ELISA vereanalüüs parasiitide tuvastamiseks: ärakiri. Mis on ELISA analüüs? Mis on ensüümi immuunanalüüs

Selliste bioloogiliselt aktiivsete ainete kui immunoloogiliste komplekside sisalduse taseme määramiseks on vaja spetsiaalset laboratoorset uuringut. Hematoloogilise, nakkusliku või autoimmuunhaiguse kahtluse korral määravad spetsialistid ELISA vereanalüüsi. Artikli käigus kaalume, mis see on, kuidas selleks valmistuda, mida see näitab ja kuidas seda ise dešifreerida.

Mis uuring see on - ELISA vereanalüüs? Lühend tähistab ensüümi immunoanalüüsi, mis määrab erinevate bioloogiliselt aktiivsete ainete, aga ka antikehade ja antigeenide kvantitatiivse ja kvalitatiivse sisalduse bioloogilises materjalis.

Mida kasutatakse ensüümi immuunanalüüsis:

tserebrospinaalvedelik;
kusiti lima, emakakaela kanal;
amnionivedelik;
klaaskeha sisu.

Ensüüm-immunoanalüüs on ette nähtud sugulisel teel levivate haiguste, nakkus- ja onkoloogiliste protsesside, allergiliste reaktsioonide, endokriin- ja reproduktiivsüsteemi häirete, autoimmuun- ja immuunpuudulikkuse haiguste diagnoosimiseks, samuti mõne neeru haigestumise riski hindamiseks.

ELISA vereanalüüs raseduse ajal on ette nähtud varajaseks avastamiseks, arenguhäirete algstaadiumis ja nende dünaamika kontrolli all hoidmiseks. Lisaks võimaldab ELISA analüüs kontrollida antikehade taset, mis võivad provotseerida lapse raskete neuroloogiliste häirete teket, vältides seeläbi tüsistuste teket mitte ainult raseduse, vaid ka sünnituse ajal.

See võimaldab eelnevalt tuvastatud probleemidele reageerida ja oluliselt parandada nii ema enda kui ka beebi tervist.

Vere ELISA eelised hõlmavad järgmist:

kõrge (kuni 90%) tundlikkuse aste;
varajase diagnoosimise võimalus koos haiguse staadiumi samaaegse kindlaksmääramisega;
reaktiivide madal hind ja sellest tulenevalt ka kättesaadavus;
minimaalne uurimistöö materjali hulk;
minimaalsed kättesaamise tingimused;
reaktiivide pikaajalise ladustamise võimalus;
võime kontrollida patoloogilise protsessi arengu dünaamikat.

Testimissüsteemid

Ensüümi immuunanalüüsi miinused:

haiguse põhjustajat on võimatu täpsustada, laboris saavad nad sellele ainult immuunvastuse
vale tulemuse saamise võimalus (väga harvadel juhtudel, peamiselt tiinuse perioodil).

Ettevalmistus

Seda tüüpi vereanalüüsi põhimõte põhineb spetsiifiliste antikehade moodustumisel inimkehas, kui antigeenid sisenevad sellesse, see tähendab võõrkehad, mis põhjustavad konkreetse haiguse arengut. Nende interaktsiooni tulemusena moodustuvad "antigeen-antikeha" kompleksid, mida uuritakse ensüümi immuunanalüüsi käigus.

Sellega seoses, et mitte mõjutada neid komplekse ja vastavalt saadud tulemuste usaldusväärsust, vajab ELISA vereanalüüs ja muu bioloogiline materjal teatavat ettevalmistust.

Samuti peatatakse 14 päeva enne kavandatud uuringut spetsiifiline ravi ja antibakteriaalsete, viirusevastaste ravimite kasutamine.

ELISA jaoks võetakse veri veenist. Vahetult enne vereproovi võtmist tuleks piirata füüsilist aktiivsust, samuti tuleks välistada suitsetamine ja alkohoolsete jookide joomine.

Ensüümi immuunanalüüsi läbiviimiseks on mitu tehnikat ja meetodit: otsene ja kaudne meetod, konkureeriv ja blokeeriv meetod.

ELISA vere (mis tahes muu bioloogilise materjali) uurimise aluseks on algoritm, mis seisneb kahe reaktsiooni - immuun- ja ensümaatilise - elluviimises.

Esimesel ajal seonduvad patoloogilised ained uuringuks võetud bioloogilise materjali rakkude kaitseelementidega. Moodustub immuunkompleks "antigeen - antikeha". See näeb välja selline. Antigeenid esinevad absoluutselt kõigi rakkude pinnal.

Kui võõrrakud sisenevad kehasse, võtavad need kinni immuunrakud (mille pindadel paiknevad antikehad), mis võrdlevad äsja saabunud rakkude pinnalt saadud antigeeniandmeid nende enda “mällu” salvestatud teabega. Nende andmete lahknevuse korral kaasatakse keha kaitsefunktsioonid, mis seisnevad immuunkompleksi moodustamises.

Pärast seda viiakse läbi ensümaatiline reaktsioon, mis visualiseerib eelmise reaktsiooni tulemused. Selle põhimõte põhineb aine muundumisel ühelt teisele. Iga materjali immuunreaktsiooni käigus tekkiva ELISA tüübi jaoks on teatud ensüüm, mille töötlemist kasutatakse võõraine kontsentratsiooni määramiseks (lahuse värvumise intensiivsuse järgi).

Dekrüpteerimine

Tänu ELISA vereanalüüsile määravad laborandid kindlaks A, G ja M. Vere (muude bioloogiliste toorainete) ELISA analüüsi positiivne tulemus võimaldab mitte ainult diagnoosi panna, vaid ka haiguse staadiumi , samuti selle kulgemise olemus (äge või krooniline).

Need immunoglobuliinid moodustuvad patsiendi kehas patoloogilise protsessi juuresolekul haiguse erinevatel perioodidel:

Immunoglobuliinid M, IgM- moodustuvad viis päeva pärast haiguse algust ja püsivad veres 1,5 kuud, seejärel kaovad. IgM-i tuvastamine näitab ägeda primaarse patoloogilise protsessi esinemist organismis ja vajadust tõhustatud terapeutilise sekkumise järele.
Immunoglobuliinid G, IgG- esinevad neli nädalat pärast nakatumist, nende olemasolu organismis saab tuvastada mitu kuud. IgG tuvastamine näitab inimese varasema haiguse olemasolu anamneesis. Nende sisalduse suurenemine võib samuti viidata uuesti nakatumisele.
Immunoglobuliinid A, IgA- ilmnevad nakatumise ajal ja on kehas neli nädalat. Nende sisalduse vähenemine näitab taastumise algust. Analüüsides uuesti esinemine pärast ravikuuri läbimist ja paranemist näitab haiguse üleminekut kroonilisse vormi. IgA ja IgG samaaegne tuvastamine ELISA tulemustes näitab ka kroonilise protsessi olemasolu kehas.

Samuti tuleb märkida, et IgG ja IgM samaaegne esinemine analüüsides näitab kroonilise protsessi ägenemist ja patsient vajab ravi alustamist. Kui uuringu käigus ei tuvastatud ühtegi immunoglobuliini, tähendab see immuunvastuse puudumist.

Sisu

Kaasaegne diagnostika ei ole täielik ilma ülitundlike laboratoorsete testideta. Varem viisid arstid haiguse põhjuse väljaselgitamiseks ja nakkuse põhjustaja tuvastamiseks läbi erinevaid mikroskoopilisi mitmeetapilised uuringud. Tänapäeval on esialgse diagnoosi ümberlükkamiseks või kinnitamiseks vaja teha ainus test - ensüümi immuunanalüüs (ELISA). See laboriuuring aitab hinnata inimeste tervislikku seisundit ning diagnoosida hematoloogilisi, onkoloogilisi, autoimmuunseid, nakkuspatoloogiaid.

Mis on ensüümi immuunanalüüs

Ensüümi immuunanalüüsi meetod on kaasaegne laboratoorne vereanalüüs antigeenide, patogeenide antikehade ja haiguse viiruste esinemise kohta selles. ELISA meetod aitab arstil tuvastada haiguse etioloogiat, määrata selle faasi, päritolu vanuse, inimesele ohtlikkuse taseme ja teha ravis vajalikud kohandused. Ensüümi immuunanalüüsis uuritakse teistest sagedamini M- ja G-rühmade antikehade olemasolu. Mis need on?

Kui patogeenne mikroorganism siseneb vereringesse, käivitab immuunsüsteem kaitsereaktsiooni antikehade (immunoglobuliinide) vabanemise näol. Need ained seonduvad rakuga ja näitavad, kas see on kehaosa või on pärit väljastpoolt. Kui süsteem on tuvastanud, et mikroorganism on võõras, suureneb patogeense viirusega võitlemiseks antikehade arv. Immunoglobuliine (Ig) on mitut tüüpi: mõned ilmuvad nakatumise perioodil, teised jäävad kogu eluks, arendades tugevat immuunsust. Antikehad meditsiinis on tähistatud: A, D, E, M, G.

ELISA meetodiga uuritakse verd, kuigi on ka teist tüüpi ensüümi immuunanalüüsi. Reeglina erinevad need võetud vedeliku tüübi poolest, mille põhjal koostist edasi uuritakse ja antigeenide olemasolu määratakse. Samal ajal võetakse uuringuteks nii inimese verd kui ka muid vedelikke:

klaaskeha sisu;
emakakaela kanali ja ureetra lima;
amnionivedelik;
määrib;
tserebrospinaalvedelik.

Näidustused kohtumiseks

allergilised reaktsioonid;
immuunpuudulikkus;
viirusliku päritoluga vaevused (hepatiit, herpes, Epstein-Barri viirus, tsütomegaloviirus);
suguhaigused, sugulisel teel levivad suguhaigused (ureaplasma, süüfilis, trihhomonas, klamüüdia, mükoplasma);
maksahaigused;
neurosüüfilis (kesknärvisüsteemi (kesknärvisüsteemi) nakkuslik kahjustus).

Vereanalüüs ELISA jaoks tehakse sageli preoperatiivse tervikliku läbivaatuse käigus, et määrata hormoonide tase ja hinnata ravi kvaliteeti. Saadud andmete suur täpsus aitab arstil saada üksikasjalikku ettekujutust tervislikust seisundist. Samal ajal saadakse tulemused lühikese aja jooksul, mis võimaldab teil jälgida haiguse arengu dünaamikat.

Meetodi eelised

Vere ELISA meetodi vaieldamatud eelised on selle kõrge tundlikkus, s.o. võime määrata soovitud ainet isegi selle madala kontsentratsiooni korral; ja spetsiifilisus, mis tähendab veavaba diagnoosi. Lisaks on vereseerumi uurimisel ELISA abil järgmised eelised:

Puudused

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi peamine puudus on see, et uuringu läbiviimisel peab arstil olema eelnevalt oletus haiguse olemusest. Nakkushaiguste diagnoosimisel on võimatu patogeeni kogemata leida ja selle ensüümi immuunanalüüsi omadusi kindlaks teha. Uuring on võimeline näitama ainult antikehade olemasolu patsiendi veres, mis näitab kaudselt kahjuliku mikroorganismi olemasolu.

Lisaks võib analüüs teostamistehnika rikkumise või ebaõige ettevalmistuse korral näidata valepositiivset või valenegatiivset tulemust. Vere seerumi ELISA uuring on täpne, kuid samas kallis meetod, mistõttu tuleks seda kasutada äärmuslikel juhtudel. Tulemuste tõlgendamist peaks usaldama ainult kvalifitseeritud spetsialist.

Ettevalmistus

Ensüüm-immunoanalüüs tuleb läbi viia vastavalt arsti soovitustele, kuna. uurimistulemusi mõjutavad sageli erinevad välistegurid. ELISA ettevalmistamise põhireeglid:

veeniverd tuleb võtta rangelt tühja kõhuga (tavaliselt peaks viimane söögikord olema 12 tundi enne uuringut);
analüüsi eelõhtul on vaja välistada ravimite võtmine (kui patsient võtab antihistamiini (allergiavastaseid) ravimeid, peate konsulteerima arstiga, kui kaua enne ELISA algust need tühistada);
enne uuringut ei saa suitsetada ja alkohoolseid jooke juua, sest see mõjutab tulemust negatiivselt;
enne analüüsi tuleks kindlasti piisavalt magada;
on vaja välistada igasugune füüsiline aktiivsus, stressitegurid;
Enamiku naissoost reproduktiivhormoonide diagnoosimiseks on vaja teatud menstruaaltsükli päevadel vereproove võtta.

Kuidas see läbi viiakse

Ensüümi immuunanalüüsi läbiviimiseks võtab patsient kubitaalveenist verd rangelt tühja kõhuga. Patsient peab eelnevalt teavitama arsti haiguste esinemisest ja võetud ravimitest, et uuringu tulemusi ei moonutataks. Üldreeglina tuleb kõik ravimid katkestada 16 päeva enne ELISA-d. Aistingud protseduuri ajal on sarnased biokeemilise analüüsi käigus vere võtmisega.

Materjal saadetakse laborisse, kus verest eraldatakse seerum, milles paiknevad antikehad. Saadud kompositsioon asetatakse antigeenidega katseklaasi. Need võivad olla mitmesugused allergeenid (piim, vill, õietolm, tsitrusviljad), viirus- ja nakkushaiguste patogeenid ja teised. Pärast reaktsiooni saamist tühjendatakse kogu järelejäänud seerum. Spetsiaalsete indikaatorite abil määravad eksperdid antikehade koguse. ELISA ajastus sõltub laborist. Reeglina saab uuringu tulemused esitada kahe päeva kuni nädala jooksul..

ELISA dekodeerimine

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs aitab määrata antikehade olemasolu organismis. Immunoglobuliine on mitut tüüpi:

IgM. Kõige esimesed ilmuvad pärast nakatumist. Nende antikehade olemasolu viitab haiguse ilmnemisele igal juhul, sest. tervel inimesel see klass puudub. Reeglina on IgM immunoglobuliinid veres umbes 6 nädalat.
IgA. Antikehi leidub suurtes kogustes limaskestadel, kaitstes keha patogeensete mikroobide tungimise eest. Kui patsiendil on see klass, on vaja haigusega intensiivsemalt võidelda. Lõppude lõpuks esinevad immunoglobuliinid A ainult krooniliste haiguste korral. IgA kadumine näitab infektsiooni hävimist.
IgG. Selle klassi immunoglobuliinid näitavad, et inimene on kas nakkuse kandja või tal on juba haigus olnud. Neid antikehi toodetakse pärast IgM-i üks kuu pärast nakatumist. G-klassi immunoglobuliinid võivad organismis olla 5-6 aastat, kaitstes seda haiguse kordumise eest ja süüfilise puhul on sellised antikehad kogu eluks.

ELISA analüüsi tegemisel lapsepõlves (kuni 1,5 aastat) tuleb meeles pidada, et lapse veri sisaldab ema IgG antikehi infektsioonide vastu. Kuigi see ei tähenda, et laps oleks haige, on see fakt pigem norm. M-klassi esinemine viitab emakasisesele või sünnijärgsele infektsioonile, tk. ema IgM antikehad ei suuda platsenta kaudu lapse kehasse tungida. 3 klassi antikehade olemasolu või puudumise võimalike kombinatsioonide dekodeerimine on esitatud tabelis:

ELISA tulemusi peaks tõlgendama kvalifitseeritud arst. Reeglina tähistab (+) analüüsi positiivset tulemust ja (-) negatiivset. Tulemust, mis näitab aine puudumist või olemasolu, nimetatakse kvalitatiivseks. Mõnikord lisandub sellele kvantitatiivne, mis näitab erinevate ainete arvu kehas. Sageli on testimissüsteemil oma võrdlusväärtused (korrelatiivsed). Selliste näitajate ületamine tähendab patoloogiate esinemist patsiendil.

Vastunäidustused

Ensüümi immuunanalüüsi jaoks ei olnud kardinaalseid vastunäidustusi. Mõnikord võib raseduse ajal, kui patsiendil on pidev hormoonide muutus veres, olla usaldusväärsema tulemuse saamiseks vajalik korduv analüüs. Diagnostikameetodit ei soovitata kasutada pärast:

kirurgilised sekkumised;
hemolüüs (punaste vereliblede hävitamine);
vereülekanded;
bioloogilise materjali punktsiooni või biopsia võtmine.

Ensüümi immuunanalüüsi hind

ELISA uuringu maksumus sõltub raviasutuse poliitikast, analüüsi tüübist ja määratavast antigeenist, sest nende tegurite põhjal arvutatakse välja reaktiivikomplektide hind ja määratakse uuringu keerukus. Reeglina on ensüümi immuunanalüüs avalikult kättesaadav protseduur, meetodi keskmine maksumus varieerub 300-2000 rubla ulatuses. Ensüümide immuunanalüüsi ligikaudsed hinnad Moskvas on esitatud tabelis:

Video

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA – inglise keel) astus praktilise meditsiini ellu eelmise sajandi 60ndatel aastatel. Tema lähteülesandeks oli histoloogiline uurimine teaduslikel eesmärkidel, mis piirdus elusorganismi rakkude antigeense struktuuri otsimise ja tuvastamisega.

ELISA meetod põhineb spetsiifiliste (AT) ja seotud antigeenide (AG) interaktsioonil antigeen-antikeha kompleksi moodustumisega, mis tuvastatakse ensüümi abil. See asjaolu viis teadlased mõttele, et seda meetodit saab kasutada diagnostilistel eesmärkidel, et tuvastada eri klassidesse kuuluvad spetsiifilised immunoglobuliinid, mis on seotud konkreetse infektsiooni immuunvastusega. Ja see oli läbimurre kliinilises laboratoorses diagnostikas!

Meetodit hakati aktiivselt kasutama alles 80ndate alguses ja seejärel peamiselt spetsialiseeritud asutustes. Esimesed ELISA analüsaatorid tarniti vereülekandekeskustesse ja -jaamadesse, nakkus- ja suguhaiglatesse, kuna Aafrika mandril sündinud hirmuäratav AIDS ilmus koos meiega silmapiirile ja ühines kohe "vanade" nakkustega, nõudis viivitamatuid meetmeid diagnoosimiseks ja teda mõjutavate terapeutiliste ravimite otsimine.

ELISA meetodi ulatus

Ensüümi immuunanalüüsi võimalused on tõeliselt ulatuslikud. Nüüd on raske ette kujutada, kuidas saab hakkama ilma selliste uuringuteta, mida kasutatakse sõna otseses mõttes kõigis meditsiiniharudes. Tundub, et ELISA saab onkoloogias hakkama? Tuleb välja, et saab. Ja palju. Analüüsi võime leida teatud tüüpi pahaloomulistele kasvajatele iseloomulikke markereid on kasvaja varajase avastamise aluseks, kui seda oma väiksuse tõttu veel muul viisil ei tuvastata.

Kaasaegne kliiniline laboratoorne diagnostika (CDL) omab lisaks kasvajamarkeritele märkimisväärset ELISA paneelide arsenali ning kasutab neid erinevate patoloogiliste seisundite (infektsioossed protsessid, hormonaalsed häired) diagnoosimiseks ja farmaatsiaravimite jälgimiseks, et teha kindlaks nende mõju patsiendi seisundile. keha ja, muide, mitte ainult inimene. Praegu on veterinaarteenistuses laialdaselt kasutusel ensüümimmunoanalüüs, sest ka "meie väiksemad vennad" on vastuvõtlikud paljudele haigustele, mida nad mõnikord väga põevad.

Seega ELISA võimaldab oma tundlikkuse ja spetsiifilisuse tõttu veenist võetud vereproovist määrata:

Hormonaalne seisund (kilpnäärme ja neerupealiste hormoonid, suguhormoonid);
Viirusliku ja bakteriaalse infektsiooni esinemine (HIV, B ja C, klamüüdia, süüfilis ja paljud muud patogeensete mikroorganismide põhjustatud haigused);
Nakkusprotsessi algatanud mikroorganismide elutegevuse jäljed, mis lõppesid edukalt ja liikusid selle patogeeni suhtes immuunvastuse moodustumise staadiumisse. Sellised jäljed ehk antikehad jäävad paljudel juhtudel verre ringlema kogu eluks, mis kaitseb inimest uuesti nakatumise eest.

Mis on IF-i olemus?

Ensüümi immuunanalüüsi meetod võimaldab määrata mitte ainult patogeeni enda olemasolu (kvalitatiivne analüüs), vaid ka selle kvantitatiivset sisaldust patsiendi vereseerumis.

Viiruse või bakteri doos mõjutab oluliselt nakkusprotsessi kulgu ja selle tulemust, seetõttu on kvantitatiivsel analüüsil oluline roll erinevate vormide ja staadiumite haiguste diagnoosimisel ja ravimisel.

Teades aga ensüümiga seotud immunosorbentanalüüse kui ELISA meetodit, ei mõtle me isegi sellele, kuidas see suudab katta nii suure hulga meie planeedil elavaid mikroorganisme, millest paljud kujutavad otsest ohtu inimeste tervisele ja elule ning loomad. Fakt on see, et ELISA-l on palju võimalusi (mittekonkureeriv ja konkureeriv - otsene ja kaudne), millest igaüks lahendab oma probleemi ja võimaldab seega sihipärast otsingut.

Ühe või teise klassi immunoglobuliinide tuvastamiseks kasutatakse traditsioonilist 96 süvendiga polüstüreenpaneeli (tabletti), mille süvendites on tahkes faasis kontsentreeritud adsorbeerunud rekombinantsed valgud. Vereseerumiga süvendisse sattunud antikehad või antigeenid leiavad "tuttava" objekti ja moodustavad sellega kompleksi (AG - AT), mis ensüümkonjugaadiga fikseerituna avaldub süvendi värvi muutusena. tulemuste lugemisel.

Ensüüm-immunoanalüüs viiakse läbi teatud spetsiifilisusega testimissüsteemidega, mis on valmistatud spetsiaalsetes laborites ja varustatud kõigi vajalike reageerivate komponentidega. Uuringuid saab läbi viia seibide ("seibide") ja lugemisspektrofotomeetrite abil, kus enamik on seotud käsitsitööga. Täisautomaatsetel masinatel, vabastades laborandi monotoonsest tilgutamisest, pesemisest ja muudest rutiinsetest ülesannetest, on loomulikult kiirem ja mugavam töötada, kuid mitte kõik laborid ei saa endale sellist luksust lubada ja jätkata tööd vanaviisi - poolautomaatsetel seadmetel.

ELISA tulemuste tõlgendamine on laboridiagnostika arsti pädevuses, samas kui peaaegu kõikidele immunokeemilistele reaktsioonidele omast omadust anda valepositiivseid või valenegatiivseid vastuseid võetakse tingimata arvesse.

Video: kaasaegne ensüümi immuunanalüüs

ELISA tulemused süüfilise näitel

ELISA sobib kõikide vormide tuvastamiseks ja lisaks kasutatakse seda sõeluuringutes. Analüüsiks kasutatakse patsiendi tühja kõhuga veeniverd. Töös kasutatakse teatud spetsiifilisusega plaate (AT klassid A, M, G) või totaalseid antikehi.

Arvestades, et süüfilise antikehad toodetakse kindlas järjestuses, saab ELISA abil hõlpsalt vastata küsimusele, millal infektsioon toimus ja millises etapis protsess on, ning saadud tulemuste dekodeerimise saab esitada järgmisel kujul:

IgM näitab nakkusprotsessi kestust (võib ilmneda krooniliste põletikuliste haiguste ägenemise ajal);
IgA teatab, et infektsioon juhtus rohkem kui kuu aega tagasi;
IgG näitab, et infektsioon on täies hoos või hiljutine ravi, mis on anamneesi kogumisel hõlpsasti tuvastatav.

Süüfilise testimisel jäävad negatiivsed süvendid (ja negatiivne kontroll) värvituks, positiivsel (nagu positiivsel kontrollil) on aga testi ajal lisatud kromogeeni värvimuutuse tõttu erekollane värv. Kuid värvi intensiivsus ei ühti alati kontrolliga, see tähendab, et see võib olla veidi kahvatum või kergelt kollakas. Need on kahtlased tulemused, mis reeglina kuuluvad uuesti läbivaatamisele, võttes kohustuslikult arvesse spektrofotomeetril saadud kvantitatiivseid näitajaid, kuid üldiselt on värvus otseselt võrdeline immuunkomplekside (seotud antigeenid ja antikehad) arvuga. üksteisele).

Ensüümi immuunanalüüsidest põnevaim – HIV-i ELISA

Analüüs selle kohta, võib-olla rohkem kui teistel, pakub huvi laiale elanikkonnarühmale, sest veel ei saa kindlalt väita, et paljud sotsiaalsed probleemid (prostitutsioon, narkomaania jne) on kadunud. Kahjuks ei mõjuta HIV mitte ainult neid inimühiskonna kihte, nakatuda võib erinevatel asjaoludel, mis ei ole seotud seksuaalse lolluse või uimastitarbimisega. Aga kui on vajadus HIV-testi järele, siis ei tasu karta, et kõik ümberkaudsed saavad sellise labori külastamisest teada. Nüüd on HIV-nakatunud isikud seadusega kaitstud ning kahtlused võivad pöörduda anonüümsetesse kontoritesse, kus saab probleemi lahendada, kartmata avalikustamist ja hukkamõistu.

HIV-nakkuse diagnoosimiseks kasutatav ensüümi immuunanalüüs on üks esmaseid standarduuringuid, mis aga nõuavad eritingimusi, kuna teema on väga tundlik.

HIV-i ELISA-d on mõttekas teha pärast seksuaalset kontakti, vereülekannet, muid nakkusega kaasnevaid meditsiinilisi protseduure ja inkubatsiooniperioodi lõpus (“seronegatiivne aken”), kuid tuleb meeles pidada, et see periood ei ole konstantne. See võib lõppeda 14–30 päeva pärast või võib kesta kuni kuus kuud, seega loetakse keskmiseks väärtuseks intervall 45–90 päeva. HIV-i puhul loovutatakse verd samamoodi nagu teiste infektsioonide puhul – veenist tühja kõhuga. Tulemused valmivad sõltuvalt materjali kogunemisest laborisse ja töökoormusest (2 kuni 10 päeva), kuigi enamik laboreid annab vastuse samal või järgmisel päeval.

Mida võib HIV-i tulemustest oodata?

HIV-nakkuse ELISA abil tuvastatakse kahe viiruse tüübi antikehad: HIV-1 (sagedamini Venemaal ning teistes Euroopa ja Aasia riikides) ja HIV-2 (sagedamini Lääne-Aafrikas).

HIV ELISA ülesandeks on otsida G-klassi antikehi, mis tuvastatakse kõigis testsüsteemides, kuid hilisemal perioodil, ning klassi A ja M antikehi, mis tuvastatakse uue põlvkonna rekombinantsete testide komplektidel, mis võimaldavad tuvastada antikehi kõige varem. etapid (inkubatsiooniperiood on seronegatiivne aken). ELISA-st võib oodata järgmisi vastuseid:

Esmane positiivne tulemus: verd kontrollitakse uuesti sama tüüpi, kuid võimalusel erineva seeria testisüsteemiga ja teise isiku poolt (laborant);
Korduv (+) hõlmab patsiendilt uue vereproovi võtmist, mille uuring sarnaneb esmase analüüsiga;
Järgmise positiivse tulemuse kohta tehakse võrdlusanalüüs, mille käigus kasutatakse väga spetsiifilisi testikomplekte (2-3 tk.);
Mõlema (või kolme) süsteemi positiivne tulemus saadetakse immunoblotanalüüsile (sama ELISA, kuid tehakse eraldi eriti kõrge spetsiifilisusega testikomplektidega).

Järeldus HIV-nakkuse kohta tehakse ainult immunoblotanalüüsi põhjal. Vestlus nakatunud inimesega toimub täielikus konfidentsiaalsuses. Meditsiinisaladuste avaldamine Venemaal ja ka teistes riikides on kriminaalkorras karistatav.

Erilist populaarsust on saavutanud ka klamüüdia ja tsütomegaloviiruse analüüsid ensüümi immuunanalüüsi abil, kuna need võimaldavad teil määrata nakatumise aja, haiguse staadiumi ja ravimeetmete tõhususe.

Sissejuhatuse käigus on võimalik jälgida ka erinevate klasside antikehade ilmumist. nakkustekitaja poolt põhjustatud patoloogilise seisundi erinevates faasides:

IgM-i saab tuvastada juba seitse päeva pärast nakatumist;
IgA näitavad, et infektsioon on kehas elanud rohkem kui kuu;
IgG kinnitab klamüüdia diagnoosi, aitab jälgida ravi ja määrata selle efektiivsust. Tuleb märkida, et G-klassi antikehad jäävad ja ringlevad organismis olenemata haiguse kestusest, mistõttu tuleb analüüsi õigeks tõlgendamiseks arvestada kontrollväärtustega (normidega), mis viis, on iga CDL-i jaoks erinevad: võttes arvesse testimissüsteemi kaubamärki ja komplekti kuuluvate reaktiivide spetsiifilisust. Normväärtused sisestatakse ELISA tulemuse kõrval olevasse vormi.

Mis puutub, siis siin on see veidi erinev: M-klassi antikehad ilmuvad umbes pooleteise kuu jooksul, see tähendab, et positiivne tulemus (IgM +) muutub esmase infektsiooni faasis või latentse infektsiooni taasaktiveerumisel ja püsib 4 kuud kuni kuus kuud.

G-klassi antikehade olemasolu on iseloomulik esmase ägeda infektsiooni või taasinfektsiooni tekkele. Analüüs väidab, et viirus on olemas, kuid ei anna teavet nakkusprotsessi staadiumi kohta. Samal ajal tekitab raskusi ka IgG tiitri normi määramine, kuna see sõltub täielikult konkreetse inimese immuunseisundist, mille aga määrab G-klassi immunoglobuliinide tuvastamine. Arvestades antikehade sellist käitumist, CMVI diagnoosimisel, muutub vajalikuks hinnata klassi G antikehade võimet suhelda CMV-ga, et seda hiljem “neutraliseerida” (AT aviidsus). Haiguse algstaadiumis seondub IgG viiruse antigeenidega väga halvasti (madal aviidsus) ja alles siis hakkavad nad aktiivsust näitama, seetõttu võime rääkida antikehade aviidsuse suurenemisest.

Ensüüm-immuunanalüüsi eelistest võime rääkida pikka aega, sest see meetod on suutnud lahendada palju diagnostilisi probleeme, kasutades ainult venoosset verd. Pole vaja pikki ootamisi, muresid ja probleeme uurimistööks materjali võtmisega. Lisaks täiustatakse jätkuvalt ELISA testimissüsteeme ja päev, mil test annab tulemuse 100% usaldusväärsuse, pole enam kaugel.

Video: Moskva Riikliku Meditsiiniülikooli õppefilm. Sechenov ELISA põhitõdedest

Kaasaegsed diagnostikameetodid võimaldavad laboris spetsiaalsete testide abil tuvastada konkreetse haiguse. Üks neist peaks sisaldama ensüümi immuunanalüüsi, mille kaudu saate kinnitada esialgse diagnoosi.

ELISA on üks tõhusamaid ja kaasaegsemaid meetodeid immuun- ja hormonaalsete häiretega seotud häirete, samuti onkoloogiliste protsesside tuvastamiseks. Vereanalüüsi käigus saab tuvastada antikehad, mis tekivad siis, kui organismis on infektsioon. Seda nüanssi arvestades on haigust võimalik avastada isegi selle arengu väga varases staadiumis.

Mis on metoodika aluseks

ELISA analüüsi tulemused põhinevad keemiliste reaktsioonide saamisel ensüümidele, mis toimivad spetsiaalsete identifitseerimismärkidena antikehade äratundmisel. Seetõttu hakkavad antikehad immunokeemiliste reaktsioonide käigus interakteeruma mõne antigeeniga. Kõik see annab alust väita, et ELISA jaoks vere loovutamisel on valed tulemused minimaalsed.

Uuring võimaldab teil määrata immuunrakkude arvu, nende omadusi, samuti vajalike antikehade olemasolu

Positiivset tulemust peetakse lahuse värvuse tuvastamisel. Värv näitab, et antigeenid interakteeruvad antikehaga. Kui midagi sellist ei juhtu, on tulemus negatiivne.

- kaasaegne laboriuuring, mille käigus otsitakse verest spetsiifilisi antikehi või spetsiifiliste haiguste antigeene, et mitte ainult etioloogiat, vaid ka haiguse staadiumi välja selgitada. ELISA tulemusi saab väljastada kvalitatiivselt ja kvantitatiivselt.

Praegu kasutatakse ELISA-d järgmistes olukordades:

1) mis tahes nakkushaiguse spetsiifiliste antikehade otsimine;
2) mis tahes haiguste (nakkus-, suguhaigused) antigeenide otsimine;
3) patsiendi hormonaalse seisundi uuring;
4) kasvajamarkerite uuring;
5) autoimmuunhaiguste esinemise uuring.

ELISA meetodi eelised:

1) ELISA meetodi kõrge spetsiifilisus ja tundlikkus (üle 90%).
2) Võimalus määrata haigust ja jälgida protsessi dünaamikat, see tähendab antikehade hulga võrdlemist erinevatel ajavahemikel.
3) ELISA diagnostika kättesaadavus igas raviasutuses.

Suhteline puudus:

1) Immuunvastuse (antikehade), kuid mitte patogeeni enda tuvastamine.

Põhimõisted

Enne ELISA meetodi olemuse selgitamist mõistame lühidalt mõnda mõistet.
Antikehad (või immunoglobuliinid - Ig) - spetsiifilised valgud, mida toodab B -
lümfotsüüdid (immuunrakud) vastuseks mis tahes nakkusliku patogeeni (viirused, bakterid, seened jne) allaneelamisele. On olemas immunoglobuliinid A (IgA), immunoglobuliinid E (IgE), immunoglobuliinid M (IgM), immunoglobuliinid G (IgG), immunoglobuliinid D (IgD). Need erinevad üksteisest molekulaarse kuju ja massi, poolestusaja, nakkusprotsessides osalemise / mitteosalemise, avastamisaja poolest nakatumise hetkest. Kui arvestada molekulmassi, siis kõige enam on see IgM-il - see on pentameer (950 000 daltonit), erinevalt ülejäänud Ig-st (150 kuni 200 000 Da), mille tõttu IgM lihtsalt ei pääse läbi platsentaarbarjääri. Seetõttu on IgM-i tuvastamine 1-aastasel lapsel alati loote infektsiooni tunnuseks. Vereseerumis esindab põhiosa immunoglobuliinidest IgG (75–85%) ja madalaim on IgE (0,003%). Nakkusprotsessis osalevad otseselt ainult IgA, M, G. IgE on allergiliste reaktsioonide ja haiguste tunnuseks ning IgD leidub ainult lümfisõlmede ja mandlite kudedes, mängib rolli lokaalse immuunsuse kujunemisel.

Antigeenid - orgaanilise päritoluga makromolekulaarsed ained, eriti nakkus- ja muude haiguste patogeenid, samuti teatud haiguse (autoimmuunhaigused, onkoloogia) korral moodustunud mitmesuguste muutunud rakkude ained.

immuunkompleks - immuunprotsessis osalev antigeen-antikeha kompleks.

Mis on ELISA meetodi aluseks.

ELISA-d (otsene, kaudne, blokeeriv meetod, konkureeriv meetod) on mitut tüüpi, kuid praktikas kasutatakse kõige sagedamini heterogeenset tahkefaasilist immunoanalüüsi ehk ELISA-d (ensüümseotud immunosorbentanalüüs).

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi aluseks on antigeeni ja antikeha immuunreaktsioon immuunkompleksi moodustumisega: antigeen-antikeha, mille tulemusena muutub antikehade pinnal olevate spetsiifiliste märgiste ensümaatiline aktiivsus.

Lihtsamalt öeldes võib selle protsessi jagada mitmeks etapiks:

1) Uuringut läbiviiva arsti tableti süvendite pinnal on teatud patogeeni puhastatud antigeen. Patsiendi bioloogilise materjali (vereseerum) lisamisel tekib selle antigeeni ja soovitud antikeha (immunoglobuliini) vahel spetsiifiline reaktsioon. See ühend toimib järgmises etapis "spetsiaalse antigeenina".

2) Selles etapis toimub IR (immuunkomplekside) moodustumine - reaktsioon "spetsiaalse antigeeni" ja konjugaadi (see on ensüümi peroksidaasiga märgistatud immunoglobuliin) vahel. Lisatakse spetsiaalne kromogeen. Sellise ensümaatilise reaktsiooni tulemuseks on värvilise aine moodustumine tableti süvendis, mille värvuse intensiivsus sõltub patsiendi materjalis sisalduvate immunoglobuliinide (antikehade) hulgast.

3) Järgnevalt hinnatakse tulemust: fotomeetria mitmekanalilise spektrofotomeetri abil, uuritava materjali optilise tiheduse võrdlemine kontrollproovide optilise tihedusega, tulemuste matemaatiline töötlemine. Antikehade hulk patsiendis sõltub otseselt antud süvendi optilise tiheduse kõrgusest.

Tavaliselt kasutatakse praktikas 96 süvendiga plaate.

Uuritava vedeliku optilise tiheduse (OD) mõõtmisel arvutatakse antikehade arv (või kontsentratsioon) teatud mahuühikus. Seejärel võrreldakse tulemust kontrollprooviga.

Peate meeles pidama:iga katsesüsteemi jaoks töötatakse välja individuaalsed näitajad, et võtta arvesse tulemusi, normi ja patoloogia näitajaid (see tähendab "referentsväärtusi"). Seda tuleks iga konkreetse uuringu tulemuste hindamisel arvesse võtta. Ei ole õige tõlgendada ühe labori tulemusi teise labori "referentsväärtuste" järgi. Samuti on vale võrrelda erinevate laborite tulemusi omavahel.

ELISA reaktsioonide seadistamisel on oluline ka selline mõiste nagu antikehade aviidsus.
Antikehade aviidsus - see on antikeha-antigeeni sideme tugevus ja antigeeni kogus, mis on seotud immunoglobuliinidega (antikehadega). Infektsiooni eeldatava kestuse hindamisel on suur tähtsus aviidsusel, mis on rasedate naiste esmase infektsiooni diagnoosimisel äärmiselt oluline.

Antikehade aviidsuse testi aluseks on immuunkompleksi (antigeen-antikeha) töötlemine uurea lahusega valgu hävitamiseks. Väga innukad sidemed jäävad puutumatuks, samas kui madala aviidsusega sidemed hävivad. Tulemus on antud aviidsusindeksina, väljendatuna protsentides (%).

Milliseid haigusi ELISA diagnostika tuvastab?

2. Autoimmuunhaiguste markerid ja inimese immuunsuse näitajad(kokku IgE, üld-IgG, üld-IgA, üld-IgM, üld-IgD, sekretoorne IgA, IgG 2, IgG4, CEC-s ringlevad immuunkompleksid, IgA ja IgG kuni gliadiinini ja teised)

3. Onkoloogilised markerid(TNF – tuumori nekroosifaktor, CEA – vähi-embrüonaalne antigeen, PSA – eesnäärmespetsiifiline antigeen, HCG – kooriongonadotropiin, CA 125, alveomutsiin ja paljud teised)

4. Reproduktiivhäired I (östradiool, progesteroon, prolaktiin, testosteroon, AFP-alfafetoproteiin, FSH - folliikuleid stimuleeriv hormoon ja teised)

5. Kilpnäärme haigused(vaba ja seotud T3, T4, türeoglobuliin, türeoperoksüdaas - TPO, kilpnääret stimuleeriv hormoon - TSH).

Seda loendit ei esinda kõik haigused, mis on diagnoositud ensüümi immuunanalüüsi abil.

ELISA analüüsi materjal ja selle kogumise reeglid

Kõige tavalisem ELISA reaktsiooni materjal on patsiendi vereseerum, mis võetakse tühja kõhuga. Materjal võib olla ka tserebrospinaalvedelik, lootevesi, klaaskeha sisu, emakakaela kanali ja ureetra lima, määrded.

Patsientide ettevalmistamine ELISA jaoks materjali kohaletoimetamiseks

ELISA tootmisaeg

Materjali immunoensümaatiline analüüs viiakse läbi kiiresti, ühe päeva jooksul. Viivitused võivad olla erinevates laborites teatud koguse seerumite kogunemise tõttu.

ELISA diagnostika võimalikud tulemused

Konkreetsete infektsioonide tulemuste hindamisel on oluline tuvastatud antikehade klass ja nende arv. See ei määra mitte ainult infektsiooni etioloogia (kas see on või mitte), vaid ka haiguse eeldatava staadiumi (äge, krooniline), samuti aktiivse infektsiooni olemasolu (äge või kroonilise ägenemine) läbivaatuse ajal.

Milline on antikehade (immunoglobuliinide – Ig) ilmumise ligikaudne aeg?

Esimesed antikehad on IgM. Neid saab tuvastada 1-3 nädalat pärast võimalikku nakatumist, mis iseloomustab nakkusprotsessi ägedat faasi. Teine olukord IgM-antikehade ilmnemisel on kroonilise protsessi aktiveerimine (või ägenemine). IgM antikehad ringlevad keskmiselt umbes 3 kuud, seejärel nende arv järk-järgult kaob. Kuid mõnel patsiendil võib IgM-i jälgi tuvastada 1-2 aasta jooksul pärast nakatumist.

Kaasaegsed testimissüsteemid on väga tundlikud, mille tulemuseks on mittespetsiifilised valepositiivsed tulemused (sageli rasedatel). Seetõttu tuleks selles patsientide rühmas positiivset IgM-i uuesti kontrollida!

IgA antikehad ilmnevad 2-4 nädalat pärast nakatumist, kuid tuvastamiseks piisavas koguses - kuu aja pärast. Seerumi IgA sünteesitakse põrna, lümfisõlmede ja limaskestade plasmarakkudes, sekretoorne IgA on koondunud limaskestadele, et täita oma kaitsefunktsiooni - nad osalevad kohalikus immuunsuses.

Alates 4. nädalast pärast nakatumist hakkavad tekkima IgG antikehad. Enamiku infektsioonide korral tõuseb nende tiiter järk-järgult maksimumini erinevatel aegadel (keskmiselt 1,5-2 kuu pärast), siis jääb tiiter madalale tasemele ja näitab immuunsust. Mõne haiguse (mükoplasmoos, klamüüdia, trihhomonoos) korral ei ole IgG tase kõrge, see väheneb oluliselt nende infektsioonide immuunsuse puudumise tõttu.

Erinevate klasside antikehade tuvastamise võimalused:

IgM antikehade isoleeritud tuvastamine viitab esmasele
infektsioonid.
- IgM ja IgG samaaegne tuvastamine veres on iseloomulik esmasele infektsioonile
eelneva 2-3 kuu jooksul, samuti kroonilise haiguse ägenemise ajal. Seetõttu ei ole IgM-i olemasolu raseduse ajal alati esmase infektsiooni tunnuseks.
- IgG tuvastamine isoleeritult võib viidata mõlemale immuunsusele selle haiguse suhtes,
samuti krooniline infektsioon. Teises olukorras on oluline nii antikehade hulk (tiiter) kui ka selle tiitri muutus ajas. Tavaliselt viiakse uuringud läbi 2-4-6-nädalaste intervallidega.
- IgA tuvastamine üksi või koos IgM-iga viitab esmasele infektsioonile. Kell
IgA ilmnemine koos IgG-ga aktiveerib eeldatavasti kroonilise infektsiooni (keskmiselt 2 nädalat alates ägenemise hetkest).

Definitsioon IgG antikehade aviidsus on suurepärane täiendav samm pikaajalisest infektsioonist põhjustatud primaarse infektsiooni diagnoosimisel, millel on oma kliiniline tähtsus eelkõige loote emakasisese infektsiooni riski hindamisel. Madala innuga IgG tuvastamine viitab esmasele infektsioonile ja tuvastatakse keskmiselt 4-6 kuud pärast nakatumist, harva kauem. Madala innuga IgG-d nõuavad primaarse infektsiooni (IgM) muud laboratoorset kinnitust. Väga innukad antikehad on kas kroonilise haiguse ja selle ägenemise või väljakujunenud immuunsuse tunnuseks.

Omadused imikutel:kuni aastastel ja mõnikord 1,5-aastastel lastel ringleb ema IgG veres erinevate infektsioonide tekkeks (see tähendab, et nad tungisid loote arengu käigus emalt lootele läbi platsenta). Need ei ole iseenesest märk infektsiooni olemasolust olevikus. Kui IgM tuvastatakse selles vanuses (tuletage meelde, et ema IgM ei suuda platsentat läbida), on see emakasisese infektsiooni või pärast sündi omandatud infektsiooni tunnus.

Kvantitatiivne ELISA meetod

ELISA diagnostika tulemus (kasutades ensüümi immuunanalüüsi analüsaatorit) väljastatakse teatud mõõtühikutes:
- Proovi optiline tihedus (OD) on spetsiifiliste antikehade kontsentratsioon ruumalaühikus. Mida suurem on proovi OD, seda suurem on antikeha kontsentratsioon. Mõned tulemused räägivad positiivsuskoefitsiendist (PC) – see on ka proovi optiline tihedus.
- Antikehade kontsentratsiooni ühikud (nanogramm/milliliiter või ng/ml).
- Seerumi tiitrite kujul: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 ja nii edasi. Diagnostilised tiitrid (millel haigus diagnoositakse, mitte nakatumise fakt) on erinevate haiguste puhul erinevad.
- Sümbolite kujul - "+", "-", "?" (+, ++, +++, ++++).
- Kvalitatiivse hinnangu vormis vastavalt etteantud kriteeriumile (positiivselt või negatiivselt).

Hinnake õigesti antikehade hulka, mis on immunoglobuliinide klassi tuvastamise variant, ja seetõttu saab ainult arst määrata haiguse staadiumi ja ravivajaduse.

Me ei tohi unustada, et iga testimissüsteemi jaoks töötatakse välja oma "referentsväärtused" (normi variandid), nende ületamise korral diagnoositakse konkreetne haigus (patoloogia variandid). Erinevate katsesüsteemide puhul on "võrdlusväärtused" erinevad.

Dünaamikas võetud ELISA tulemuste õige võrdlemine on võimalik ainult siis, kui need on tehtud samas laboris.

Nakkushaiguste spetsialist Bykova N.I.