseadmeid kasutamata ning neid saab kasutada esmatasandi tervishoius, sh. epidemioloogilised näidustused. Kasutuspiirangud: ei saa kasutada ravi efektiivsuse jälgimiseks, võib anda valepositiivse tulemuse.

Need testid põhinevad Treponema pallidum'i treponemaalsete antigeenide vastaste antikehade immunokromatograafilisel määramisel ja tehakse ribadel; sel juhul võib kasutada nii täisverd kui ka seerumit (Herring A., Ballard R. et al, 2006). Testiformaat võimaldab uuringuid läbi viia eriseadmete puudumisel ja elektrit kasutamata. Kuid suhteliselt madala tundlikkuse ja spetsiifilisuse tõttu ei ole need testid veel oma leidnud lai rakendus praktikas.

Immunoblotanalüüs (Western Blot)

Viimastel aastatel on ilmunud uurimismeetodid, mille eesmärk on tuvastada ja analüüsida antikehade sisaldust igale antigeenile Treponema pallidum eraldi. Üks neist meetoditest on immunoblotanalüüs (või blotanalüüs, immunoblotanalüüs, Western blot), mida kasutatakse Treponema pallidum'i IgG või IgM antikehade määramiseks. Immunoblotanalüüsi meetod on ensüümi immuunanalüüsi modifikatsioon - ELISA variant.

Immunoblotanalüüs on üks kaasaegsemaid süüfilise serodiagnostika meetodeid ja seda kasutatakse aktiivselt välismaal. See sai oma nime ("Western blot") humoorika vastusena DNA ("Southern blot") ja RNA ("Northern blot") määramise tehnikate nimedele.

1. Meetodi ajalugu

Immunoblotimist (Western blot) kasutatakse Treponema pallidum'i antigeenide IgG või IgM antikehade määramiseks (Herremans M. et al., 2007).

2. Klassikaline immunoblot

Klassikaline immunoblot(Western Blot Analysis) ühendab ensüümi immuunanalüüsi ja elektroforeetilise meetodi kasutamise. Süüfilise põhjustaja antigeenvalgud eraldatakse eelnevalt elektroforeesiga ja viiakse kandjale - nitrotselluloosmembraanile (ribale). Seda ülekandmist nimetatakse blottinguks. Seejärel töödeldakse seda eraldatud punktidega (blotidega) kandjat testitava seerumi ja IgG või IgM antikehadega, mis on märgistatud ensüümide või radioaktiivsete ainetega. Meetod hõlmab looduslike või rekombinantsete treponema valkude kasutamist.

Elektroforees on laetud ühendite eraldamine nende liikuvuse alusel elektroforeetilises väljas. Kui keskkonnas rakendatakse potentsiaalide erinevust, liiguvad positiivselt laetud molekulid negatiivselt laetud elektroodi poole ja negatiivselt laetud molekulid positiivse elektroodi poole.

Enamik globulaarseid valke on kokku pandud nii, et enamik laetud rühmi, nimelt hüdrofiilsed, paiknevad valgu pinnal, samas kui laenguta hüdrofoobsed jäägid on põimitud gloobuli sisemusse. Elektriväljas migreeruvad valgud vastavalt nende laengule vastupidiselt laetud elektroodi suunas.

Valkude elektroforeetiline eraldamine viiakse läbi polüakrüülamiidil põhinevas sünteetilises geelkeskkonnas. Valkude eraldamiseks nende molekulmassi järgi eelinkubeeritakse valgusegu enne elektroforeesi naatriumdodetsüülsulfaadi (SDS) juuresolekul.

Välisteadlaste Weberi ja Osborni (1969) üksikasjalikud uuringud näitasid, et pärast sellist töötlemist on ainsaks teguriks, mis võib mõjutada valkude liikuvust polüakrüülamiidgeelis (PAGE), valgu suurus, õigemini selle molekulmass. See võimaldas kasutada PAGE elektroforeesi meetodit SDS-i juuresolekul valkude ja peptiidide molekulmassi üsna täpseks määramiseks. Väliskirjanduses nimetati seda meetodit SDS-PAGE (naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforees).

Reaktiivsuse profiil klassikalises WB testis looduslike antigeenidega (naatriumdodetsüülsulfaatpolüakrüülamiidi geelelektroforeesi meetod). (1) - kontroll positiivne tulemus, (2) - kontroll negatiivne tulemus, (3-6) - kliinilised proovid.

Seda meetodit kasutavates süüfilise testides teostatakse Treponema pallidum, mis on eelnevalt puhastatud ja selle koostisosadeks hävitatud, elektroforeesi polüakrüülamiid- või agaroosgeelis. Sel juhul eraldatakse selle koostises olevad antigeenid molekulmassi järgi.

Seejärel kantakse antigeenid vertikaalse elektroforeesi abil nitrotselluloosi ribale, mis sisaldab nüüd Treponema pallidumile iseloomulikku silmale nähtamatute antigeensete ribade spektrit.

Analüüsi tegemisel kantakse uuritav materjal (seerum, patsiendi vereplasma jne) nitrotselluloosribale (ribale). Kui proovis on spetsiifilisi antikehi, seostuvad need inkubatsiooniprotsessi käigus tugevalt rangelt vastavate (komplementaarsete) antigeensete ribadega ja moodustavad “antigeen-antikeha” kompleksi.

Pärast sidumata immunoglobuliinide eemaldamist riba pesemise ajal järgneb inkubeerimine konjugaadiga - inimese immunoglobuliinide ensüümiga märgistatud antikehad (inimese IgG või IgM antikehad), mille käigus kinnituvad ensüümiga märgistatud antikehad olemasolevate antigeen-antikeha komplekside külge. membraan.

Pärast seondumata konjugaadi eemaldamist substraadilahusega inkubeerimisel interakteerub ensüüm substraadiga, mille tulemuseks on värvireaktsiooni tekkimine - membraanipiirkondade värvumine (triipude kujul), kus paiknevad üksikud treponema pallidum antigeenid, antikehad, mille vastu olid testitavas seerumis. Värvimise intensiivsus sõltub seerumist seotud antikehade hulgast. Reaktsiooni tulemust hinnatakse visuaalselt.

Ribade olemasolu nitrotselluloosplaadi teatud piirkondades kinnitab Treponema pallidum'i rangelt määratletud antigeenide antikehade olemasolu testitud seerumis.

Selle meetodiga määratud immunodeterminantidel 15, 5, 17, 44,5, 47 kD on süüfilise puhul diagnostiline tähtsus. Ig G immunoblotanalüüs on tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest sarnane absorptsiooniga RIF-iga (RIF abs). Ig M immunoblotanalüüs võib olla kaasasündinud süüfilise diagnostiline test.

3. Immunoblot lineaarse immuunanalüüsi vormingus

Lineaarne immunoloogiline analüüs(line immunoassay, LIA) võimaldab samaaegselt määrata Treponema pallidum'i antigeenide vastaseid antikehi inimese seerumis või plasmas. Antigeenid kantakse eelnevalt testribadele, mis tarnitakse kaubanduslike diagnostikakomplektide osana.

Ribad on valmistatud nitrotselluloosmembraanist, plastalusega polüamiidist või plastikust tagaküljega nailonmembraanist. Valmistamise ajal asetatakse testribale mitu eraldiseisvat antigeeni eraldi antigeensete joonte kujul. Lisaks nendele süüfilise antigeenidele kantakse igale ribale veel neli kontrolljoont: streptavidiin ja kontrollproovid (3 +, 1 + ja ± lõikejoon).

Ribadel kasutatakse geenitehnoloogia meetoditega saadud kunstlikke antigeene – rekombinantseid valke või sünteetilisi polüpeptiidkonstruktsioone. Need on Treponema pallidum'i pinnaantigeenide - TpN15, TpN17, TpN47 ja TmpA analoogid molekulmassiga 15, 17, 47 kDa ja 44,5 (TmpA), kus kDa = kilodaltonid. Nende abiga määratakse patogeeni erinevate immunodominantsete komponentide seerumi antikehad.

Uuritavat proovi inkubeeritakse küvetis, kuhu asetatakse ka indikaatorriba. T. pallidumi vastased antikehad määratakse testribadele kantud antigeenidega seondumise teel. Kui proovis esinevad T. pallidum-spetsiifilised antikehad, moodustavad need sidemed erinevate antigeeniliinidega. Kui testitavas seerumis sisalduvad antikehad interakteeruvad testribale asetatud diskreetsete T. pallidum'i antigeenidega, moodustub antigeen-antikeha kompleks visuaalselt tuvastatavate värviribade kujul.

Võttes arvesse immunoblotanalüüsi tulemusi, hinnatakse seerumi reaktsioonivõimet iga antigeeni suhtes eraldi. Täielikult positiivne vastus antakse, kui tulemus saadakse samaaegselt kahe või kolme esitatud antigeeniga.

Uurimisprotseduurid viiakse läbi käsitsi või spetsiaalsel analüsaatoril, tulemuste tõlgendamisel kasutatakse spetsiaalset nakkushaiguste arvutiprogrammi.

Tänu rekombinantsete antigeenide kõrgele puhastusastmele ja süüfilise põhjustaja kõige immunogeensemate determinantide vastaste antikehade samaaegsele tuvastamisele on meetodil kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus.

4. Tulemuste arvestus

Antigeensete ribade värvimise intensiivsuse lugemiseks ribadel on välja töötatud fotomeetrid, mille töö põhineb signaali peegeldumisel, mis välistab subjektiivse hinnangu ja annab võimaluse automatiseerimiseks.

5. Millistel haigusperioodidel on parem kasutada

Immunoblotimist kasutavad testid võivad tuvastada Treponema pallidum'i antigeenide spetsiifilisi antikehi haiguse väga varases staadiumis. Süüfilise diagnoosimisel on kõige olulisemad antikehad Treponema pallidum'i antigeenide TpN15, TpN17, TmpA ja TpN47 vastu. Need antigeenid on membraanivalgud, mille molekulmass on vastavalt 15, 17, 44,5 ja 47 kDa.

Kui Treponema pallidum viiakse inimkehasse, tekivad antisüüfilised antikehad sellises järjekorras: esmalt tekib immuunvastus TpN17 antigeenidele, seejärel TpN47, pärast TpN15 ja hiljem kogu TmpA vastu. Testi tulemuste arvessevõtmisel hinnatakse seerumi reaktsioonivõimet igaühe suhtes eraldi. Näiteks kui lineaarne blot näitab reaktiivsust ainult antigeeniliinide TpN17 ja TpN47 suhtes, tähendab see, et haigus on varases staadiumis. Mida rohkem antigeeniliinid muutuvad reaktiivseks, seda kaugemale infektsioon areneb. Süüfilise ravimisel muutub selle testi reaktsioonivõime.

IgM määramine valkudele molekulmassiga 15,17, 41, 47 kDa võimaldab tuvastada 29,2% sekundaarse süüfilisega, 12,5% varajase latentse süüfilise ja 8,0% seroresistentsusega patsientidest. IgG otsimist samade molekulide suhtes iseloomustab tundlikkus 61,6% seroresistentsuse ja 100% sekundaarse ja varajase latentse süüfilise suhtes.

6. Tundlikkus ja spetsiifilisus

Kirjanduse andmetel on testi tundlikkus ja spetsiifilisus väga kõrged - vastavalt 99,6-100 ja 99,3-99,5%. Klassikalise meetodi puhul saavutatakse see valkude, glüko- ja lipoproteiinide elektroforeetilise eraldamise ning immuunseerumi tuvastamise maksimaalse spetsiifilisusega või monoklonaalsed antikehad. Optimaalsetes tingimustes võib immunoblotanalüüs tuvastada antigeeni koguses, mis on väiksem kui 1 ng testitavas mahus.

Lineaarse bloti tundlikkus on samuti 99,6% ja spetsiifilisus jääb vahemikku 99,3% kuni 99,5%.

Ekspertide sõnul on immunoblotanalüüs rekombinantsete väga spetsiifiliste antigeenidega tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest sarnane RIF-absidega.

Väliskirjanduse andmetel ja TsNIKVI-s läbiviidud uuringu tulemustel on immunoblotanalüüsi meetod süüfilise diagnoosimisel kõrge tundlikkusega (98,8-100%) ja spetsiifilisusega (97,1-100%).

7. Meetodi rakendusala

Immunoblotanalüüs (immunoblot) on väga spetsiifiline ja väga tundlik võrdlusmeetod. Kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus võimaldavad seda meetodit pidada süüfilise kinnitava testina. Meetodit saab kasutada nii diagnoosi kinnitamiseks kui ka juhtudel, kui teised treponemaalsed testid annavad küsitavaid ja vastuolulisi tulemusi. Immunoblotimise abil saate diagnoosi kinnitada patsientidel, kellel on positiivsed või ebamäärased testitulemused, sealhulgas need, mis on saadud RPGA või ELISA abil.

8. Tootmisel tekkivate vigade allikad ja põhjused, valepositiivsed ja valenegatiivsed tulemused

Valepositiivseid tulemusi on väga harva. Valenegatiivsed tulemused on samuti üsna haruldased ja neid täheldatakse immuunpuudulikkusega patsientidel - sagedamini HIV-nakkusega inimestel ja diagnostilise "akna" mõjuga antikehade sünteesi viivituse tõttu, samuti vigade korral. diagnoosimise etapis.

Kaasaegsete katsesüsteemide kasutamine eeldab kõigi nõuete ranget järgimist nii materjalile kui ka reaktsiooni läbiviimisele. Põhimõtteliselt on vigade allikaks uuringu järjekorra ja tehnoloogia rikkumine (eriti klassikalise Western blot puhul) ning testikomplektide tootjate soovituste mittejärgimine. . Vead võivad ilmneda ka seerumiproovide kogumisel, kohaletoimetamisel, säilitamisel ja testimise ajal. Lisaks kahjustatud näidistele mh võimalikud põhjused– aegunud testikomplektide kasutamine, samuti vead õppetulemuste analüüsimisel.

9. Omadused, eelised ja puudused

Immunobloti unikaalsus seisneb selle kõrges infosisalduses ja tulemuste usaldusväärsuses.

Test ei nõua kõrgelt puhastatud antigeene, võrdlus- ega kontrollseerumeid. Antikeha sihtmärgi tuvastamine põhineb valgu molekulmassil, millega patsiendi seerumis pärinevad antikehad reageerivad. Ühes reaktsioonis saab tuvastada antikeha seondumist mitme antigeeniga, millest igaüks saab täpselt iseloomustada. Tänu sellele on immunoblotimisel mitmeid eeliseid võrreldes teiste antikehade tuvastamise meetoditega, mille tulemused sõltuvad teatud antigeenide standardiseeritusest, tundlikkusest, substraadi kvaliteedist, ebastabiilsusest või lahustumatusest.

Meetod on kergesti reprodutseeritav, suhteliselt lihtne teostada ja tulemusi tõlgendada, võimaldab määrata korraga mitme T. pallidum'i antigeeni vastaste antikehade spektri ja hinnata panust üldine reaktsioon erineva spetsiifilisusega antikehad.

Kõrge puhtusega rekombinantsete ja peptiidsete antigeenide kasutamine vähendab seerumi mittespetsiifilist reaktsioonivõimet. Meetodi kasutamine võimaldab vältida uurijale ohtu kujutavaid töömahukaid ja subjektiivseid meetodeid (G. pallidum'i tüvede inokuleerimine, patogeense T. pallidum'iga töötamine reaktsiooni lavastamisel). See määrab süüfilise diagnoosimisel immunoblotanalüüsi meetodi eelistamise teistele treponemaalsetele testidele (RIF ja eriti RIBT).

10. Meetodi modifikatsioonid

Sellel meetodil põhinevad mitmed kaubanduslikud testimissüsteemid. Mõned neist on tehtud formaadis Western blot, koosnevad ribadest, millele kantakse üle T. pallidum'i valgukomponendid, mis on eelnevalt polüakrüülamiidgeelis elektroforeesiga eraldatud.

Teised on vormingus lineaarne blot, koosnevad ribadest, millele on sorbeeritud diskreetsete joontena rekombinantsed ja sünteetilised polüpeptiidid – T. pallidum, TpN15, TpN17, TpN47 ja TmpA pinnaantigeenide analoogid.

Western blot'i tulemusi on raskem tõlgendada, kuna ribadel on palju erinevaid antikehi, millest paljud on rühmaspetsiifilised. Seevastu line blot tulemuste tõlgendamine on lihtne; Lisaks võimaldavad ribale kantud täiendavad kontrolljooned poolkvantitatiivselt hinnata nelja T. pallidum'i antigeeni antikehade taset.

xMAP tehnoloogia

xMAP on kaasaegne tehnoloogia, mis võimaldab teha mitmeparameetrilisi uuringuid mitme analüüdi samaaegse tuvastamise kaudu ühes bioloogilises proovis. Tahke faasina kasutatakse värvilisi mikrosfääre, mis on kaetud püüdmisreagentidega (oligonukleotiidid, antikehad, antigeenid).

Uuritav proov lisatakse mikrosfääre sisaldavale lahusele. Proovis tuvastatud analüüdid seotakse vastava mikrosfääri külge, misjärel lisatakse lahusele tuvastusaine (tuvastusantikehad, fluorestseeruv märgis). Määratava analüüdi tuvastamiseks kasutatakse kahest laserist koosnevat süsteemi, mis võimaldab nii kvalitatiivselt hinnata analüüdi olemasolu proovis (selleks kasutatakse punast laserit, mis klassifitseerib mikrosfääre värvi järgi) kui ka kvantitatiivset. analüüdi sisalduse hindamine proovis (selleks kasutatakse rohelist laserit).

Serodiagnoosi kasutatakse süüfilise kliinilise diagnoosi kinnitamiseks, latentse süüfilise diagnoosimiseks, ravi efektiivsuse jälgimiseks kui süüfilisehaigete tervenemise üheks kriteeriumiks, süüfilise ennetamiseks (teatud elanikkonnarühmade uurimine). Seroloogilised reaktsioonid võimaldavad tuvastada immuunsüsteemi muutusi patsiendi kehas vastusena patogeeni paljunemisele selles.

Treponema pallidum'i antigeenne struktuur. Enim uuritud antigeenid on:

1) Treponema pallidum'i valgu antigeenid; sisaldavad patogeensete treponeemide ja saprofüütsete treponeemide ühist fraktsiooni, mille vastu sünteesitakse rühmaantikehi; lisaks on fraktsioon, mis on spetsiifiline ainult patogeensetele treponeemidele; Treponema pallidum'i valgu antigeenid on väga immunogeensed, nende vastased antikehad ilmuvad kehasse inkubatsiooniperioodi lõpus või esimese nädala jooksul pärast šankri tekkimist;

2) polüsahhariidse iseloomuga antigeenid; nad on madala immunogeensusega, kuna nende vastased antikehad ei saavuta märkimisväärseid tiitreid, seetõttu on nende antikehade roll süüfilise serodiagnostikas ebaoluline;

3) Treponema pallidum'i lipiidsed antigeenid; moodustavad umbes 30% raku kuivmassist; lisaks treponema pallidum lipiididele ilmub koerakkude, peamiselt mitokondriaalse membraani lipiidide, hävimise tagajärjel patsiendi kehasse suur hulk lipiidseid aineid; ilmselt on neil sama struktuur kui Treponema pallidumi lipiidantigeenidel ja neil on autoantigeenide omadused; Antikehad ilmuvad patsiendi kehasse umbes 5–6 nädalat pärast nakatumist.

Organismi immuunvastuses osalevad nii rakulised (makrofaagid, T-lümfotsüüdid) kui ka humoraalsed mehhanismid (spetsiifiliste immunoglobuliinide süntees). Süüfilisevastaste antikehade ilmnemine toimub vastavalt immuunvastuse üldistele mustritele: kõigepealt toodetakse IgM, haiguse progresseerumisel hakkab domineerima IgG süntees; IgA-d toodetakse suhteliselt väikestes kogustes.

IgE ja IgD sünteesi küsimust ei ole praegu piisavalt uuritud. IgM ilmneb 2–4 nädalat pärast nakatumist ja kaob ravimata patsientidel ligikaudu 18 kuu pärast; varajase süüfilise ravis - 3–6 kuu pärast, hilise - 1 aasta pärast. IgG ilmub tavaliselt 4. nädalal pärast nakatumist ja saavutab reeglina kõrgemad tiitrid kui IgM. Selle klassi antikehad võivad püsida pikka aega isegi pärast patsiendi kliinilist ravi.

Süüfilise antikehad võivad olla mittespetsiifilised (reagin) ja spetsiifilised (antitreponemaalsed). Reagins on suunatud Treponema pallidum'i lipiidsete antigeenide ja keharakkude hävimise tagajärjel tekkivate autoantigeenide vastu. Tuleb meeles pidada, et reagiine leidub ka normaalsetes kudedes ning nende hulk suureneb erinevates füsioloogilistes ja patoloogilistes tingimustes. Need reaginid võivad olla süüfilise nn bioloogiliste valepositiivsete seroloogiliste reaktsioonide põhjuseks.

Spetsiifilised anti-treponema antikehad, mis on seotud IgM ja IgG-ga, on suunatud Treponema pallidum'i vastu ja võivad sarnaselt Treponema antigeenidele olla rühma- ja liigispetsiifilised.

Patsiendi vereseerumis antikehade määramiseks kasutatakse erinevaid seroloogilisi reaktsioone, mis erinevad üksteisest tundlikkuse, spetsiifilisuse, keerukuse ja maksumuse poolest. Arvestades, et kõik süüfilise seroloogilised reaktsioonid võivad teatud tingimustel olla valepositiivsed, tuleks need läbi viia kombineeritult ja vajadusel dünaamiliselt.

Seroloogilised reaktsioonid jagunevad sõltuvalt tuvastatud antikehadest kolme rühma:

I. Lipiidide (reagiini) reaktsioonid:

1) mikroreaktsioonid klaasil lipiidantigeenidega - ekspressdiagnostiline meetod (sadestamise mikroreaktsioonid - MRP, VDRL, CMF, RPR jne);

2) komplemendi sidumise reaktsioon (CRF) lipiidantigeenidega – Wassermani reaktsioon;

3) settereaktsioonid (Cahni sadestamisreaktsioon, tsütokoolne Sachsi-Vitebsky reaktsioon jne).

II. Grupi treponemaalsed reaktsioonid:

1) RSC koos Reiteri valgu antigeeniga;

2) immunofluorestsentsreaktsioon (RIF);

3) immuunadhesioonireaktsioon (IAR).

III. Liigispetsiifilised valgutreponemaalsed reaktsioonid:

1) Treponema pallidum immobilisatsioonireaktsioon (TRE);

2) RIF Abs ja selle variandid (IgM FTA ABS, 19S IgM FTA ABS jne);

3) Treponema pallidum'i (IPHA) kaudne hemaglutinatsioonireaktsioon.

Erinevatel praktilistel eesmärkidel kasutatakse erinevaid seroloogilisi reaktsioone. Välismaal kasutatakse rahvastiku massiuuringutel ja süüfilise erakorralise avastamise vajaduse korral selektsioonireaktsioone (VDRL jne). Süüfilise diagnoosimiseks (kinnitamiseks) kasutatakse kardiolipiini ja trepone antigeenidega RSC-d ning RIF Abs-i. Ravi efektiivsuse jälgimiseks on soovitatav kasutada kvantitatiivset VDRL-i ja 19S IgM FTA ABS-i ning RIT-i kasutatakse ekspertreaktsioonina treponemaalsete reaktsioonide lahknemise korral. Kui RIT ja 19S IgM FTA ABS tulemused on negatiivsed, loetakse, et uuritav ei põe süüfilist.

Kodumaises praktikas kasutatakse seroloogiliste reaktsioonide kompleksi, sealhulgas:

1) selektsiooni mikrosadestamisreaktsioonid (MSR) kardiolipiini antigeeniga;

2) standardsed seroloogilised reaktsioonid - RSC kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega;

3) RIF ja selle modifikatsioon RIF Abs.;

Selektiivsed seroloogilised reaktsioonid süüfilise korral või mikroreaktsioonid klaasil ekspressdiagnostika jaoks? nostikud

Neid reaktsioone kasutatakse süüfilise massiliste seroloogiliste uuringute jaoks (määratud elukutsete isikud, somaatiliste haiglate patsiendid, kliinikute ja ambulatoorsete kliinikute patsiendid); ekspressdiagnostikaks naha- ja suguhaiguste kliinikutes. Neid ei kasutata rasedate ja doonorite uurimiseks, samuti süüfilisehaigete ravijärgseks jälgimiseks.

Mikroreaktsioone saab läbi viia tavapärastes kliinilistes laborites.

Mikroreaktsioonid viiakse läbi klaasil veretilga, plasma, aktiveeritud või aktiveerimata seerumi ja spetsiaalse kardiolipiini antigeeniga. Kardiolipiini antigeen on väga tundlik ja on ekstrakt

Veise süda, rikastatud kolesterooli ja letsitiiniga. MRP võib läbi viia kvantitatiivse meetodi abil vereseerumi lahjendamisega. Mikroreaktsioone on mitmeid variante (VDRL, RPR, USR, ART), mis erinevad üksteisest peamiselt kasutatava antigeeni poolest. Meie riigis kasutatakse sademete mikroreaktsioone (MPR).

Ekspressmeetodi eelisteks on vastuse saamise kiirus (30–40 minutiga) ja testiks vajalik väike veremaht (2–3 tilka plasmat või seerumit). MRP võib süüfilise aktiivsete vormide korral anda valepositiivseid ja mõnel juhul negatiivseid tulemusi, mistõttu on selle meetodi abil lõpliku diagnoosi seadmine keelatud. Patsientidel sekundaarne süüfilis(1% juhtudest) võivad mikroreaktsioonid, eriti VDRL, olla negatiivsed, kui neid tehakse täisseerumiga, ja positiivsed, kui need on lahjendatud (prozoon fenomen mitte).

Samuti on selektsioonireaktsioonidena soovitatav kasutada passiivse hemaglutinatsiooni testi (RPHA). Selle testi kõrgeimat tundlikkust täheldatakse nii varajase kui ka hilise süüfilise vormiga ravimata (100%) ja ravitud (99,6%) patsientidel. Ravi tulemuste jälgimisel ei ole test oluline, kuna see annab vähesel arvul juhtudel negatiivse tulemuse. Võimalus kasutada Reiteri antigeeni, lihtsus, kõrge tundlikkus ja odav hind asetavad RPGA süüfilise diagnoosimise meetodite hulgas esikohale. Selle väärtus suureneb veelgi, kui seda tehakse automaatselt.

Süüfilise diagnostilised kinnitavad seroloogilised testid

Standardsed seroloogilised testid.

Wassermani reaktsioon (WR). Töötas välja A. Wasserman koos A. Neisseri ja Brookiga 1906. aastal. Ajalooliselt on see esimene süüfilise diagnoosimise seroloogiline meetod. Reaktsioon põhineb komplemendi sidumise nähtusel (Bordet-Zhangou reaktsioon) ja tuvastab antilipiidsed antikehad (reagins) - see on klassikaline reaktsioon. Praegu viiakse komplemendi sidumisreaktsioon läbi ka spetsiifiliste treponemaalsete antigeenidega (mitteklassikaline reaktsioon).

RV-s kasutatavad lipiidide antigeenid on madalamad antigeenid – hapteenid. Neil puudub immunogeenne võime. Pärast eritöötlust omandavad need hapteenid täisväärtuslike antigeenide omadused. Kultuurilistest ja patogeensetest treponeemidest valmistatud antigeenid on täielikud antigeenid.

RV-s kasutatakse samaaegselt kahte antigeeni: kardiolipiini ja treponemaali. Treponemaalne antigeen on apatogeensete kultuuriliste treponeemide ultraheliga töödeldud suspensioon. Need antigeenid koos patsiendi vereseerumis sisalduvate reagiinidega moodustavad immuunkompleksi, mis on võimeline komplementi adsorbeerima ja siduma. Kuna tekkiv kompleks (reagins + antigeen + komplement) on nähtamatu, on komplemendi sidumise esinemise määramiseks indikaatoriks vajalik hemolüütiline süsteem (lamba erütrotsüütide segu hemolüütilise seerumiga).

Kui reaktsiooni esimeses faasis on komplement seotud (reagins + antigeen + komplement), siis hemolüüsi ei toimu, punased verelibled sadestuvad, palja silmaga kergesti nähtavad (RV positiivne).

Kui esimeses faasis komplement ei ole seotud reagiinide puudumise tõttu uuritavas seerumis, siis kasutatakse seda hemolüütilises süsteemis ja toimub hemolüüs (PB negatiivne). Hemolüüsi raskusastet Wassermani reaktsioonis hinnatakse plussidega: täielik puudumine hemolüüs 4+ (RV on tugevalt positiivne), hemolüüs on vaevu alanud 3+ (RV on positiivne), oluline hemolüüs 2+ (RV on nõrgalt positiivne), täielik hemolüüs

Liz – RV negatiivne.

Lisaks RV kvalitatiivsele hindamisele toimub selle kvantitatiivne hindamine erinevate vereseerumi lahjendustega (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Reagiini tiiter määratakse maksimaalse lahjenduse järgi, mis annab siiski teravalt positiivse (4+) tulemuse. RV kvantitatiivne staadium on oluline teatud süüfilise vormide diagnoosimisel ja ravi edukuse jälgimisel.

Wassermani reaktsioonil puudub tundlikkus. See on negatiivne esmase staadiumi alguses, see on negatiivne 1/haigetel, kellel on tertsiaarne aktiivne süüfilis koos naha, limaskestade, luude, siseorganite kahjustustega, kesknärv süsteem, hiline kaasasündinud süüfilis, eriti kui patsiente on varem antibiootikumidega ravitud.

Süüfilise esmasel perioodil muutub RV positiivseks 2–3 nädalat pärast kõva šankri ilmnemist või 5–6 nädalat pärast nakatumist, sekundaarsel perioodil - peaaegu 100% patsientidest, tertsiaarsel aktiivsusel - 70–75%. tabes dorsalisega - 50%, progresseeruv halvatus - 95–98%.

Pärast esmase seropositiivse ja sekundaarse värske süüfilise spetsiifilise ravi lõpetamist muutub reaktsioon negatiivseks 1,5–7–8 kuu jooksul. Süüfilise hiliste vormide korral võib see püsida positiivsena mitu aastat vaatamata täiendavale ravile (seroresistentsus). Tundlikkuse suurendamiseks asetatakse RV külma.

Süüfilise diagnoosimisel olid pikka aega välismaal esinenud settereaktsioonid (Kan, Sachs-Vitebsky, Meinik). Meie riigis täiendasid nad tingimata RV-d. Settereaktsioonide immunoloogiline olemus ei erine RV-st, kuid nende jaoks valmistatakse ette kontsentreeritumad antigeenid, mis reagiinidega interakteerudes tekitavad kvalitatiivselt hinnatud silmaga nähtava sademe. Sisse

Praegu neid reaktsioone ei kasutata.

Kõik reagiini seroloogilised testid ei ole rangelt spetsiifilised ja võivad anda valepositiivseid tulemusi.

Valepositiivsed seroloogilised reaktsioonid süüfilise suhtes. Valepositiivsed (mittespetsiifilised, bioloogiliselt valepositiivsed) on positiivsed seroloogilised reaktsioonid süüfilisele inimestel, kes ei ole süüfilist kunagi põdenud ja kellel ei ole süüfilist uuringu ajal.

Valepositiivsete seroloogiliste reaktsioonide korral uuritavate vereseerumis esinevad ainult reaginid, kuid puuduvad immobilisiinid, komplemendi siduva valgu antikehad ja RIF-is määratud antikehad.

N. M. Ovchinnikov (1987) tuvastab kolm süüfilise seroloogiliste reaktsioonide valepositiivse reagiini peamiste põhjuste rühma:

1) nakkushaigused, mille tekitajad on antigeenselt sarnased Treponema pallidum'iga (relapsiivne palavik, ägenemine, bejel, pinta, leptosteroos; põletikulised protsessid suuõõnes ja suguelunditel esinevate saprofüütsete treponeemide põhjustatud);

2) füsioloogilised ja patoloogilised seisundid, mis põhjustavad muutusi ainevahetuses, eriti lipiidide metabolismis (rasedus, podagra, tüüfus, malaaria, kopsupõletik, pidalitõbi, endokardiit, difuussed haigused sidekoe, müokardiinfarkt, põrutus, kunstlik immuniseerimine, onkoloogilised haigused; mürgistus plii, fosfori, kloroformiga; naatriumsalitsülaadi, digitaalise jne võtmine);

3) tehnilised vead reaktsioonide seadistamisel.

On ägedaid ja kroonilisi valepositiivseid reaktsioone. Ägedad valepositiivsed reaktsioonid ei ole püsivad ja nende spontaanne negatiivsus ilmneb sees

4-6 kuud Kroonilised reaktsioonid jäävad positiivseks kauem kui 6 kuud.

Ägedate bioloogiliste valepositiivsete reaktsioonide põhjused on rasedus (eriti selle viimastel nädalatel ja esimesed 10 päeva pärast sündi); kopsupõletik, eriti mükoplasma etioloogia; leetrid, enteroviiruse infektsioon, nakkuslik mononukleoos, vaktsineerimine, narkomaania, alkoholism. Neid täheldatakse harvemini aktiivse tuberkuloosi, sarlakid, viirusliku kopsupõletiku, brutselloosi, riketsioosi, leptospiroosi, leetrite, lymphogranuloma venereum, malaaria ja valgunälja korral. Patsientidel, kes lõpetavad ravimite võtmise, püsivad süüfilise suhtes seroloogilised valepositiivsed reaktsioonid kuni 14 kuud. Mõnikord on mittespetsiifiliste seroloogiliste reaktsioonide põhjuseks ulatuslikud traumad, põrutus, luumurrud, müokardiinfarkt, aga ka reaktsioonide formuleerimise tehnilised vead.

Kroonilisi valepositiivseid standardseid seroloogilisi teste võib täheldada patsientidel, kellel on pidalitõbi, süsteemne erütematoosluupus, Hashimoto türeoidiit, reuma, nodoosne periarteriit, maksatsirroos, sarkoidoos, generaliseerunud sklerodermia, krüoglobuliinpurpur, pahaloomulised kasvajad, malaaria, tuberkuloos, brutselloos, leptospiroos, nakkuslik mononukleoos, suhkurtõbi, verehaigused, hüpertensioon, krooniline alkoholism ja narkomaania. Vanusega suureneb valepositiivsete tulemuste arv. Naistel täheldatakse neid 4,5 korda sagedamini kui meestel. Mõnikord jäävad valepositiivsete reaktsioonide põhjused ebaselgeks (idiopaatilised reaktsioonid) või tekivad need mõnes perekonnas spontaanselt.

Mittespetsiifilised seroloogilised reaktsioonid on keskmiselt 0,03–2,5%. Sagedamini on need nõrgalt positiivsed ja kui positiivsed, siis madala süüfilise reagiini tiitriga. Mõne haiguse (lümfoomid, krooniline lümfotsüütleukeemia, reumatoidartriit, maksavähk) korral võib nende tiiter aga olla kõrge. Korduval uurimisel muutuvad mittespetsiifilised reaktsioonid negatiivseks või nende raskusaste väheneb, samas kui süüfilisega patsientide seerumi tiiter jääb samaks või suureneb.

Mittespetsiifiliste tulemuste korral täheldatakse lahknevusi RT ja settereaktsioonide vahel. Mõnikord esineb erinevate antigeenidega testimisel reaktsioonide tulemustes lahknevusi: ühe antigeeniga saadakse positiivsed, teise antigeeniga negatiivsed tulemused. Terava lahknevuse korral tuleb uuringut korrata uue vereportsjoniga, kuid mitte varem kui nädala pärast. Klassikaliste seroloogiliste reaktsioonide tõelise süüfilise näidustuste kõige usaldusväärsem kriteerium on RIT-i abil tehtud vereanalüüsi tulemus, kuigi mõnikord annab see ka valepositiivseid ja valenegatiivseid tulemusi.

IN sarnased juhtumid IgM klassi antikehade tuvastamiseks tuleks kasutada seroloogilisi teste, mis on süüfilise suhtes kõige spetsiifilisemad (IgM FTA ABS, IgM FTA 19S).

Spetsiifiliste seroloogiliste reaktsioonide rühm

Spetsiifilisi reaktsioone, mis kasutavad treponemaalset antigeeni, on viis peamist tüüpi. Need erinevad üksteisest antigeen-antikeha komplekside määramise meetodite poolest: immunofluorestsents, immobiliseerimine, ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, hemaglütsineerimine, komplemendi sidumine.

1. Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF) on spetsiifiliste reaktsioonide hulgas kesksel kohal.

Selle põhimõte seisneb selles, et testitavat seerumit töödeldakse antigeeniga, milleks on küüliku orhiidist saadud Nicholsi tüve Treponema pallidum, kuivatatud klaasklaasil ja fikseeritud atsetooniga.

Pärast pesemist töödeldakse ravimit luminestseeruva seerumiga inimese globuliinide vastu. Fluorestseeruv kompleks (anti-inimese globuliin + fluorestseiini tioisotsüanaat) seondub inimese globuliiniga Treponema pallidum'i pinnal ja seda saab tuvastada fluorestsentsmikroskoopia abil.

Süüfilise serodiagnostika jaoks kasutatakse mitmeid RIF-i modifikatsioone:

A) immunofluorestsentsreaktsioon absorptsiooniga (RIF6Abs.). Rühma antikehad eemaldatakse uuritavast seerumist ultraheliga hävitatud kultiveeritud treponeemide abil, mis suurendab järsult reaktsiooni spetsiifilisust. Kuna testitavat seerumit lahjendatakse ainult 1:5, säilitab modifikatsiooni kõrge tundlikkus. Tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest RIF Abs. ei ole halvem kui Nelsoni reaktsioon (RIT) ja seda on palju lihtsam lavastada kui viimast. RIF Abs. muutub positiivseks 3. nädala alguses pärast nakatumist (enne šankri tekkimist või samaaegselt sellega) ja on süüfilise varajase serodiagnostika meetod. Sageli jääb seerum positiivseks mitu aastat pärast varajase süüfilise täielikku ravi ja hilise süüfilisega patsientidel aastakümneid.

Näidustused RIF Abs. seadistamiseks:

Positiivne Wassermani reaktsioon rasedatel, kui puuduvad kliinilised ja anamneetilised andmed süüfilise kasuks;

Positiivne Wassermani reaktsioon erinevate somaatiliste ja nakkushaigustega inimestel;

Negatiivne Wassermani reaktsioon süüfilise kliiniliste ilmingutega isikutel (süüfilise varajase diagnoosimise meetod).

Ülemineku positiivne RIF Abs. negatiivne, on ravi tulemusena antisüüfilise ravi edukuse absoluutne kriteerium.

Valepositiivsed RIF-tulemused Abs. täheldatud rasedatel, alkohoolikutel, reumatoidartriidi, süsteemse ja diskoidse erütematoosluupuse, sklerodermia, segatüüpi sidekoehaiguse ja maksatsirroosiga patsientidel. Mõnikord on reaktsioon tervetel inimestel positiivne. Lisaks võivad esineda tehnilised vead;

B) reaktsioon IgM6RIF6Abs. Eespool öeldi, et varajase süüfilisega patsientidel ilmneb haiguse esimestel nädalatel IgM, mis sel perioodil on seerumi spetsiifiliste omaduste kandja. Haiguse hilisemates staadiumides hakkab domineerima IgG. Sama immunoglobuliinide klass vastutab ka valepositiivsete tulemuste eest, kuna rühma antikehad on pikaajalise immuniseerimise tulemus saprofüütiliste treponeemidega (suuõõs, suguelundid jne).

Ig-klasside eraldi uurimine pakub erilist huvi kaasasündinud süüfilise serodiagnostikas, kus lapse kehas sünteesitud treponemaalseid antikehi esindab IgM ja IgG on ema päritolu. IgM reaktsioon RIF Abs. põhineb anti-IgM konjugaadi kasutamisel teises faasis inimese fluorestsentsvastase globuliini asemel.

Näidustused selle reaktsiooni käivitamiseks:

Kaasasündinud süüfilise serodiagnoos, kuna reaktsioon võimaldab meil välistada ema päritolu IgG, mis läbib platsentat ja võib põhjustada RIF Abs. valepositiivse tulemuse, kui lapsel puudub aktiivne süüfilis;

Taasinfektsiooni (taasinfektsiooni) eristamine süüfilise retsidiivist, mille puhul on positiivne RIF-i, kuid negatiivne IgM RIF-i abs.

Varajase süüfilise ravi tulemuste hindamine: täielik IgM ravi RIF Abs. läheb positiivsest negatiivseks. Selle reaktsiooni seadistamisel sisse harvadel juhtudel võivad esineda valepositiivsed ja valenegatiivsed tulemused;

B) reaktsioon 19SIgM6RIF6Abs. See RIF-i modifikatsioon põhineb suuremate 19SIgM molekulide esialgsel eraldamisel testitava seerumi väiksematest 7SIgG molekulidest. Seda eraldamist saab teha geelfiltrimisega. Reaktsiooni uurimine RIF Abs. ainult 19SIgM fraktsiooni sisaldav seerum kõrvaldab kõik võimalikud veaallikad. Reaktsioonitehnika (eriti testitava seerumi fraktsioneerimine) on aga keeruline ja aeganõudev, mis piirab tõsiselt selle praktilise kasutamise võimalust.

2. Treponema pallidum immobilisatsioonireaktsioon (TPR). See on esimene spetsiifilistest reaktsioonidest, mida on ette nähtud süüfilise serodiagnostikaks. Reaktsiooni põhimõte seisneb selles, et kui patsiendi seerumit segada komplemendi juuresolekul elava patogeense Treponema pallidum'i suspensiooniga, kaob Treponema pallidum'i liikuvus, samas kui Treponema pallidum'i suspensiooni segamisel seerumiga. tervetel inimestel säilib Treponema pallidum'i liikuvus pikka aega. Selles reaktsioonis tuvastatud immobilisiini antikehad klassifitseeritakse hilisteks antikehadeks; need tekivad hiljem kui komplementi fikseerivad antikehad ja saavutavad maksimaalse tiitri haiguse kümnendaks kuuks, mistõttu reaktsioon varajase diagnoosimise meetodiks ei sobi. Teisese ravimata süüfilise korral on reaktsioon aga positiivne 95% juhtudest. Tertsiaarse süüfilise korral annab RIT positiivseid tulemusi 95–100% juhtudest. Siseorganite, kesknärvisüsteemi süüfilise, kaasasündinud süüfilise puhul on positiivsete RIT tulemuste osakaal 100% lähedal. RIT-i tundlikkus ja spetsiifilisus on ligikaudu samad, mis RIF Abs.-l, välja arvatud varajase süüfilise diagnoosimisel. Täisravi tulemusena negatiivset RIT-i ei esine alati; reaktsioon võib jääda positiivseks paljudeks aastateks. Lavastusreaktsioonide näidustused on samad, mis RIF Abs-i puhul. Kõigist spetsiifilistest reaktsioonidest on RIT kõige keerulisem ja töömahukam reaktsioon, seetõttu kasutatakse seda välismaal ainult kahtlastel juhtudel uurimiseks.

Valepositiivset RIT-i võib täheldada leepra, treponematoossete haiguste (pinta, bejel jne), pahaloomuliste haiguste, erütematoosluupuse, südame-veresoonkonna haiguste ja kopsupõletikuga patsientidel. Arvestada tuleb, et RIT võib olla valepositiivne, kui testitav seerum sisaldab treponemotsiidi (näiteks penitsilliinid, tetratsükliinid, erütromütsiin) aineid, mis põhjustavad Treponema pallidum’i mittespetsiifilist immobilisatsiooni, mistõttu ei saa verd RIT-i suhtes testida varem kui 2 nädala möödudes. pärast antibiootikumide ja muude antisüüfiliste ravimite võtmise lõppu.

3. Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA). Meetodi põhimõte seisneb selles, et tahkefaasilise kandja (polüstüreenist või akrüülpaneelidest süvendid) pind sensibiliseeritakse Treponema pallidum antigeenidega. Seejärel lisatakse sellistesse süvenditesse testitav seerum. Kui seerumis on Treponema pallidum'i vastased antikehad, moodustub antigeen-antikeha kompleks, mis on seotud kandja pinnaga. Järgmises etapis valatakse süvenditesse ensüümiga (peroksüdaas või aluseline fosfataas) märgistatud liigivastane (inimese globuliinide vastane) seerum. Märgistatud antikehad (konjugaat) interakteeruvad antigeeni-antikeha kompleksiga, moodustades uue kompleksi. Selle tuvastamiseks valatakse süvenditesse substraadi lahus (5-aminosalitsüülhape). Ensüümi toimel muudab substraat värvi, mis näitab reaktsiooni positiivset tulemust. Tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest on meetod lähedane RIF Abs-ile. ELISA näidustused on samad, mis RIF Abs puhul. ELISA makro- ja mikrovariandid on välja töötatud. Reaktsiooni saab automatiseerida.

4. Kaudne hemaglutinatsioonireaktsioon (IPHA). Reaktsiooni põhimõte seisneb selles, et antigeenina kasutatakse formaliniseeritud ja parkunud erütrotsüüte, millele on adsorbeeritud treponema pallidum'i antigeenid. Sellise antigeeni lisamisel patsiendi seerumis kleepuvad punased verelibled kokku – hemaglutinatsioon. Reaktsiooni spetsiifilisus ja tundlikkus on kõrgem võrreldes teiste Treponema pallidum'i antikehade tuvastamise meetoditega, eeldusel, et antigeeni kvaliteet on kõrge. Reaktsioon muutub positiivseks 3. nädalal pärast nakatumist ja püsib nii palju aastaid pärast paranemist. Valepositiivsete ja valenegatiivsete tulemuste arv on väike. Selle reaktsiooni jaoks on välja töötatud mikromeetod, samuti automatiseeritudn. Selle reaktsiooni analoog välismaal on TRHA (T. pallidum hemaglutination).

5. Tahkefaasi hemaabsorptsioonireaktsioon (IgM6SPHA). See on uus seroloogiline reaktsioon, mis ilmselt vastab kõigile süüfilise serodiagnostika meetodite nõuetele. Reaktsioon on väga tundlik ja spetsiifiline, tehniliselt kergesti teostatav ja muutub positiivseks alates 2. nädalast pärast nakatumist. Ja kuigi selle eeliste ja puuduste objektiivseks hindamiseks pole veel piisavalt faktilist materjali, tundub reaktsioon väga paljulubav. Selle põhimõte seisneb selles, et polüstüreenpaneeli süvendite seinad on kaetud anti-IgM inimesevastase seerumiga. Seejärel valatakse süvenditesse testitav seerum koos spetsiaalse absorbeeriva lahjendiga. Kolmandas etapis lisatakse süvenditesse erütrotsüütide diagnostika.

Positiivsetel juhtudel toimub hemaglutinatsioon - punased verelibled fikseeritakse aukude seintele, negatiivsetel juhtudel - punased verelibled settivad ketta kujul süvendite põhja. Reaktsiooni saab esitada kvalitatiivsetes ja kvantitatiivsetes versioonides ning see on saadaval automatiseerimiseks.

Seroloogiliste reaktsioonide roll ravi efektiivsuse hindamisel. Seroloogilised reaktsioonid on ravi efektiivsuse näitaja. Need tuleb läbi viia enne antisüüfilist ravi, selle ajal ja pärast seda. Primaarse süüfilise puhul on see eriti oluline ravi kestuse määramiseks ning sekundaarse ja muude süüfilise vormide puhul - ravitulemuste hindamiseks.

Paljud uuringud on kindlaks teinud ligikaudsed kuupäevad negatiivsed seroloogilised reaktsioonid süüfilise erinevate kliiniliste vormidega patsientidel pärast täieliku spetsiifilise ravi lõppu. Mõnedel patsientidel jäävad seroloogilised reaktsioonid vaatamata täielikule ravile positiivseks ka pärast seda. Nendel juhtudel võime rääkida ravitud patsientide seroresistentsusest või püsivalt positiivsetest seroloogilistest reaktsioonidest.

Samas tuleks sageli kasutatavat "seroresistentse süüfilise" määratlust pidada ebaõigeks, kuna see eeldab, et süüfilise all kannataval inimesel on positiivsed seroloogilised reaktsioonid. Seroresistentsuse põhjused on suures osas ebaselged. N. M. Ovtšinnikovi ja T. V. Vasiljevi (1987) järgi ühine põhjus seroresistentsust ei eksisteeri. Samuti on võimatu ühemõtteliselt vastata, kas selliste patsientide ravi on vaja jätkata. Seroresistentsuse peamised põhjused on:

Patsiendi hilinenud ja mittetäielik ravi;

Kroonilise esinemine kaasnevad haigused(tuberkuloos, malaaria jne);

Treponema esinemine antibiootikumide jaoks raskesti ligipääsetavates koldes (eriti kui need on muutunud kujul või polümembraansetes fagosoomides);

Kahvatu treponema üleminek vormidesse, mida on raske penitsilliinile reageerida (L-vormid, tsüstid, graanulid), samuti taimestiku olemasolu patsiendi kehas, mis toodab penitsillinaasi, mis täielikult või osaliselt neutraliseerib penitsilliini; treponeemide olemasolu keharakkude polümembraansetes fagosoomides, mis muudab treponeemid antibiootikumide ja antikehade toimele kättesaamatuks;

Lipiidide ainevahetuse häired.

Samuti on seisukoht, et seroresistentsus inimestel, kes on saanud täielikku spetsiifilist ravi ja kellel puuduvad süüfilise tunnused, on organismis esinevate autoimmuunreaktsioonide (autoallergia) tagajärg. Võimalik, et mõnedel inimestel on seroresistentsus anamnestiline jälgreaktsioon isegi Treponema pallidum'i puudumisel. Seega tuleks seroresistentsuse põhjuste ja ravi jätkamise vajaduse küsimus lahendada individuaalselt.

Seroloogiliste reaktsioonide jaoks vere kogumise tehnika.

Veri RV, RIF ja RIT testimiseks võetakse küünarluuveenist tühja kõhuga või mitte varem kui 4 tundi pärast sööki, kasutades süstalt või ühte nõela (raskusjõu järgi). Puhtasse katseklaasi valatakse 5–7 ml verd (RIT-uuringu katseklaas peab olema spetsiaalselt ettevalmistatud ja steriilne).

Ekspressmeetodil uurimiseks võetakse verd sõrmeotsast, nagu seda tehakse ESR-i võtmisel, kuid võetakse veel üks kapillaar. Ekspressmeetodit saate kasutada ka veenipunktsiooniga saadud vereseerumiga.

Kui uuringud on vajalikud, võivad mõned laborid saata vere asemel kuivatatud seerumit. Selleks eraldatakse järgmisel päeval pärast verevõtmist seerum trombist. Siis nad valivad

1 ml seerumit süstlasse ja valage see kahe eraldi ringi kujul 6-8 cm paksusele kirjutuspaberile, vahavahale või tsellofaani ribale. Paberi vabale servale kirjutage patsiendi perekonnanimi, initsiaalid ja verevõtu kuupäev. Seerum paberil, kaitstuna otsese päikesevalguse ja tolmu eest, jäetakse järgmise päevani toatemperatuurile; see kuivab läikiva kollase klaasja kile väikeste ringidena. Pärast seda pakitakse kuivatatud seerumiga paberiribad samamoodi nagu ravimpulbrit ja saadetakse laborisse, näidates ära diagnoosi ja uuringu põhjuse.

Tserebrospinaalvedeliku uurimine. Likoroloogiline diagnostika on äärmiselt oluline nii neurosüüfilise diagnoosi kindlakstegemisel kui ka süüfilisega patsiendi paranemise määramisel. Tserebrospinaalvedeliku laboratoorne uuring

Soovitatav on seda teha enne registrist kustutamist pärast asjakohast kliinilist ja laboratoorset kontrolli. Tuleb meeles pidada, et mõnel juhul on negatiivsete standardsete seroloogiliste testide korral võimalik patoloogiline tserebrospinaalvedelik.

Tavaline tserebrospinaalvedelik on värvitu, läbipaistev, säilitamisel setet ei moodusta, suhteline tihedus on 1006–1007; pH 7,35–7,4; valgusisaldus on 10–25 mg%; 1 ml normaalset tserebrospinaalvedelikku võib sisaldada 0–3–5–7 moodustunud elementi.

Spetsiifiliste süüfilise muutuste määramiseks tserebrospinaalvedelikus on soovitatavad järgmised testid: üldvalgusisalduse määramine, moodustunud elementide loendamine, globuliinireaktsioonid, Wassermanni reaktsioon tserebrospinaalvedeliku kolme lahjendusega ja kolloidne reaktsioon kuldkloriidiga (Lange'i reaktsioon), RIT , RIF 10 ja RIFc (immunofluorestsentsreaktsioon terve lahjendamata tserebrospinaalvedelikuga).

Definitsioon kogu valk. Süüfilisega patsiendi patoloogiliselt muutunud tserebrospinaalvedelikus suureneb valgu hulk. See määratakse tserebrospinaalvedeliku järkjärgulistes lahjendustes isotoonilise naatriumkloriidi lahusega vahekorras 1:5 kuni 1:80.

Moodustatud elementide kvantitatiivne määramine.

Tavaline tserebrospinaalvedelik sisaldab reeglina üksikuid moodustunud elemente (lümfotsüüte). Moodustunud elementide arvu suurenemine ning plasmarakkude ja monotsüütide ilmumine pleotsütoosi ajal viitavad patoloogilisele muutusele tserebrospinaalvedelikus.

Globuliini reaktsioonid. Tähtis tserebrospinaalvedeliku patoloogia diagnoosimisel on see valkude raske fraktsiooni - globuliinide - määramine tserebrospinaalvedelikus. Globuliinireaktsioonide hulka kuuluvad Nonne-Apelti ja Pandi reaktsioonid, mis põhinevad teatud soolade omadusel teatud kontsentratsioonides selektiivselt sadestada globuliine tserebrospinaalvedelikust.

Lange'i reaktsioon (reaktsioon kuldkloriidi kolloidse lahusega). Reaktsiooni põhimõte põhineb asjaolul, et kulla kolloidlahused, mis ei muutu normaalse tserebrospinaalvedeliku järkjärguliste lahjenduste mõjul, samadel tingimustel patoloogiliselt muutunud tserebrospinaalvedelikus elektrolüütide juuresolekul (naatriumkloriidi lahus) läbima muutuse dispersiooniastmes sõltuvalt selle vedeliku lahjendusest. Protsessi väljendab kolloidlahuse värvuse muutumine sademe tekkimisel. Lange reaktsioon kuldkloriidi kolloidlahusega omab nii diagnostilist kui ka diferentsiaaldiagnostilist väärtust närvisüsteemi süüfilise kahjustuse varajasel avastamisel.

Wassermani reaktsioon tserebrospinaalvedelikuga.

Süüfilise korral võib tserebrospinaalvedelik sisaldada reagiine ja antitreponemaalseid komplementi fikseerivaid antikehi, mis on määratud vastavate antigeenidega. Tserebrospinaalvedelikus puudub komplement, mistõttu Wassermani reaktsioon viiakse läbi inaktiveerimata tserebrospinaalvedelikuga. Tserebrospinaalvedelikku uuritakse Wassermanni reaktsioonis, lahjendatakse 0,5 ml mahus ja lahjendatakse isotoonilise naatriumkloriidi lahusega 1:1 ja 1:4.

On kindlaks tehtud, et teravalt positiivsed ja positiivsed Wassermani reaktsioonid tserebrospinaalvedelikuga näitavad süüfilise infektsiooni olemasolu subjektil, kuid tuleb meeles pidada, et Wassermani reaktsiooni negatiivsed tulemused ei välista süüfilist täielikult. Sellistel juhtudel on vaja läbi viia muid reaktsioone.

RIF ja RIT tserebrospinaalvedelikus. Praegu arvatakse, et need reaktsioonid tserebrospinaalvedelikuga on süüfilise suhtes absoluutselt spetsiifilised. Nendel juhtudel kasutatakse RIF-i modifikatsioonides RIF 10 ja RIFts. RIF-i ja RIT-i tulemuste seadistamise ja salvestamise meetodid tserebrospinaalvedelikus viiakse läbi samamoodi nagu vereanalüüside puhul.

Aktiivse neurosüüfilise diagnoosimine. Neurosüüfilise aktiivsuse hindamiseks saab kasutada empiirilisi teste.

Datteri ja Thomase poolt 1949. aastal välja pakutud taevakriteeriumid:

1) neurosüüfilis võib olla asümptomaatiline isegi kesknärvisüsteemi patoloogilise protsessi väljendunud aktiivsuse korral; kliiniliste sümptomite puudumine ei ole neurosüüfilise kerge kulgemise näitaja;

2) neurosüüfilise aktiivsust ei määra positiivsed standard- ja seroloogilised reaktsioonid; usaldusväärsem kriteerium on nende kombinatsioon suurenenud tsütoosiga ja valgu koguhulk tserebrospinaalvedelikus;

3) neurosüüfilise ravimisel normaliseerub tsütoos tserebrospinaalvedelikus 3–4 kuud pärast ravi lõppu, samas kui kvantitatiivsed standardsed seroloogilised reaktsioonid ja koguvalgusisaldus normaliseeruvad palju hiljem;

4) aktiivse neurosüüfilisega patsientidel võib pärast ravi penitsilliiniga esineda tendentsi tserebrospinaalvedeliku normaliseerumisele, mis ei välista haiguse retsidiivi võimalust. Neurosüüfilise retsidiivid tekivad aga harva varem kui 1 aasta pärast ravi lõppu. Kui tsütoosi, valgu üldkoguse ja standardsete seroloogiliste reaktsioonide normaliseerumine tserebrospinaalvedelikus ei toimu 6 kuud pärast ravi lõppu. spetsiifiline teraapia, valusalt näidatud kordusravi isegi neurosüüfilise kliiniliste sümptomite puudumisel.

Lisaks ülaltoodud kriteeriumidele kasutatakse USA-s aktiivse neurosüüfilise tuvastamiseks uuringut. IgM reaktsioonid SPHA, RIF Abs. ja RPGA. Kui esimene reaktsioon on positiivne, on patsiendil aktiivne neurosüüfilis. Viimased kaks reaktsiooni võimaldavad välistada kesknärvisüsteemi süüfilise infektsiooni.

Süüfilise testimine on üks levinumaid laboriuuringuid. Süüfilise teste kasutatakse laialdaselt ennetavate uuringute käigus. Mikroskoopia abil tehakse kindlaks süüfilise põhjustaja. Seroloogilisi reaktsioone kasutades kinnitatakse süüfilise diagnoos, määratakse latentse süüfilise diagnoos, jälgitakse ravi efektiivsust ja määratakse patsientide paranemine.

Süüfilise diagnoos pannakse paika kliiniliste andmete, süüfilise patogeenide tuvastamise materjaliproovides ja diagnoosi kinnitamise alusel seroloogiliste uurimismeetoditega. Süüfilise ilmingud on arvukad ja mitmekesised, mistõttu diagnoosivad haigust erinevate erialade arstid. Primaarse süüfilise diferentsiaaldiagnostika viiakse läbi mitmete haigustega.

Riis. 1. Fotol on süüfilise esmaseks ilminguks šankr.

Treponema pallidum'i antikehad ja seroloogiline diagnoos

Süüfilisega nakatumisel tekivad patsiendi kehas antikehad. Seroloogiline diagnoos aitab arstil uurida süüfilisega patsiendi kehas antikehade moodustumise dünaamikat haiguse algstaadiumis, raviperioodil ja pärast selle lõppu, et lahendada patsiendil haiguse retsidiivi probleem. või uuesti nakatumine (taasinfektsioon), süüfilise diagnoosimiseks massilise meditsiinilise seisundi korral.

Treponema pallidum IgM antikehad

IgM antikehad on esimesed, mis tekivad pärast nakatumist. Neid hakatakse seroloogiliste reaktsioonide abil tuvastama alates teisest nädalast pärast nakatumist. 6–9 haigusnädalal on nende arv maksimaalne. Kui patsienti ei ravita, kaovad antikehad kuue kuu pärast. IgM antikehad kaovad 1-2 kuu pärast. pärast, 3-6 kuu pärast. - pärast hilise süüfilise ravi. Kui nende kasv registreeritakse, tähendab see või viitab uuesti nakatumisele. IgM molekulid on suured ja ei liigu läbi platsenta lootele.

Treponema pallidum IgG antikehad

IgG immunoglobuliini antikehad ilmuvad esimese kuu lõpus (4. nädal) alates nakatumise hetkest. Nende tiiter on kõrgem kui IgM tiiter. IgG püsib pärast ravi üsna pikka aega.

Mittespetsiifilised antikehad

Seroloogilisi reaktsioone on palju. Seda seletatakse Treponema pallidum'i antigeense paljususega. Haige inimese vereseerumis erinevad etapid süüfilis, lisaks spetsiifilistele tekivad ka teatud mittespetsiifilised antikehad - aglutiniinid, komplementi fikseerivad antikehad, immobiliinid, immuunfluorestsentsi põhjustavad antikehad, sademed jne. Mittespetsiifiliste antikehade tuvastamise seroloogilised reaktsioonid on suhtelise spetsiifilisusega, seega diagnostilise vältimiseks vigade korral peaksite kasutama mitte ühte, vaid seroloogiliste reaktsioonide kompleksi (RAC).

Valepositiivsed süüfilise testid

Mitte-treponemaalsete testide eripäraks on valepositiivsete reaktsioonide saamine. Antikehad-reaginid, mis tekivad inimese veres kardiolipiini antigeeni vastu, registreeritakse mitte ainult süüfilise, vaid ka teiste haiguste korral: kollagenoos, hepatiit, neeruhaigused, türeotoksikoos, vähk, nakkushaigused (pidalitõbi, tuberkuloos, brutselloos, malaaria, tüüfus, sarlakid), raseduse ja menstruaaltsükli ajal, rasvase toidu ja alkoholi tarvitamisel. On täheldatud, et valepositiivsete reaktsioonide arv suureneb koos vanusega.

Riis. 2. Fotol on primaarne süüfilis naistel.

Süüfilise laboratoorne diagnoos seroloogiliste testide abil

Süüfilise seroloogilised testid jagunevad treponemaalseteks ja mittetreponemaalseteks.

1. Mittetreponemaalsed testid

Selles testirühmas kasutatav antigeen on kardiolipiini antigeen. Süüfilise patogeenide lipiidide antigeene on kõige rohkem. Need moodustavad 1/3 raku kuivmassist. Mittetreponemaalsete testide abil tuvastatakse kardiolipiini antigeeni vastu toodetud reagiini antikehad. Sellesse rühma kuuluvad komplemendi sidumise test (FFR), mikrosadestamise test (MPR), plasma kiirreagiini test (RPR) jne. Mittetreponemaalsete testide abil viiakse läbi esmane süüfilise sõeluuring (populatsioonirühmade uuring) ja võimalus Kvantitatiivsete tulemuste saamine võimaldab neid teste kasutada ravi efektiivsuse jälgimiseks. Mittetreponemaalsete testide positiivseid tulemusi tuleb kinnitada treponemaalsete testidega. Mitte-treponemaalsete testide eripäraks on valepositiivsete reaktsioonide saamine.

2. Treponemaalsed testid

Treponemaalsetes testides kasutatakse Treponema pallidum'i kultuurist eraldatud treponemaalse päritoluga antigeene. Nende abiga kinnitatakse mitte-treponemaalsete testide positiivseid tulemusi. Rühma kuuluvad: RSKtrep – komplemendi sidumise reaktsioon, RIF – immunofluorestsentsreaktsioon ja selle modifikatsioonid, RIT, RIBT – Treponema pallidum’i immobilisatsioonireaktsioon, RPHA – passiivne hemaglutinatsioonireaktsioon, ELISA – ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs.

3. Süüfilise testid rekombinantsete antigeenide abil

Selle testide rühma antigeenid saadakse geenitehnoloogia abil ja neid kasutatakse reaktsioonides - RPGA ja ELISA, immunoblotanalüüsis (IB) ja immunokromatograafilises analüüsis.

Riis. 3. Süüfilise diagnoosimiseks kasutatakse seroloogiliste testide komplekti.

Süüfilise diagnoosimine mittetreponemaalsete testide abil

Süüfilise tuvastamiseks kasutatakse mittetreponemaalseid teste või seroloogiliste reaktsioonide kompleksi (SSR). Seroloogilist diagnoosi kasutatakse alates 5. nädalast nakatumise hetkest või 2-3 nädalat pärast nakatumist. Antikehad avastatakse peaaegu kõigil värske esmase haigusega patsientidel. Seroloogilised reaktsioonid on positiivsed 70-80% süüfilisega patsientidel, 50-60% juhtudest tertsiaarse latentse süüfilisega patsientidel.

Mittetreponemaalsete testidega tehtavad seroloogilised testid võivad anda valepositiivseid tulemusi.

Riis. 4. Vereproovide võtmine süüfilise tuvastamiseks.

Komplemendi fikseerimise reaktsioon (RSK-kaart, KSK koos KA-ga, Wassermani reaktsioon)

A. Wassermani enam kui 100 aastat tagasi leiutatud Wassermani reaktsioon (RW, РВ) on tänaseks läbi teinud palju muutusi, kuid austusavaldusena traditsioonile on see oma nime säilitanud tänapäevani. Kardiolipiini antigeeni kasutav komplemendi sidumise reaktsioon ei ole ette nähtud mitte ainult antikehade tuvastamiseks, vaid see viiakse läbi ka kvantitatiivselt - erinevate seerumi lahjendustega, mis võimaldab seda kasutada ravi efektiivsuse jälgimiseks. Seda tüüpi uuringu negatiivsed küljed on madal tundlikkus ja spetsiifilisus, valepositiivsete tulemuste saamine.

Wassermani reaktsiooni olemus on järgmine: antigeenid, mida kasutatakse Wassermani reaktsiooni läbiviimiseks, süüfilise tekitajate vastaste antikehade esinemise korral inimveres, seonduvad nendega komplimendi kaudu ja sadestuvad. Reaktsiooni intensiivsust näitab märk (+). Reaktsioon võib olla negatiivne (-) – sete puudub, kahtlane (väike sete või +), nõrgalt positiivne (++), positiivne (+++) ja tugevalt positiivne (++++).

Modifitseeritud Wassermani reaktsioon, Kolmeri reaktsioon, on tundlikum. Selle abiga tuvastatakse antikehad seerumis, kus Wassermani reaktsioon andis negatiivse tulemuse.

Teravalt positiivsete reaktsioonide korral viiakse läbi reaginide kvantitatiivne määramine, mille jaoks kasutatakse seerumit lahjendustes 1:10 kuni 1:320, mis võimaldab kasutada seda tüüpi uuringud ravi efektiivsuse jälgimiseks. Näiteks antikehade tiitri langus ja nende hilisem seronegatiivsus (negatiivsete tulemuste saamine) viitab haiguse edukale paranemisele.

Riis. 5. Süüfilise vereanalüüs – Wassermani reaktsioon.

Mikrosadestamise reaktsioon (MPR)

Sademete mikroreaktsiooni kasutatakse teatud elanikkonnarühmade massiuuringuteks, süüfilise diagnoosimiseks ja ravi efektiivsuse jälgimiseks. Seda tüüpi uuringute läbiviimiseks on vaja väikest kogust katsematerjali. Sadestumise mikroreaktsioon põhineb immunoloogilisel antigeen-antikeha reaktsioonil. Kui subjekti vereseerumis esinevad antikehad, sadestub antigeeni-antikeha kompleks, moodustades helbed. Reaktsioon viiakse läbi spetsiaalse klaasplaadi süvendites. Seda hinnatakse Wassermani reaktsioonina sademe intensiivsuse ja helveste suuruse järgi (+). Seda ei kasutata rasedate, doonorite uurimisel ega ravi efektiivsuse jälgimisel. VDRL ja RPR on teatud tüüpi mikroreaktsioonid.

Riis. 6. Sadestamise reaktsiooni tüüp tilga klaasil.

Riis. 7. Süüfilise vereanalüüs – mikrosadestamise reaktsioon.

Riis. 8. Komplekt plasmareagiinide kiireks määramiseks (RPR test süüfilise jaoks).

Kõik positiivsed testid mittespetsiifiliste seroloogiliste reaktsioonide käigus saadud kinnitust vajavad spetsiifilised reaktsioonid - treponemaalsed testid.

Süüfilise diagnoosimine treponemaalsete testide abil

Treponemaalsete testide läbiviimisel kasutatakse treponemaalse päritoluga antigeene. Nende negatiivne külg on võimatus neid kasutada ravi efektiivsuse jälgimiseks, positiivsete tulemuste saamine spirohetoosi ja mittesuguhaiguste korral ning valepositiivsete tulemuste saamine onkoloogiliste haiguste, pidalitõve ja mõnede endokriinsete patoloogiate korral. Sellised testid nagu RPGA, ELISA ja RIF jäävad positiivseks paljude aastate jooksul pärast süüfilise ravimist ja mõnel juhul kogu elu.

RIBT ja RIF on kõigist süüfilise diagnoosimiseks kasutatavatest seroloogilistest reaktsioonidest kõige spetsiifilisemad. Need võimaldavad eristada valepositiivseid reaktsioone ja tuvastada süüfilise hiliseid vorme, mis tekivad negatiivsete reaktsioonidega. RIBT abil tuvastatakse rasedate naiste valepositiivsed reaktsioonid, kui on vaja lahendada lapse nakatumise probleem.

Treponema pallidum immobilisatsioonireaktsioon (RIBT, RIT)

Reaktsiooni olemus seisneb selles, et patsiendi vereseerumis olevad antikehad immobiliseerivad Treponema pallidumi. Reaktsiooni peetakse negatiivseks, kui kuni 20% patogeenidest on immobiliseeritud, nõrgalt positiivne - 21 - 50%, positiivne - 50 - 100%. RIBT annab mõnikord valepositiivseid tulemusi. Uuring on keeruline ja töömahukas, kuid see on hädavajalik haiguse varjatud vormide ja seroloogiliste reaktsioonide valepositiivsete tulemuste diferentsiaaldiagnostikas, sealhulgas rasedatel. RIBT annab 100% positiivse tulemuse sekundaarse, varajase ja hilise süüfilise, 94-100% juhtudest - muude süüfilise vormide puhul.

Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF)

Reaktsiooni olemus seisneb selles, et treponema pallidum (antigeenid) koos fluorokroomidega märgistatud antikehadega kiirgavad fluorestsentsmikroskoobis kollakasrohelist kuma. Tulemust hinnatakse (+) märgiga. RIF-i abil tuvastatakse klassi A immunoglobuliinid. Immunofluorestsentsreaktsioon muutub positiivseks varem kui Wassermani reaktsioon. See on alati positiivne sekundaarse ja latentse süüfilise korral, 95 - 100% juhtudest on see positiivne tertsiaarse ja kaasasündinud süüfilise korral. Seda tüüpi uuringute läbiviimise tehnika on lihtsam kui RIBT-i oma, kuid RIF-i on võimatu asendada RIBT-ga, kuna see reaktsioon on spetsiifilisuselt madalam kui RIBT. RIF-10 (RIF-i modifikatsioon) on tundlikum, RIF-200 ja RIF-abs on spetsiifilisemad.

Riis. 9. Süüfilise vereanalüüs – immunofluorestsentsreaktsioon (RIF).

Treponema pallidum immuunadhesioonireaktsioon (IPAT)

Reaktsiooni olemus seisneb selles, et patsiendi seerumi poolt sensibiliseeritud treponema pallidum kleepub komplemendi juuresolekul punaste vereliblede pinnale. Saadud kompleksid sadestuvad tsentrifuugimise ajal. Selle testi tundlikkus ja spetsiifilisus on RIF-i ja RIBT-i lähedased.

Süüfilise ensüümimmunoanalüüs (ELISA)

ELISA abil määratakse immunoglobuliinid klassist M ja G. IgM - ELISA tehnikat saab kasutada sõeluuringu ja kinnitava testina. ELISA tundlikkus ja spetsiifilisus on sarnased RIF-iga. Süüfilise puhul annab ELISA positiivseid tulemusi alates kolmandast nakatumiskuust ja püsib positiivsena üsna pikka aega (mõnikord kogu elu).

Riis. 10. Ensüümi immuunanalüüsi analüsaator.

Passiivne (kaudne) hemaglutinatsioonireaktsioon (RPHA)

RPHA põhineb punaste vereliblede võimel kleepuda kokku (hemaglutinatsioon), millele on adsorbeeritud treponema pallidum'i antigeenid patsiendi seerumi juuresolekul. RPGA-d kasutatakse kõigi süüfilise vormide, sealhulgas latentse süüfilise diagnoosimiseks. Kvaliteetse antigeeni kasutamisel ületab seda tüüpi seroloogiline reaktsioon kõiki teisi spetsiifilisuse ja tundlikkuse teste.

Riis. 11. RPGA-d kasutatakse süüfilise kõikide vormide diagnoosimiseks.

Riis. 12. Süüfilise test - passiivne (kaudne) hemaglutinatsiooni reaktsioon (skeem).

Riis. 13. Ümberpööratud vihmavarju ilmumine, mis hõivab kogu katseklaasi põhja, näitab positiivset reaktsiooni. Juhul, kui punased verelibled settivad katseklaasi põhja keskel olevasse veergu (“nupp”), näidatakse negatiivset reaktsiooni.

Riis. 14. RPGA test laboritingimustes.

Mikrobioloogiline diagnostika

Koos seroloogiline diagnostika Treponema pallidum'i tuvastamise meetod (mikrobioloogiline diagnoos) mängib olulist rolli, eriti seronegatiivse süüfilise perioodil, mil veres pole veel antikehi, kuid on juba esimesed värske primaarse süüfilise (chancroid) ilmingud.

Uuringu bioloogiline materjal on eritis kõvade haavandite (šankri) pinnalt, pustuloossete süüfiliitide sisu, nutvad ja erosioonilised papulid, nakatunud lümfisõlmede punktsioonid, tserebrospinaalvedelik ja amnionivedelik; PCR jaoks - veri.

Parim meetod süüfilise patogeenide tuvastamiseks on bioloogilise materjali uurimine tumevälja mikroskoobis. See tehnika võimaldab näha treponema pallidum'i elavas olekus, uurida selle struktuurilisi iseärasusi ja liikumist ning eristada patogeenseid patogeene saprofüütidest.

Riis. 15. Süüfilise analüüs – tumevälja mikroskoopia.

Riis. 16. Kuivmäärde uurimisel kasutatakse Romanovsky-Giemsa värvimist. Kahvatu treponeemid muutuvad roosaks, kõik muud tüüpi spiroheedid muutuvad lillaks.

Treponema pallidum'i tuvastamine tumevälja mikroskoopia abil on süüfilise lõpliku diagnoosimise absoluutne kriteerium.

Riis. 17. Bakterite tuvastamiseks kasutatakse immunofluorestsentsreaktsiooni (RIF) - treponemaalset testi. Spetsiifiline kompleks antigeen-antikeha kombineerituna spetsiifilise fluorokroomiga märgistatud seerumiga annab see fluorestsentsmikroskoobi valguses bakteritele roheka sära.

Riis. 18. Levaditi meetodil (hõbedaga immutamine) valmistatud määrdudes on süüfilise tekitajad selgelt näha. Kahvatu treponema on nakatunud kudede rakkude kollase värvuse taustal tumedat värvi.

Riis. 19. Süüfilise tekitaja mitmekordsel suurendusel.

Riis. 20. Fotol on Treponema pallidum'i koloonia. Bakterikultuuri on raske saada. Kunstlikul toitainekeskkonnal nad praktiliselt ei kasva. Hobuse ja küüliku seerumit sisaldaval söötmel tekivad kolooniad 3.–9. päeval.

PCR süüfilise jaoks

Tänapäeval on tõhus ja paljutõotav tehnika polümeraas ahelreaktsiooni. Süüfilise PCR võimaldab teil saada tulemusi mõne tunni jooksul ja diagnoosimiseks kogutud materjalis võib esineda vähemalt mitu patogeeni.

Riis. 21. Süüfilise PCR võimaldab tuvastada Treponema pallidum'i DNA-d või selle fragmente.

Selle uurimismeetodi tundlikkus sõltub Treponema pallidum'i olemasolust bioloogilises materjalis ja ulatub 98,6% -ni. Selle testi spetsiifilisus sõltub suuresti diagnoosimise ajal amplifikatsiooni sihtmärgi õigest valikust ja jõuab 100% -ni.

Samal ajal ei ole süüfilise ja PCR-i diagnoosimise otseste meetodite tundlikkuse ja spetsiifilisuse ebapiisavalt uuritud võrdlevate omaduste tõttu Vene Föderatsioonis seda haiguse diagnoosimise uurimismeetodit veel heaks kiidetud.

Süüfilise PCR-i on lubatud läbi viia ainult teatud juhtudel, näiteks täiendav meetod kaasasündinud süüfilise, neurosüüfilise diagnoosimine, süüfilise diagnoosimise raskuste korral HIV-patsientide seroloogiliste uurimismeetodite abil.

Süüfilis on ohtlik sugulisel teel leviv haigus, mille põhjustajaks on Treponema pallidum, mis levib sugulisel teel ja võib mõjutada kõiki kehaorganeid ja süsteeme. Hetkel kl õigeaegne diagnoos ja läbiviidud teraapiaga sai võimalikuks süüfilist täielikult ravida.

Selle haiguse diagnoos põhineb laboratoorsetel ja kliinilistel andmetel.

Süüfilise seroloogiliste reaktsioonide tüübid

Laboratoorsete testide hulgas on eriti hinnatud seroloogiline analüüs, mis on vajalik mitte ainult haiguse diagnoosimiseks, vaid ka üldpildi uurimiseks ravimeetmete mõjust haigusele ja ravi efektiivsuse uurimiseks.

Seroloogiline reaktsioon süüfilisele on muutunud omaette meditsiiniharuks. Väärib märkimist, et need loodi Erinevat tüüpi selline diagnostika, mis on paljudes riikides ametlikult tunnustatud. Sel juhul on vajalik, et arstil oleks seroloogia valdkonnas piisav kvalifikatsioon, mis on vajalik tulemuste õigeks tõlgendamiseks.

Meie riigi ruumis seroloogiline uuring süüfilise puhul kasutage järgmisi juhiseid (kinnitatud 1995. aastal):

1. CSR (seroloogiliste reaktsioonide kompleks). See loend sisaldab treponemaalse ja kardiolipiini antigeenide seondumisreaktsiooni komplementidega. Samuti mikrosadestamise reaktsioon kardiolipiini antigeeniga;

2. Treponemaalsed reaktsioonid. Nad kasutavad Treponema pallidumi reaktsioone ja immunofluorestsentsreaktsioone.

Sellel süüfilise seroloogilise analüüsi jaoks kohustuslike meetmete väikesel loetelul on erinev "tundlikkus", spetsiifilisus ja seda soovitatakse rangelt iga üksikjuhtumi ja ülesande puhul. Vaatame nüüd lähemalt.

Sademete mikroreaktsioon. Omadused ja tulemused

Seda kasutatakse elanikkonna massiliseks süüfilise sõeluuringuks. On sorte - mikroreaktsioon stelal, ekspressmeetod süüfilise diagnoosimiseks, mille puhul kasutatakse nii katsealuste vereseerumit kui ka plasmat. See reaktsioon tekib kokkupuutel spetsiifilise kardiolipiini antigeeniga.

Reeglina hinnatakse analüüsi tulemust kvalitatiivselt - 4+, 3+, 2+, negatiivne. Ekspressmeetod võimaldab omakorda saada tulemusi poole tunni jooksul ning uuringuks kulub vaid paar tilka vereplasmat, mis võetakse patsiendi sõrmest.

Samamoodi vaadatakse läbi need isikud, kes on arvel venereoloogiaosakonnas. Kui sellist analüüsimeetodit rakendatakse lokaalselt, isoleeritult, siis on see ainult sõeltest.

Ekspresstesti põhjal ei saa kindlalt väita, et haigel on süüfilis, kuid positiivse tulemuse korral saab arst kirjutada saatekirja dermatoveneroloogile. See spetsialist viib läbi täiendava uuringu, kasutades muid meetodeid - RIF, USR, RIBT. Samuti väärib märkimist, et ekspresstesti ei testita rasedatel ega doonoritel, kuna enamikul juhtudel saadakse ekslik positiivne tulemus. Tihti saavad kiirtesti teha spetsiaalse väljaõppe läbinud tervishoiutöötajad, kuid analüüsi uurimiseks ja tulemuste määramiseks on vaja laborandid.

Komplimendi sidumisreaktsioon ehk CBR

Esialgse diagnoosi kinnitamiseks on vajalik reaktsioon kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega (kui kiirtest ja MP näitasid positiivset tulemust). Tõsi, seda protseduuri soovitatakse kasutada aktiivsete ilmingute korral või kui uuritavatel on olnud seksuaalset kontakti süüfilisega nakatunuga. Lisaks tuleks inimestel, kellel kahtlustatakse varjatud (latentset) süüfilist, diagnoosida RSC. Loomulikult on ravi efektiivsuse määramiseks ette nähtud ka reaktsioon komplimendi sidumisele.

Uurimiseks kulub kubitaalveenist 5-7 milliliitrit verd. Imikutel võetakse analüüsimiseks verd temporaalveenist või kanna sisselõikest.

Patsiendilt tuleb vereproovid võtta "tühja kõhuga". Järgmisena jätab arst proovi kuiva puhtasse katseklaasi 2-3 tunniks toatemperatuurile (see on vajalik hüübimiseks). Seroloogiliste reaktsioonide komplekt viiakse läbi spetsiaalselt ettevalmistatud laborites.

Kirjeldatud reaktsiooni toimimispõhimõte on seletatav asjaoluga, et arvatavasti süüfilisehaigete vereseerumis leiduvad reaginid on võimelised reageerima erinevate antigeenidega. Saadud kompleksid klassifitseerivad reaktsioonis osaleva aine. CFR-i indekseerimiseks kasutatakse hemolüütilist süsteemi (s.t. kasutatakse lamba erütrotsüütide segamist hemolüütilise seerumiga).

Kui CSR esineb, sadestuvad punased verelibled ja see protsess on palja silmaga märgatav. Reaktsiooni raskusastme määrab arst vastavalt järgmisele klassifikatsioonile:

• 4+ Väga positiivne.
• 3+ positiivne.
• 2+, 1+. Nõrgalt positiivne.
• Negatiivne.

Tuleb märkida, et lisaks kvalitatiivsele hindamisele kasutatakse kvantitatiivset hindamist. Selline hindamissüsteem on vajalik süüfilise arenguastme ja ravi efektiivsuse kindlakstegemiseks.

Seda uurimispõhimõtet kasutasid esmakordselt 1906. aastal Neisser, Brook ja Wasserman. Nad kasutasid antigeenina toimimiseks maksa vesiekstrakti. Seejärel hakati sellist reaktsiooni asendama teiste antigeenidega, mis muutis selle veelgi tundlikumaks. Praegu on reaktsiooni lavastamiseks soovitatav kasutada järgmisi antigeene:

• Cordylipyl antigeen (veise südameekstrakt liigse letsitiini ja kolesterooliga).
• Treponemaalne antigeen (apatogeensete kultuuriliste treponeemide suspensioon, mida on töödeldud ultrahelikiirgusega).

Nende antigeenide seondumisreaktsioon saavutab positiivse tulemuse kahe kuni nelja nädala pärast alates pealekandmise hetkest ja suureneb järk-järgult, saavutades maksimaalse tiitri, mida täheldatakse sekundaarse värske süüfilise ilmnemisel. Seejärel väheneb konkreetsete ainete tiiter järk-järgult ja süüfilise korduva vormi korral ei ületa see reeglina 1:180–1:120. Süüfilise tertsiaarsete ilmingute all kannatajate seas on kirjeldatud reaktsioon positiivne 70 protsendil juhtudest.

Oluline on märkida, et seroloogiliste reaktsioonide kogum ei ole ainulaadne süüfilise näitaja inimkehas ja võib anda mittespetsiifilisi (valepositiivseid) tulemusi. Tõsi, see juhtub siis, kui spetsialist tegi uuringul vea - ebakvaliteetne vereproovi võtmise protseduur, määrdunud katseklaasid, madal kvalifikatsioon jne.

Lisaks saavad pidalitõve, malaaria ja situatsiooniliste haiguste all kannatavad patsiendid enamasti valepositiivse tulemuse. Samuti võivad eksliku diagnoosi saada tuberkuloosi, maksahaigust põdevad ja ravimeid tarvitavad inimesed. Naistel võib valepositiivse diagnoosi panna, kui patsient on rase või tal on menstruatsioon.

• Imikutel kümnendal elupäeval;
• Palaviku sümptomite korral kahe nädala jooksul pärast sündi;
• Kui patsiendil on värsked vigastused, siis see oli kirurgiline sekkumine, vaktsineerimine.

Ja kõik sellepärast, et selliste nähtuste ajal vereseerumis esinevad füüsikalis-keemilised reaktsioonid võivad samuti näidata süüfilise valepositiivset tulemust.

RIF reaktsioon

Valepositiivsete ja tõeste uuringutulemuste eristamiseks kasutab meie riigi CSR spetsiifilisi seroloogilisi reaktsioone, nagu RIF ja RIBT. Seda uurimismeetodit soovitatakse kasutada ka haiguse vormi diagnoosimiseks ja süüfilise infektsiooni kahtluse korral.

Selle protseduuri läbiviimiseks vajate 5-10 ml verd, mille võib võtta ka kubitaalveenist "tühja kõhuga". Saadud veri valatakse kuiva katseklaasi, jäetakse mõneks ajaks hüübimisruumi ja saadetakse hiljem uuringuks spetsiaalsesse laborisse, mis on saadaval dermatoveneroloogia osakondades.

RIF-reaktsiooni aluseks on kaudne meetod fluorestseeruvate antikehade tuvastamiseks. Antigeen, millega seonduda sel juhul toimib ultraheliga töödeldud Treponema pallidum'i suspensioonina. Nii fikseeritakse aine klaasalustele, kus eksponeeritakse ka patsiendi vereainet koos liigivastase fluorestseeruva seerumiga. Tulemuse määramiseks vajate fluorestsentsmikroskoopi, mille abil spetsialist hindab treponeemide luminestsentsi astet. Arvatakse, et positiivse tulemuse korral on treponeemidel kollakasroheline sära ja selle protsessi "võimsust" hinnatakse plussidega (ühest neljani). Negatiivne tulemus – treponeemid ei helenda.

RIBT reaktsioon

Teine test, mis aitab süüfilist diagnoosida, on RIBT, mida kasutasid esmakordselt 1949. aastal Nelson ja Meyer. Selle aluseks on immobiliseeritud, kahvatu treponeemide nähtus patsiendi vereseerumis sisalduva antigeeni poolt, milles esineb komplement.

Reaktsiooni antigeenina kasutatakse elusat kahvatut treponeemi, mis saadakse süüfilisega nakatunud küülikute verest. Liikuvuse kaotanud treponeemide loendamine toimub mikroskoobi all. Reaktsiooni tulemust hinnatakse protsentides, kus:

• negatiivne – 0-20%
• Kahtlane – 21-31%
• Nõrgalt positiivne – 31-50%
• Positiivne – 51-100%.

Reaktsioon võib näidata positiivset tulemust süüfilise esmase staadiumi lõpus ja enamikul juhtudel ei muutu tulemus haiguse kõigis etappides. Mõnikord on RIBT positiivne isegi täieliku taastumise korral. Tertsiaarse süüfilise, siseorganite kahjustuste, kaasasündinud süüfilise korral, kui CSR ei näita tulemusi täpselt, annab see reaktsioon tõesed tulemused 98-100% juhtudest. Muide, süüfilise varjatud vormi diagnoosimiseks on vaja RIBT-diagnoosi.

RIBT võib näidata valepositiivset tulemust, kui testitud veri sisaldab treponematoossete ainete elemente - antibiootikume, mis põhjustavad elus Treponema pallidum'i mittespetsiifilist immobilisatsiooni. Seetõttu on soovitatav võtta veri patsiendilt, kellele on välja kirjutatud antibiootikumid, mitte varem kui kaks nädalat pärast antibakteriaalse ravi lõppu.

Tserebrospinaalvedeliku analüüs

Sageli kasutatakse süüfilise närvisüsteemi kahjustuse ulatuse täpseks määramiseks seroloogilist uuringut. Selleks kasutatakse analüüsi, mis põhineb patsiendi tserebrospinaalvedelikul. See uuring aitab määrata ka valgu- ja ensüümielemente, mis viitavad patoloogia arengule, ning "muudab" arstil diagnoosi täpsustamist. Nagu võite arvata, kogutakse tserebrospinaalvedelikku mitte sõrmest, vaid lumbaalpunktsiooni abil. See protseduur nõuab arstilt ettevaatust, järgides kõiki eeskirju ja ettevaatusabinõusid, et mitte halvendada patsiendi olukorda. Reeglina on selline uuring ette nähtud kesknärvisüsteemi süüfilise mis tahes vormi kahtluse korral.

Süüfilise seroloogiline vereanalüüs on tehtud suur väärtus haiguse diagnoosimise küsimuses. Oluline on mõista, et tegemist ei ole ühe analüüsiga, vaid terve kompleksiga vereanalüüse, mille eesmärk on kinnitada või ümber lükata haiguse esinemist inimesel.

Ei saa öelda, et selliste uuringute olulisus oleks sama, olenemata haiguse perioodist. Seega, kui esmase sümptomi - chancre - ilmnemisest ei ole möödunud rohkem kui kolm nädalat, on suur tõenäosus, et vereanalüüs ei näita haiguse tekitaja olemasolu, eksitades seeläbi inimest, et ta on terve. . Isegi pärast kuu möödumist süüfiloomi algusest ei ole süüfilise seroloogiline test alati positiivne, kuigi ilmsed välised tunnused viitavad juba haiguse esinemisele patsiendil.

Positiivsete seroloogiliste reaktsioonide protsent suureneb aja jooksul - kõige sagedamini haiguse sekundaarse staadiumi alguses. Sel hetkel, kui inimesel ilmnevad sekundaarse staadiumi süüfilise välised tunnused, näitavad peaaegu 100% uuringutest viiruse esinemist veres. See vereanalüüs on üsna informatiivne ka haiguse retsidiivide korral - selle täpsus, nagu sekundaarsel kujul, ulatub 100% -ni. Kuid haiguse tertsiaarset perioodi on süüfilise seroloogilise testi abil üsna raske ära tunda: ainult umbes iga kuuendal patsiendil on positiivne tulemus.

Süüfilise seroloogilised testid ravi efektiivsuse hindamiseks

Kui inimesele määratakse antisüüfiline ravi, on selle efektiivsuse pidev hindamine väga oluline. Seega, kui haigus avastatakse algstaadiumis, siis hiljemalt kaks kuud pärast ravi algust peaks test muutuma negatiivseks, vastasel juhul tuleks mõelda ravimeetodite muutmisele. Sama või veidi erinevat pilti tuleks jälgida haiguse sekundaarses vormis. Oluline on mõista, et seroloogilise testi positiivne tulemus ei ole põhjus kasutatavate ravimite annuse suurendamiseks, vaid vajadus ravikuuri täielikuks ülevaatamiseks.

Verepreparaatide uurimisel haiguse tertsiaarsel perioodil, samuti hilise kaasasündinud süüfilise korral on seroloogilised reaktsioonid tavaliselt positiivsed, olenemata kasutatud ravist. Negatiivsed testid võib harvadel juhtudel ilmneda ravikuuri lõpus ja kõige sagedamini - aasta või kaks pärast ravi lõppu. Mõnel juhul võivad seroloogilised testid näidata positiivseid tulemusi kogu elu jooksul. Kõige sagedamini tekib selline olukord neil, kes on haigust halvasti ravinud või alustanud ravi kaugelearenenud kujul.

Seroloogiliste reaktsioonide näitajad - taastumise kriteeriumina

Puuduvad näitajad, mis viitaksid süüfilise täielikule paranemisele. Vaatamata selliste uuringute tähtsusele on nende põhjal võimatu järeldusi teha. Lisaks võimaldab just seroloogiline kontroll tuvastada õigeaegselt haiguse retsidiivi, isegi kui sel hetkel puuduvad ilmsed kliinilised tunnused. Samuti on oluline mõista, et negatiivsed testitulemused ei taga paranemist. Paranemise kinnitamiseks on vaja andmeid teistest vereanalüüsidest ja teavet läbiviidava ravi kohta.