ELISA кръвен тест за паразити: обяснение. Какво е ELISA тест? Какво е ензимен имуноанализ

За да се определи нивото на биологично активни вещества като имунологични комплекси, е необходимо специално лабораторно изследване. Ако се подозира хематологично, инфекциозно или автоимунно заболяване, специалистите предписват кръвен тест за ELISA. С напредването на статията ще разгледаме какво представлява, как да се подготвим за него, какво показва и как да го дешифрирате сами.

Какво изследване е това - кръвен тест ELISA? Съкращението означава имуноензимен анализ на кръвта, по време на който се определя количественото и качественото съдържание на различни биологично активни вещества, както и антитела и антигени в биологичен материал.

Какво се използва в ензимния имуноанализ на кръвта:

гръбначно-мозъчна течност;
слуз на уретрата, цервикалния канал;
амниотична течност;
съдържанието на стъкловидното тяло.

Имуноензимният анализ се предписва за диагностициране на полово предавани болести, инфекциозни и онкологични процеси, алергични реакции, нарушения на ендокринната и репродуктивната система, автоимунни и имунодефицитни заболявания, както и за оценка на риска от развитие на някои бъбречни заболявания.

Кръвен тест за ELISA по време на бременност се предписва с цел ранно откриване, нарушения в развитието в началните етапи и проследяване на тяхната динамика. В допълнение, анализът ELISA ви позволява да контролирате нивото на антитела, които могат да провокират развитието на тежки неврологични заболявания при дете, като по този начин предотвратява развитието на усложнения не само по време на бременност, но и по време на раждане.

Позволява да се реагира предварително на установените проблеми и значително да се подобри здравето както на майката, така и на нейното бебе.

Предимствата на кръвния ELISA включват:

висока (до 90%) степен на чувствителност;
възможността за ранна диагностика, като същевременно се определя стадият на заболяването;
ниска цена на реагентите и, следователно, наличност;
минимално количество материал за изследване;
минимални срокове за получаване;
възможност за дългосрочно съхранение на реактиви;
способността да се контролира динамиката на развитието на патологичния процес.

Тестови системи

Недостатъци на ензимния имуноанализ:

невъзможно е да се уточни причинителят на заболяването; в лабораторията се получава само имунен отговор
възможността за получаване на фалшив резултат (в много редки случаи, главно по време на бременност).

Подготовка

Принципът на този вид кръвен тест се основава на образуването на специфични антитела в човешкото тяло, когато антигени навлизат в него, тоест чужди агенти, които причиняват развитието на определено заболяване. В резултат на тяхното взаимодействие се образуват комплекси "антиген-антитяло", които се изследват по време на имуноензимен анализ.

В тази връзка, за да не се повлияят тези комплекси и съответно надеждността на получените резултати, анализът на кръв и друг биологичен материал за ELISA изисква определена подготовка.

Също така, 14 дни преди предложеното изследване, специфичното лечение се спира и се спира употребата на антибактериални и антивирусни лекарства.

Кръвта за ELISA се дарява от вена. Непосредствено преди вземането на кръв трябва да ограничите физическата активност, както и да избягвате пушенето и пиенето на алкохолни напитки.

Има няколко метода и методи за извършване на ензимен имуноанализ: директни и индиректни методи, конкурентни и блокиращи методи.

Основата за изследване на кръв (всеки друг биологичен материал) с помощта на ELISA е алгоритъм, състоящ се от две реакции - имунна и ензимна.

По време на първия патологичните агенти се свързват със защитните елементи на клетките на взетия за изследване биологичен материал. Образува се имунен комплекс "антиген - антитяло". Изглежда така. Антигените присъстват на повърхността на абсолютно всички клетки.

Когато чужди клетки навлязат в тялото, те се улавят от имунни клетки (на чиито повърхности са разположени антитела), които сравняват данните за антигените от повърхността на новопристигналите клетки с информация, съхранена в собствената им „памет“. Ако тези данни не съвпадат, се активират защитните функции на организма, състоящи се в образуването на имунен комплекс.

След това се провежда ензимна реакция, която визуализира резултатите от предишната реакция. Неговият принцип се основава на превръщането на веществото от едно в друго. За всеки тип ELISA материалът, образуван по време на имунната реакция, има специфичен ензим, обработката с който се използва за определяне на концентрацията на чуждия агент (въз основа на интензитета на цвета на разтвора).

Декодиране

Благодарение на кръвен тест за ELISA, лабораторните техници определят A, G и M. Положителният резултат при изследване на кръв (други биологични суровини) за ELISA позволява не само да се постави диагноза, но и стадия на заболяването, т.к. както и естеството на неговия ход (остър или хроничен).

Тези имуноглобулини, при наличие на патологичен процес в тялото на пациента, се образуват в различни периоди на заболяването:

Имуноглобулини M, IgM– образуват се пет дни след началото на заболяването и остават в кръвта 1,5 месеца, след което изчезват. Откриването на IgM показва наличието на остър първичен патологичен процес в тялото и необходимостта от засилена терапевтична намеса.
Имуноглобулини G, IgG– възникват четири седмици след заразяването, присъствието им в организма може да се установи няколко месеца. Откриването на IgG показва анамнеза за предишно заболяване на дадено лице. Повишаването на тяхното ниво може също да означава повторна инфекция.
Имуноглобулини А, IgA– появяват се в момента на инфекцията и присъстват в тялото в продължение на четири седмици. Намаляването на съдържанието им показва началото на възстановяването. Повторното появяване в тестовете, след като дадено лице е преминало лечение и се е възстановило, показва, че болестта е станала хронична. Едновременното откриване на IgA и IgG в резултатите от ELISA също показва наличието на хроничен процес в тялото.

Трябва също така да се отбележи, че едновременното присъствие на IgG и IgM в анализите показва, че хроничният процес се е влошил и пациентът трябва да започне лечение. Ако нито един от имуноглобулините не е открит по време на изследването, това означава липса на имунен отговор.

Съдържание

Съвременната диагностика не може без високочувствителни лабораторни изследвания. Преди това, за да установят причината за заболяването и да открият причинителя на инфекцията, лекарите извършват различни микроскопични многоетапни изследвания. Днес, за да опровергаете или потвърдите първоначалната диагноза, трябва да направите един тест - ензимен имуносорбентен анализ (ELISA). Това лабораторно изследване помага да се оцени здравословното състояние на човека и да се диагностицират хематологични, онкологични, автоимунни и инфекциозни патологии.

Какво е ензимен имуноанализ на кръвен тест?

Методът за имуноензимен анализ е съвременен лабораторен тест на кръвта за наличие на антигени, антитела срещу патогени и вируси на заболяването. Методът ELISA помага на лекаря да идентифицира етиологията на заболяването, да определи неговата фаза, колко е стар, нивото на опасност за хората и да направи необходимите корекции в лечението. По-често от други ензимните имуноанализи изследват наличието на антитела от групи M и G. Какви са те?

Когато патогенен микроорганизъм навлезе в кръвния поток, имунната система започва защитна реакция под формата на освобождаване на антитела (имуноглобулини). Тези вещества се свързват с клетката и разкриват дали тя е част от тялото или идва отвън. Ако системата е определила, че микроорганизмът е чужд, тогава броят на антителата се увеличава, за да се бори с патогенния вирус. Имуноглобулините (Ig) се предлагат в няколко вида: някои се появяват по време на инфекция, други остават през целия живот, развивайки траен имунитет. Антителата в медицината се обозначават: A, D, E, M, G.

Методът ELISA изследва кръвта, въпреки че има и други видове ензимни имуноанализи. Като правило те се различават по вида на взетата течност, въз основа на която се извършва допълнително изследване на състава и се определя наличието на антигени. В този случай за изследване се вземат както човешка кръв, така и други течности:

стъкловидно съдържание;
слуз от цервикалния канал и уретрата;
амниотична течност;
инсулти;
гръбначно-мозъчна течност.

Показания за употреба

алергични реакции;
имунна недостатъчност;
заболявания с вирусен произход (хепатит, херпес, вирус на Epstein-Barr, цитомегаловирус);
венерически заболявания, полово предавани болести (уреаплазма, сифилис, трихомонада, хламидия, микоплазма);
чернодробни заболявания;
невросифилис (инфекциозно увреждане на централната нервна система).

Кръвният тест за ELISA често се извършва по време на предоперативен цялостен преглед, за да се определи нивото на хормоните и да се оцени качеството на лечението. Високата точност на получените данни помага на лекаря да има представа за пълната картина на здравословното състояние. В същото време резултатите се получават за кратък период от време, което ви позволява да наблюдавате динамиката на развитието на заболяването.

Предимства на метода

Безспорните предимства на метода ELISA на кръвта са неговата висока чувствителност, т.е. способността да се определи желаното вещество, дори при ниски концентрации; и специфичност, предполагаща диагностика без грешки. В допълнение, изследването на кръвния серум чрез ELISA има следните предимства:

недостатъци

Основният недостатък на ензимно-свързания имуносорбентен тест е, че при провеждане на изследването лекарят трябва предварително да има предположение за естеството на заболяването. При диагностицирането на инфекциозни заболявания е невъзможно случайно да се открие патогенът и да се установят неговите имуноензимни свойства. Тестът може да покаже само наличието на антитела в кръвта на пациента, което косвено показва наличието на вредни микроорганизми.

Освен това, ако техниката е нарушена или подготовката е неправилна, анализът може да покаже фалшиво положителен или фалшиво отрицателен резултат. Тестването на кръвния серум ELISA е точен, но скъп метод, така че трябва да се използва в крайни случаи. Тълкуването на резултатите трябва да се доверява само на квалифициран специалист.

Подготовка

Ензимният имуноанализ трябва да се извършва в съответствие с препоръките на лекаря, т.к Резултатите от изследванията често се влияят от различни външни фактори. Основни правила за подготовка за ELISA:

венозна кръв трябва да се дарява строго на празен стомах (обикновено последното хранене трябва да бъде 12 часа преди изследването);
в навечерието на теста е необходимо да се изключи приема на каквито и да било лекарства (ако пациентът приема антихистамини (противоалергични) лекарства, трябва да се консултирате с лекар колко време преди началото на ELISA те трябва да бъдат прекратени);
Преди изследването нямате право да пушите и пиете алкохол, т.к това ще се отрази негативно на резултата;
определено трябва да спите достатъчно преди анализа;
необходимо е да се изключат всякакви физически натоварвания и стресови фактори;
Диагностиката на повечето хормони в женската репродуктивна система ще изисква кръвни проби в определени дни от менструалния цикъл.

Как се осъществява?

За провеждане на ензимен имуноанализ се взема кръв от антекубиталната вена на пациента на празен стомах. Пациентът трябва предварително да информира лекаря за наличието на заболявания и приеманите лекарства, така че резултатите от изследването да не бъдат изкривени. По правило всички лекарства трябва да бъдат спрени 16 дни преди ELISA. Усещанията по време на процедурата са подобни на вземането на кръв по време на биохимичен анализ.

Материалът се изпраща в лаборатория, където от кръвта се изолира серум, съдържащ антитела. Полученият състав се поставя в епруветка с антигени. Това могат да бъдат различни алергени (мляко, вълна, полени, цитрусови плодове), патогени на вирусни и инфекциозни заболявания и др. След получаване на реакцията цялата останала суроватка се изхвърля. С помощта на специални индикатори специалистите определят количеството на антителата. Времето за изпълнение на ELISA зависи от лабораторията. По правило резултатите от изследването могат да бъдат предоставени в рамките на два дни до седмица..

Декодиране на ELISA

Ензимен имуноанализ кръвен тест помага да се определи наличието на антитела в организма. Има няколко класа имуноглобулини:

IgM. Първите се появяват след заразяване. Наличието на тези антитела показва появата на болестта във всеки случай, т.к здравият човек няма тази класа. Обикновено IgM имуноглобулините присъстват в кръвта приблизително 6 седмици.
IgA. Антителата се намират в големи количества в лигавиците, предпазвайки тялото от проникване на патогенни микроби. Ако пациентът има този клас, е необходимо да се бори с болестта по-интензивно. В крайна сметка имуноглобулините А възникват само при хронични заболявания. Изчезването на IgA показва унищожаването на инфекцията.
IgG. Имуноглобулините от този клас показват, че човек е или носител на инфекцията, или вече е претърпял заболяването. Тези антитела се произвеждат след IgM един месец след инфекцията. Имуноглобулините от клас G могат да присъстват в тялото в продължение на 5-6 години, предпазвайки го от рецидив на заболяването, а при сифилис такива антитела присъстват за цял живот.

При извършване на ELISA тест при деца (до 1,5 години) трябва да се има предвид, че кръвта на детето съдържа IgG антитела на майката срещу инфекции. Въпреки че това не означава, че бебето е болно, по-скоро този факт е норма. Наличието на клас М показва вътрематочна или придобита инфекция след раждането, т.к IgM антителата на майката не са в състояние да проникнат в тялото на детето през плацентата. Разбивка на възможните комбинации от наличието или отсъствието на антитела от 3 класа е представена в таблицата:

Резултатите от ELISA трябва да бъдат интерпретирани от квалифициран лекар.. По правило (+) показва положителен резултат от анализа, а (-) показва отрицателен резултат. Резултат, който показва липсата или наличието на вещество, се нарича качествен. Понякога се допълва от количествено, което показва броя на различните вещества в тялото. Често тестовата система има свои собствени референтни (корелирани) стойности. Превишаването на такива показатели означава наличието на патологии в пациента.

Противопоказания

Не са установени кардинални противопоказания за ензимен имуноанализ. Понякога по време на бременност, когато пациентката изпитва непрекъснати промени в хормоните в кръвта, може да се наложи да се направят повторни изследвания за по-надежден резултат. Диагностичният метод не се препоръчва за използване след:

хирургични интервенции;
хемолиза (разрушаване на червени кръвни клетки);
кръвопреливане;
вземане на пункция или биопсия на биологичен материал.

Цена на имуноензимен кръвен тест

Цената на ELISA тест зависи от политиката на лечебното заведение, вида на анализа и определяния антиген, т.к. Въз основа на тези фактори се изчислява цената на комплектите реактиви и се установява сложността на изследването. По правило имуноензимният тест е общодостъпна процедура; средната цена на метода варира от 300 до 2000 рубли. Приблизителните цени за кръвни тестове за ензимен имуноанализ в Москва са представени в таблицата:

Видео

ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ, ELISA) навлиза в живота на практическата медицина някъде през 60-те години на миналия век. Първоначалната му задача беше хистологично изследване за научни цели, което се свеждаше до търсене и идентифициране на антигенната структура на клетките на живия организъм.

Методът ELISA се основава на взаимодействието на специфични (AT) и свързани антигени (AG) с образуването на комплекс "антиген-антитяло", който се открива с помощта на ензим. Този факт накара учените да мислят, че методът може да се използва за диагностични цели за идентифициране на специфични имуноглобулини от различни класове, участващи в имунния отговор към определена инфекция. И това беше пробив в клиничната лабораторна диагностика!

Методът започва да се използва активно едва в началото на 80-те години, и то предимно в специализирани институции. Първите имуноензимни анализатори бяха оборудвани с центрове и станции за кръвопреливане, инфекциозни и венерологични болници, тъй като страховитият СПИН, роден на африканския континент, се появи на нашия хоризонт и веднага се присъедини към „старите“ инфекции, изискваше незабавни диагностични мерки и търсене за терапевтични лекарства, които му въздействат.

Обхват на приложение на метода ELISA

Възможностите на ензимния имуноанализ са наистина обширни.Сега е трудно да си представим как може да се направи без такова изследване, което се използва буквално във всички отрасли на медицината. Изглежда, какво може да направи ELISA в онкологията? Оказва се, че може. И то много. Способността на анализа да открие маркери, характерни за определени видове злокачествени новообразувания, е в основата на ранното откриване на тумор, когато той все още не е открит по друг начин поради малкия си размер.

Съвременната клинична лабораторна диагностика (CDL), в допълнение към туморните маркери, разполага със значителен арсенал от ELISA панели и ги използва за диагностициране на различни патологични състояния (инфекциозни процеси, хормонални нарушения) и наблюдение на фармацевтичните лекарства, за да идентифицира ефекта им върху тялото на пациента. и между другото не само човешки. В момента ензимният имуноанализ се използва широко във ветеринарните услуги, тъй като „нашите малки братя“ също са податливи на много заболявания, от които понякога страдат много.

По този начин, ELISA, поради своята чувствителност и специфичност, може да определи от кръвна проба, взета от вена:

Хормонален статус (хормони на щитовидната жлеза и надбъбречните жлези, полови хормони);
Наличието на вирусни и бактериални инфекции (HIV, B и C, хламидия, сифилис и, и, както и много други заболявания, причинени от патогенни микроорганизми);
Следи от жизнената активност на микроорганизмите, които инициираха инфекциозния процес, който успешно приключи и премина в етапа на формиране на имунен отговор към този патоген. Такива следи, тоест антитела, в много случаи остават циркулиращи в кръвта за цял живот, като по този начин предпазват човек от повторно заразяване.

Каква е същността на ELISA?

Методът на ензимен имуноанализ позволява да се определи не само наличието на самия патоген (качествен анализ), но и неговото количествено съдържание в кръвния серум на пациента.

Вирусната или бактериалната доза значително влияе върху хода на инфекциозния процес и неговия резултат, поради което количественият анализ играе важна роля в диагностиката и лечението на заболявания в различни форми и стадии.

Въпреки това, знаейки изследванията на ензимния имуноанализ като метода ELISA, ние дори не се замисляме как той успява да обхване толкова широк спектър от микроорганизми, обитаващи нашата планета, много от които представляват пряка заплаха за здравето и живота на хората и животните. Но факт е, че ELISA има много опции (неконкурентни и конкурентни - директни и индиректни), всяка от които решава свой собствен проблем и по този начин позволява целенасочено търсене.

За идентифициране на имуноглобулини от един или друг клас се използва традиционен 96-ямков панел от полистирол (плака), в чиито ямки са концентрирани сорбирани рекомбинантни протеини в твърда фаза. Антитела или антигени, които попадат в ямката с кръвен серум, намират „познат“ обект и образуват комплекс с него (AG - AT), който, фиксиран от ензимен конюгат, ще се прояви чрез промяна в цвета на ямката, когато четене на резултатите.

Ензимният имуноанализ се извършва с помощта на тест системи с определена специфичност, произведени в специални лаборатории и оборудвани с всички необходими реагиращи компоненти. Изследванията могат да се извършват с помощта на перални машини ("шайби") и спектрофотометри за отчитане, които включват предимно ръчен труд. На напълно автоматични машини, които освобождават лаборанта от монотонно вливане, миене и други рутинни задачи, разбира се, се работи по-бързо и удобно, но не всички лаборатории могат да си позволят такъв лукс и да продължат да работят по стария начин - на полуавтоматични машини.

Интерпретацията на резултатите от ELISA е от компетенцията на лекаря по лабораторна диагностика, като трябва да се вземе предвид и присъщото свойство на почти всички имунохимични реакции да дават фалшиво положителни или фалшиво отрицателни отговори.

Видео: модерен ензимен имуноанализ

Резултатите от ELISA, използвайки примера за сифилис

Ензимният имуноанализ е подходящ за откриване на всички форми, и в допълнение се използва в скринингови изследвания. За извършване на анализа се използва венозна кръв на пациента, взета на празен стомах. Работата използва таблетки с определена специфичност (AB класове A, M, G) или тотални антитела.

Като се има предвид, че антителата при сифилис се произвеждат в определена последователност, ELISA може лесно да отговори на въпроса кога е възникнала инфекцията и на какъв етап е процесът, а интерпретацията на получените резултати може да бъде представена в следната форма:

IgM показва продължителността на инфекциозния процес (може да се появи по време на обостряне на хронични възпалителни заболявания);
IgA показва, че инфекцията е настъпила преди повече от месец;
IgG показва, че инфекцията е в разгара си или наскоро е проведено лечение, което лесно се определя чрез снемане на анамнеза.

При тестване за сифилис отрицателните ямки (и отрицателната контрола) ще останат безцветни, докато положителните ямки (и положителната контрола) ще покажат ярко жълт цвят поради промяната на цвета на хромогена, добавен по време на теста. Въпреки това, интензитетът на цвета не винаги съвпада с контролния, тоест може да бъде малко по-блед или леко жълтеникав. Това са съмнителни резултати, които по правило подлежат на повторно изследване със задължително отчитане на количествените показатели, получени на спектрофотометъра, но като цяло цветът е пряко пропорционален на броя на имунните комплекси (свързани Ags и ATs) .

Най-вълнуващият от ензимните имунотестове е HIV ELISA

Анализът е може би по-интересен от други за широк кръг от населението, тъй като все още е невъзможно да се каже с увереност, че много социални проблеми са изчезнали (проституция, наркомания и др.). За съжаление, ХИВ засяга не само тези слоеве на човешкото общество; можете да се заразите при различни обстоятелства, които не са свързани със сексуална неморалност или употреба на наркотици. Но ако има нужда от тест за ХИВ, не трябва да се страхувате, че всички около вас ще знаят за вашето посещение в такава лаборатория. Сега ХИВ-инфектираните са защитени от закона и тези, които имат съмнения, могат да се обърнат към анонимни офиси, където могат да разрешат проблема без страх от публичност и осъждане.

Имуноензимният метод за диагностициране на HIV инфекцията е едно от най-важните стандартни изследвания, което обаче изисква специални условия, тъй като темата е много деликатна.

Има смисъл да се извършва HIV ELISA след сексуален контакт, кръвопреливане, други медицински процедури, предполагащи инфекция, и в края на инкубационния период („серонегативен прозорец“), но трябва да се има предвид, че този период от време е не е постоянно. Може да завърши след 14-30 дни или да продължи до шест месеца, така че средната стойност се счита за интервал от 45 до 90 дни. Кръвта се дарява за ХИВ по същия начин, както при други инфекции - от вена на празен стомах. Резултатите ще бъдат готови в зависимост от натрупания материал в лабораторията и нейната натовареност (от 2 до 10 дни), но най-често лабораториите дават отговор на същия ден или на следващия.

Какво можете да очаквате от вашите ХИВ резултати?

ELISA за HIV инфекция открива антитела срещу два вида вирус: HIV-1 (по-често срещан в Русия и други страни от Европа и Азия) и HIV-2 (по-често срещан в Западна Африка).

Задачата на HIV ELISA е да търси антитела от клас G, които се откриват на всички тестови системи, но в по-късен период, и антитела от клас А и М, откривани в рекомбинантни тестови комплекти от ново поколение, които позволяват откриването на антитела в най-ранните етапи (инкубационен период - "серонегативен прозорец"). Можете да очаквате следните отговори от ELISA:

Първичен положителен резултат: кръвта трябва да се изследва повторно с тест система от същия тип, но по възможност от друга серия и от друго лице (лаборант);
Повторното (+) включва ново вземане на кръв от пациента с изследване, подобно на първичния анализ;
Друг положителен резултат подлежи на референтен анализ, при който се използват високоспецифични тестови комплекти (2-3 бр.);
Положителен резултат в двете (или три) системи се изпраща за имуноблотинг (същият ELISA, но извършен индивидуално с помощта на тестови комплекти с особено висока специфичност).

Заключението за HIV инфекция се прави само въз основа на имуноблотинг. Със заразения се провежда разговор при пълна конфиденциалност. Разкриването на медицинска тайна в Русия, както и в други страни, подлежи на наказателно наказание.

Тестовете за хламидия и цитомегаловирус, използващи метода на ензимен имуноанализ, също придобиха особена популярност, поради факта, че те позволяват да се определи времето на инфекция, стадия на заболяването и ефективността на мерките за лечение.

По време на прилагането може да се наблюдава и появата на антитела от различни класове.в различни фази на патологичното състояние, причинено от инфекциозен агент:

IgM може да се открие още седем дни след заразяването;
IgA показва, че инфекцията живее в тялото повече от месец;
IgG потвърждава диагнозата хламидия и помага за проследяване на лечението и определяне на неговата ефективност. Трябва да се отбележи, че антителата от клас G остават и циркулират в тялото независимо от продължителността на заболяването, следователно, за да интерпретирате правилно анализа, трябва да вземете предвид референтните стойности (норми), които между другото , са различни за всеки CDL: като се вземат предвид марката на тест системата и спецификата на включените в комплекта реагенти. Нормалните стойности се въвеждат във формуляра до резултата от ELISA.

Що се отнася до , тук е малко по-различно:антителата от клас М се появяват след около месец до месец и половина, тоест положителният резултат (IgM+) става във фазата на първична инфекция или по време на реактивиране на латентна инфекция и остава такъв от 4 месеца до шест месеца.

Наличието на антитела от клас G е характерно за началото на първична остра инфекция или реинфекция. Анализът посочва, че вирусът е наличен, но не дава информация на какъв етап е инфекциозният процес. Междувременно определянето на нормалния титър на IgG също създава трудности, тъй като зависи изцяло от имунния статус на конкретен човек, който обаче се установява чрез идентифициране на имуноглобулини от клас G, когато се диагностицира CMV за оценка на способността на антителата от клас G да взаимодействат с CMV, за да го „неутрализират“ по-късно (AT авидитет). В началния стадий на заболяването IgG се свързва много слабо с вирусните антигени (нисък авидитет) и едва след това започва да проявява активност, следователно можем да говорим за повишаване на авидитета на антителата.

Можем да говорим много за предимствата на ензимния имуноанализ, тъй като този метод успя да реши много диагностични проблеми, използвайки само венозна кръв. Няма нужда от дълго чакане, притеснения и проблеми със събирането на материал за изследване. В допълнение, тестовите системи за ELISA продължават да се подобряват и не е далеч денят, когато тестът ще даде 100% надежден резултат.

Видео: образователен филм на Московския държавен медицински университет на името на. Сеченов за основите на ELISA

Съвременните диагностични техники позволяват да се идентифицира конкретно заболяване в лаборатория с помощта на специални тестове. Един от тях е ензимно-свързан имуносорбентен кръвен тест, който може да потвърди предварително поставена диагноза.

Ензимният имуноанализ ELISA е един от най-ефективните и съвременни методи за идентифициране на нарушения, свързани с имунен и хормонален дисбаланс, както и онкологични процеси. По време на теста в кръвта могат да бъдат открити антитела, произведени при наличие на инфекция в тялото. Като се вземе предвид този нюанс, болестта може да бъде открита дори в най-ранния стадий на нейното развитие.

Каква е основата на техниката?

Резултатите от ELISA анализа се основават на получаване на химични реакции към ензими, които служат като специални идентификационни знаци за разпознаване на антитела. Следователно, по време на имунохимичните реакции, антителата започват да взаимодействат с определени антигени. Всичко това дава основание да се твърди, че фалшивите резултати при кръводаряване на ELISA са минимални.

Проучването ви позволява да определите броя на имунните клетки, техните свойства, както и наличието на необходимите антитела

Резултатът се счита за положителен, когато се открие оцветяване на разтвора. Цветът показва, че антигените взаимодействат с антитялото. Ако нищо подобно не се случи, резултатът е отрицателен.

– съвременен лабораторен тест, който търси специфични антитела в кръвта или антигени към определени заболявания, за да се установи не само етиологията, но и стадия на заболяването. Резултатите от ELISA могат да бъдат дадени качествено и количествено.

В момента ELISA се използва в следните ситуации:

1) Търсене на специфични антитела към всяко инфекциозно заболяване;
2) търсене на антигени на всякакви заболявания (инфекциозни, венерологични);
3) изследване на хормоналния статус на пациента;
4) изследване за туморни маркери;
5) изследване за наличие на автоимунни заболявания.

Предимства на метода ELISA:

1) Висока специфичност и чувствителност на метода ELISA (повече от 90%).
2) Възможността за определяне на заболяването и проследяване на динамиката на процеса, т.е. сравняване на броя на антителата в различни периоди от време.
3) Наличие на ELISA диагностика във всяка медицинска институция.

Относителен недостатък:

1) Откриване на имунния отговор (антитела), но не и на самия патоген.

Основни понятия

Преди да изясним същността на метода ELISA, нека накратко разберем някои понятия.
Антитела (или имуноглобулини - Ig) – специфични протеини, произведени от B -
лимфоцити (имунни клетки) в отговор на всеки инфекциозен патоген (вируси, бактерии, гъбички и др.), навлизащ в тялото. Има имуноглобулини А (IgA), имуноглобулини Е (IgE), имуноглобулини М (IgM), имуноглобулини G (IgG), имуноглобулини D (IgD). Те се различават помежду си по молекулна форма и тегло, полуживот, участие/неучастие в инфекциозни процеси и време на откриване от момента на заразяване. Ако вземем предвид молекулното тегло, тогава IgM има най-голямо тегло - това е пентамер (950 000 далтона) за разлика от други Ig (от 150 до 200 000 Da), поради което IgM просто не може да премине през плацентарната бариера. Следователно откриването на IgM при дете на 1 година винаги е признак за наличие на инфекция в плода. В кръвния серум по-голямата част от имуноглобулините е представена от IgG (75-85%), а най-ниската е IgE (0,003%). Само IgA, M, G участват пряко в инфекциозния процес е признак на алергични реакции и заболявания, а IgD може да се намери само в тъканта на лимфните възли и сливиците и играе роля в образуването на локален имунитет.

Антигени – високомолекулни вещества от органичен произход, по-специално патогени на инфекциозни и други заболявания, както и вещества от различни променени клетки, образувани по време на определено заболяване (автоимунни заболявания, онкология).

Имунен комплекс – комплекс антиген-антитяло, участващ в имунния процес.

На какво се основава методът ELISA?

Има няколко вида ELISA (директен, индиректен, блокиращ метод, конкурентен), но в практиката най-често се използва хетерогенният твърдофазов имуноанализ или ELISA (enzyme linked imunosorbent assay).

Основата на ензимния имуноанализ е имунната реакция на антиген и антитяло с образуването на имунен комплекс: антиген-антитяло, което води до промяна в ензимната активност на специфични белези на повърхността на антителата.

С прости думи този процес може да бъде разделен на няколко етапа:

1) На повърхността на ямките на таблетката на лекаря, провеждащ изследването, има пречистен антиген на определен патоген. Когато се добави биологичен материал (кръвен серум) от пациента, възниква специфична реакция между този антиген и желаното антитяло (имуноглобулин). Това съединение ще действа като „специален антиген“ в следващия етап.

2) На този етап възниква образуването на IC (имунни комплекси) - реакция между „специален антиген“ и конюгат (това е имуноглобулин, маркиран с ензима пероксидаза). Добавя се специален хромоген. Резултатът от тази ензимна реакция е образуването на оцветено вещество в гнездото на таблетката, чийто интензитет на цвета зависи от количеството имуноглобулини (антитела), съдържащи се в материала на пациента.

3) След това се оценява резултатът: фотометрия с помощта на многоканален спектрофотометър, сравнение на оптичната плътност на изследвания материал с оптичната плътност на контролните проби, математическа обработка на резултатите. Количеството антитела в пациента зависи пряко от височината на оптичната плътност на дадено гнездо.

Обикновено в практиката се използват 96-ямкови плаки.

При измерване на оптичната плътност (ОП) на тестваната течност се изчислява количеството (или концентрацията) на антителата в определена единица обем. След това резултатът се сравнява с контролна проба.

Трябва да запомните:За всяка тестова система са разработени индивидуални индикатори за записване на резултатите, показатели за нормалност и патология (т.е. „референтни стойности“). Това трябва да се има предвид при оценката на резултатите от всяко конкретно изследване. Неправилно е резултатите от една лаборатория да се интерпретират въз основа на „референтните стойности“ на друга лаборатория. Също така е неправилно да се сравняват резултатите от различни лаборатории помежду си.

При извършване на ELISA реакции концепцията за авидитет на антитела също е важна.
Авидност на антитела - това е силата на връзката между антитялото и антигена и количеството антиген, което е във връзка с имуноглобулини (антитела). Авидността е от голямо значение при оценката на очакваната продължителност на инфекцията, което е изключително важно при диагностицирането на първична инфекция при бременни жени.

Основата на теста за авидност на антитялото се състои от третиране на имунния комплекс (антиген-антитяло) с разтвор на урея за унищожаване на протеина. Връзките с висока авидност остават непокътнати, докато връзките с ниска авидност се разрушават. Резултатът е даден като индекс на авидитет, изразен като процент (%).

Какви заболявания се откриват чрез ELISA диагностика?

2. Маркери на автоимунни заболявания и показатели на човешкия имунитет(общ IgE, общ IgG, общ IgA, общ IgM, общ IgD, секреторен IgA, IgG 2, IgG4, CEC-циркулиращи имунни комплекси, IgA и IgG към глиадин и други)

3. Онкологични маркери(TNF - тумор некрозис фактор, CEA - карциноембрионален антиген, PSA - простатен специфичен антиген, hCG - човешки хорионгонадотропин, СА 125, алвеомуцин и много други)

4. Репродуктивни нарушения I (естрадиол, прогестерон, пролактин, тестостерон, AFP-алфафетопротеин, FSH - фоликулостимулиращ хормон и други)

5. Заболявания на щитовидната жлеза(свободен и свързан Т3, Т4, тиреоглобулин, тиреоидна пероксидаза - TPO, тиреостимулиращ хормон - TSH).

Този списък не представя всички заболявания, които се диагностицират с помощта на ензимен имуноанализ.

Материал за ELISA анализ и правила за събирането му

Най-честият материал за реакцията ELISA е кръвният серум на пациента, взет на празен стомах. Материалът може да бъде също цереброспинална течност, амниотична течност, съдържание на стъкловидното тяло, слуз от цервикалния канал и уретрата, цитонамазки.

Подготовка на пациентите за предаване на материал за ELISA

Време за производство на ELISA

Ензимният имуноанализ на материала се извършва бързо, в рамките на 24 часа. Възможно е забавяне в различни лаборатории поради натрупване на определено количество серум.

Възможни резултати от ELISA диагностика

При оценката на резултатите за специфични инфекции класът на откритите антитела и тяхното количество са важни. Не само въпросът за етиологията на инфекцията (дали съществува или не), но и очакваният стадий на заболяването (остър, хроничен), както и наличието на активна инфекция (остра или екзацербация на хронична) при времето за преглед зависи от това.

Какъв е приблизителният срок за появата на антитела (имуноглобулини - Ig)?

Най-ранните антитела са IgM. Те могат да бъдат открити 1-3 седмици след евентуална инфекция, което характеризира острата фаза на инфекциозния процес. Втората ситуация за появата на IgM антитела е активирането (или обострянето) на хроничен процес. IgM антителата циркулират средно около 3 месеца, след което броят им постепенно изчезва. Въпреки това, при някои пациенти следи от IgM могат да бъдат открити в рамките на 1-2 години след инфекцията.

Съвременните тест системи са силно чувствителни, което води до неспецифични фалшиво положителни резултати (често при бременни жени). Ето защо при тази група пациенти трябва да се провери повторно положителните IgM!

IgA антителата се появяват 2-4 седмици след инфекцията, но в количества, достатъчни за откриване в рамките на един месец. Серумният IgA се синтезира от плазмените клетки на далака, лимфните възли и лигавиците. Секреторният IgA се концентрира върху лигавиците, за да изпълнява своята защитна функция - те участват в локалния имунитет.

От 4-та седмица след инфекцията започват да се появяват IgG антитела. При повечето инфекции техният титър постепенно се увеличава с максимум в различно време (средно след 1,5-2 месеца), след което титърът остава на ниско ниво и показва имунитет. При някои заболявания (микоплазмоза, хламидия, трихомониаза) нивото на IgG не е високо и намалява значително поради липсата на имунитет при тези инфекции.

Опции за откриване на антитела от различни класове:

Изолираното откриване на IgM антитела предполага наличието на първичен
инфекция.
- Едновременното откриване на IgM и IgG в кръвта е характерно за първичната инфекция
в предходните 2-3 месеца, както и при обостряне на хронично заболяване. Следователно по време на бременност наличието на IgM не винаги е признак на първична инфекция.
- Откриването на изолиран IgG може да показва имунитет към това заболяване,
както и при хронична инфекция. Във втората ситуация е важно както количеството антитела (титър), така и промяната в този титър във времето. Обикновено изследванията се провеждат на интервали от 2-4-6 седмици.
- Откриването на IgA изолиран или с IgM показва първична инфекция. При
Появата на IgA заедно с IgG предполага активиране на хронична инфекция (средно 2 седмици от момента на обостряне).

Определение Авидност на IgG антителае отличен допълнителен етап в диагностиката на първична инфекция от дългогодишна инфекция, която има своето клинично значение, на първо място, при оценка на риска от вътрематочна инфекция на плода. Откриването на нискоавиден IgG показва първична инфекция и се открива средно 4-6 месеца след заразяването, рядко по-дълго. IgG с нисък авидит изисква друго лабораторно потвърждение на първична инфекция (IgM). Антителата с висока авидност са признак или на хронично заболяване и неговото обостряне, или на формиран имунитет.

Характеристики при кърмачета:при деца до една година, а понякога дори на 1,5 години, майчиният IgG към различни инфекции циркулира в кръвта (т.е. те са проникнали през плацентата от майката на плода по време на вътрематочно развитие). Те сами по себе си не са признак за наличие на инфекция в настоящето. Ако IgM се открие на тази възраст (не забравяйте, че майчиният IgM не може да проникне през плацентата), това е признак на вътрематочна инфекция или инфекция, придобита след раждането.

Количествен ELISA метод

Резултатът от ELISA диагностика (използвайки ензимен имуноанализатор) се дава в определени мерни единици:
- Оптична плътност (ОП) на проба – концентрацията на специфични антитела в единица обем. Колкото по-висока е OD на пробата, толкова по-висока е концентрацията на антитела. Някои резултати се отнасят до коефициента на положителност (CP), който също е оптичната плътност на пробата.
- Единици за концентрация на антитела (нанограм/милилитър или ng/ml).
- Под формата на серумни титри: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и т.н. Диагностичните титри (при които се поставя диагнозата на заболяването, а не фактът на инфекцията) са различни за различните заболявания.
- Под формата на символи – “+”, “-”, “?” (+, ++, +++, ++++).
- Под формата на качествена оценка по зададен критерий (положителен или отрицателен).

Само лекарят може правилно да прецени броя на антителата, възможността за класово откриване на имуноглобулини и следователно да определи стадия на заболяването и необходимостта от лечение.

Не трябва да забравяме, че за всяка тестова система се разработват собствени „референтни стойности“ (варианти на нормата), когато се превишат, се диагностицира определено заболяване (варианти на патология). За различните тестови системи „референтните стойности“ са различни.

Правилното сравнение на резултатите от ELISA, направени във времето, е възможно само ако са произведени в една и съща лаборатория.

Лекар по инфекциозни заболявания Н.И