ELISA analüüs: mis see on? miks seda vaja on? meetodi plusse ja miinuseid. ELISA: kuidas analüüsi tehakse? Hind. Tulemuste dekodeerimine Analüüsi dekodeerimine IFA meetodil

Aeg-ajalt määravad arstid ELISA-teste, mitte kõik ei tea, mis see on. ELISA-l on järgmine dekodeerimine - vere ensüümimmunoanalüüs. Selline vereanalüüs aitab mõista, kuidas organism võitleb nakkushaigustega ja näitab haiguse faasi. Ensüüm-immunoanalüüs aitab hinnata vere kaitsvat aktiivsust, tuvastada immuunpuudulikkust infektsioonidega seotud patoloogiate, hormonaalsete probleemide jms korral.

ELISA vereanalüüs töötab veenist võetud materjaliga. Lisaks on uurimiseks saadaval klaaskeha sisu, seljaaju vedelik ja ureetra või emakakaela kanali määrded. Ensüümi immuunanalüüsi ELISA jaoks võib looteid ümbritsevat vedelikku võtta rasedatelt naistelt.

Sel juhul saab verd ELISA suhtes otse testida, kasutades erinevaid meetodeid. On otsest, kaudset, konkurentsi ja blokeerimist. Kui keha on nakatunud mõne patogeense ainega, mida nimetatakse antigeeniks, hakkab immuunsüsteem tootma spetsiifilisi antikehi, näiteks hepatiidi vastu. Nende antikehade eesmärk on "tegelda" välismaiste ainetega. Mis on antikehad? Need on spetsiaalsed valgud, mis võivad interakteeruda antigeenidega ja moodustada immunoloogilisi komplekse, mida nimetatakse antigeen-antikehaks. Nende komplekside tuvastamise eest vastutab ELISA diagnostika. Antigeeni tuvastamiseks lisatakse saadud vereproovile antikehi või tehakse vastupidine protseduur.

Positiivne ELISA tulemus põhineb immuunsüsteemi ja ensüümide reaktsioonil. Esimese mõjul seonduvad nakkusetekitajad ja rakulised elemendid, teine ​​aitab visualiseerida esimese tulemust. Immuunreaktsioon hõlmab antikeha ja antigeeni kombinatsiooni. Selle protsessi tulemusena moodustub immuunkompleks. Kõigi rakkude pinnal on antigeen. Immuunrakk püüab kahtlase kinni ja pinnale fikseeritud antigeen läbib võrdlusprotseduuri mällu “laaditava” teabega. Kui kirjelduses on vaste, siis naaseb rakk koju, kui aga mitte, siis tekib ühendus, mille tekkimine vastutab pinnale kinnituva antikeha eest.

Ensümaatiline reaktsioon võimaldab vahepeal aineid muuta uuteks. Materjal puutub kokku ensüümiga. Sel juhul tagavad ensümaatilise erinevuse erinevad substraadid. Selle reaktsiooni tulemusena saadud saadus saadetakse patogeeni koguse määramiseks, mille määramisel võetakse aluseks lahuse värvuse tihedus.

Meetodi omadused

Ensüümi immuunanalüüsi vereanalüüs on ette nähtud, kui on vaja diagnoosida allergiaid ja viirusliku päritoluga haigusi. Samuti on olemas ELISA test süüfilise ja mitmete teiste nakkuste suhtes, mis levivad kaitsmata seksuaalse kontakti kaudu. See diagnoos muutub PCR-ga võrreldes üha populaarsemaks. Fakt on see, et PCR hõlmab määrdumistega töötamist. Erinevalt PCR-ist saab ELISA tulemusi saada vereanalüüsidest.

Lisaks saab ELISA-meetodil määrata vereanalüüsi, kui on vaja tuvastada immuunpuudulikkuse olemasolu, diagnoosida onkoloogiat, hinnata ravi efektiivsust, määrata hormonaalset taset ja läbida operatsioonieelne uuring tervikuna.

Kui võrrelda ELISA uuringuid näiteks PCR-ga, võite leida mitmeid eeliseid. Peaasi on täieliku diagnoosimise võimalus isegi kõige varasemates arenguetappides. Lisaks aitavad ELISA tulemused määrata haiguse konkreetset staadiumi ja selle arengutaset.

ELISA test on PCR-ga võrreldes tõhusam, lisaks saab seda teha raseduse ajal suguhaiguste tuvastamiseks. Igaüks, kes on selle testi teinud, saab teada TSH kontsentratsiooni vereseerumis. See on väga oluline, et kontrollida, milline on kilpnäärme reaktsioon, kas selle töös on häireid.

Täiendavad eelised on aga polümeraasi ahelreaktsioonil ka uuringu kiirus, mis tähendab kiireid tulemusi. Arstid hindavad ka tulemuste täpsust. Kui me räägime suguhaigustest, siis ulatub tase 98 protsendini, nagu TSH kontsentratsiooni puhul.

Muidugi on mõned puudused. Sel juhul räägime aga testi kaudsetest tunnustest. Eelkõige räägime sellest, et võimalikke vigu standardite määramisel on võimatu välistada. Mõnikord võib täiesti terve tüdruku tehtud test anda valepositiivse tulemuse või vastupidisel juhul negatiivse tulemuse. Kuid psühholoogiliste uurimismeetodite klassifikatsioon seostab enamikul juhtudel selliseid puudujääke ebaõige ettevalmistuse või materjali kogumise tehnika rikkumisega.

Täitmise funktsioonid

ELISA analüüsi jaoks annetatakse enamikul juhtudel verd. Enne vere loovutamist on oluline paastuda vähemalt kaheksa tundi ja vältida mitmete analüüsitulemust mõjutavate ravimite võtmist. Me räägime antihistamiinikumidest ja hormonaalsetest ravimitest, mis mõjutavad kilpnäärme tööd. Lisaks tuleks vähemalt 24 tunni jooksul alkoholist välja jätta. Veenduge, et te ei suitseta vähemalt üks tund enne vereloovutamist. Tulemuse moonutamine on võimalik ka narkootiliste ainete võtmisel.

Enne ärakirja juurde asumist tasub mainida, milliseid mõõtmismeetodeid sellise testi puhul kasutatakse. Testi tulemus näitab antikehi või immunoglobuliine Ig. Need tähendavad väga spetsiifilisi valke, millest oli varem juttu. B-lümfotsüüdid vastutavad nende tootmise eest kohe, kui viirused, bakterid või seened kehasse satuvad. Ladina tähestikuga tähistatud immunoglobuliine on viit tüüpi.

Nende erinevused on seotud erinevate molekulide kuju ja massiga. Neil on erinev poolestusaeg ja nad osalevad või ei osale nakkusprotsessides erineval viisil. Ajavahemik, mille jooksul neid saab tuvastada alates nakatumise hetkest, on samuti erinev.

Kui klassifitseerida immunoglobuliinid molekulmassi alusel, on IgM-il kõrgeimad näitajad. Seda tüüpi immunoglobuliinide eripära on võimetus läbida platsentaarbarjääri. Kui vastsündinud lapse testis tuvastatakse IgM, räägime loote infektsiooni olemasolust.

Valdav enamus inimese verest sisaldab IgG immunoglobuliine, millest kõige vähem on IgE. Rääkides tööst nakkusprotsesside raames, tuleb erilist tähelepanu pöörata valikutele A, M, G. IgE toimib allergilise reaktsiooni markerina. IgD leidub ainult lümfisõlmede ja mandlite kudedes. See on oluline kohaliku immuunsuse loomise seisukohast.

Lisaks määratakse analüüsiga antigeenid. Nende all mõistetakse suure molekulmassiga aineid, mis on tuntud oma orgaanilise päritolu poolest. Eelkõige räägime nakkushaiguste ja muude spektrihaiguste patogeenidest. Lisaks peame silmas ka aineid, mis annavad märku erinevatest rakumuutustest, mis on mitmete haiguste puhul vältimatud. Näidatud on ka immuunkompleks, mis näitab immuunprotsessis osalevat antigeeni-antikeha kompleksi.

Tavaliselt sõltuvad tootmisajad konkreetsest laborist, kellega ühendust võtsite. Mõned laborid suudavad tulemusi anda päeva või kahe jooksul, teised võtavad nädala. Viivitused võivad olla tingitud vajadusest koguda teatud kogus seerumit.

Mõju tulemustele ja tõlgendamisele

Vaatamata asjaolule, et ELISA-d peetakse üheks kõige täpsemaks testimismeetodiks, esineb siiski vigu. Materjali võtmise protseduur, materjali ebaõige transport ja ladustamine võivad mõjutada tulemuste õigsust. Ravimite võtmine, nagu eespool mainitud, varjatud haiguste esinemine. Ainevahetushäired või immuunpuudulikkus ei võimalda teil ka õigeid näitajaid saada. Eluperioodil kuni aastani võivad vastsündinutel esineda ka ebatäpsed näitajad. See on tingitud asjaolust, et kehas on ema antikehad.

Dekodeerimisest rääkides kasutatakse analüüsivormides positiivset või negatiivset märki, et näidata iga immunoglobuliiniklassi arvutustulemusi. Järgmised on tõenäolised võimalused.

Tuvastatud IgG, IgA ja IgM puudumine näitab täielikku taastumist. Selliste komponentide nagu IgM, IgA, IgG negatiivne tulemus tähendab immuunsuse puudumist infektsioonide suhtes.

IgG positiivse ja negatiivse tulemuse kombinatsioon, IgA kombinatsioonis positiivse IgM-iga näitab ägeda infektsiooni olemasolu organismis. Positiivne IgG tulemus koos negatiivsete IgA ja IgM näitajatega vastab vaktsineerimisjärgsele perioodile või immuunsuse tekkimisele infektsiooni tagajärjel.

IgG, IgA positiivse või negatiivse tulemuse ja IgM negatiivse tulemuse kombinatsioon näitab infektsiooni esinemist selle kroonilises kulgemises. Kolme komponendi positiivne tulemus: IgG, IgM, IgA näitab kroonilises vormis olnud infektsiooni ägenemist. Lisaks antikehade klasside otsesele selgitamisele saab arst ELISA analüüsi dešifreerimise osana teavet nende kvantitatiivsete näitajate kohta. Oluline on rõhutada, et dekodeerimise eest peaks vastutama raviarst. Fakt on see, et mõne komponendi kombinatsioon võib panna ta mõtlema saadud vale tulemusele, mis viib testi uuesti sooritamiseni. Sõltumatu dekrüpteerimine on sel juhul kasutu.

ELISA analüüs - mis see on? Selle diagnostilise meetodi täisnimetust nimetatakse ensüümi immuunanalüüsiks ja see põhineb inimkehas toodetavate erinevate klasside antikehade ehk immunoglobuliinide määramisel perifeerses veres.

Arsti praktikas on ELISA analüüsil väga oluline koht, kui on vaja diagnoosida mis tahes nakkuspatoloogiat. See analüüs näitab mitte ainult nakkushaiguse esinemist, vaid ka patoloogilise protsessi staadiumi. Samuti on ELISA meetod näidustatud mitte ainult patogeeni suhtes: seda kasutatakse allergiliste seisundite diagnoosimiseks. See test võimaldab tuvastada probleeme immuunsüsteemis, paljude vereloomesüsteemi haiguste, autoimmuunsete ja muude häirete korral.

Miks on ELISA-t vaja?

Kõik teadlased kalduvad arvama, et nimetus "antikeha" valiti liiga halvasti. Kuid ikkagi peegeldab see immunoglobuliinide ühte olulist omadust: nad on võimelised siduma ja neutraliseerima kahjulikke aineid, lähenedes neile nagu "luku võti". Antikehade hulk veres ei peegelda mitte ainult organismi üldist kaitsevõimet infektsioonide eest, vaid ka võimet moodustada ringlevaid immuunkomplekse, mis võivad tekkida erinevate autoimmuunhaiguste, näiteks reumatoidartriidi või anküloseeriva spondüliidi korral.

Antikehakompleksid antigeeniga (nakkusliku iseloomuga kahjulik tegur) on organismi reaktsiooni tulemus "võõraste" sissetoomisele. Seetõttu õpib immuunsüsteem neid ära tundma, lümfotsüütide abil treenib immuunkompetentseid rakke ning need on võimelised tootma väga spetsiifilisi antikehi. Seega on Epsteini viiruse antikehad struktureeritud teisiti kui viirusliku hepatiit C või E. coli antikehad ning anti-HAV ehk A-hepatiidi viiruse antikehad on teistmoodi kui kõhrekoe vastased autoantikehad. Just immunoglobuliinide kõrge spetsiifilisus ja vastavus nakkuslikule patogeenile muudab sellise laboriuuringu kui ensüümiga seotud immunosorbenttesti väga väärtuslikuks.

Pärast antikehade ja antigeenide tugevat sidumist üheks kompleksiks (antigeen-antikehaks) kaotavad kahjulikud tegurid võime kahjustada kehakudesid ning seejärel need kompleksid kas neutraliseeritakse või lüüsitakse neutrofiilide poolt fagotsütoosi teel ja “seedituna” lahkuvad kehast. .

ELISA vereanalüüs võib näidata, millise konkreetse patogeense teguriga meie keha kokku puutub ja millises staadiumis on keha koostoime infektsiooniga. Pärast uuringut saab arst teha suure kindlusega prognoosi, määrata teatud tüüpi ravi ja mõnel juhul isegi määrata patsiendi eeldatava eluea, eriti krooniliste viirusnakkuste, näiteks viirusliku C-hepatiidi korral.

Kuid mõnel juhul pole kehas nakkustekitajaid üldse ja antikehad ründavad "kogemata" nende enda organeid ja kudesid, kuna immuunkompetentsed rakud on saanud valeteavet. Selliseid haigusi nimetatakse autoimmuunsusteks ning ensüümi immuunanalüüs veres aitab samuti seda kroonilist patoloogiat ära tunda ja aitab diagnoosimisel.

Lisateavet immunoglobuliinide kohta

Kokku toodab inimkeha 5 tuntud klassi antikehi, mis on määratud Ig(mis tähistab immunoglobuliine), mis kuuluvad klassidesse A, M, G, E ja D. Kõik need on ELISA analüüsi tulemuste tõlgendamisel väga olulised. Loomulikult on komplekse palju rohkem ja kõik need pole veel avatud. Kuid erinevate haiguste diagnoosimisel on kõige väärtuslikumad kolm esimest tüüpi antikehad. ELISA vereanalüüs kasutab maksimaalselt teavet: antikehade ilmumise hetk veres, nende kontsentratsiooni muutus sõltuvalt ajast, kadumise periood, aga ka spetsiifiliste antikehade tüüp.

Seega on esmases, ägedas nakkusprotsessis osalejad M-klassi immunoglobuliinid, mis viitavad alati ägedale faasile, isegi kui haiguse kliiniline kulg on kustutatud. Tüüpiline näide on ägeda viirushepatiidi B või C anikteerne vorm. Hepatiidi ensüümimmuunanalüüs näitab, et inimesel on äge hepatiit ja sümptomid, nagu valu hüpohondriumis, suukuivus, valulikud liigesed ja muud mittespetsiifilised sümptomid kergesti arusaadav.

Mõne nädala pärast leitakse neid antikehi järjest kadumas, madalamates kontsentratsioonides kui G-klassi immunoglobuliinid. Neid tuvastatakse veres mitu kuud ja isegi aastaid ning need viitavad mõlemale paranemisele ja seejärel võivad nad jääda kogu eluks, moodustades püsiva immuunsuse. . See näitab tugevat kaitset patogeeni antigeenide eest. Seega on just selle klassi antikehad need, mis muudavad inimese immuunseks korduvate siberi katku ja katku juhtumite suhtes. Kuid on juhtumeid, kui need antikehad ei takista antigeenide esinemist nende kahjulike mõjude eest. Sel juhul saame rääkida kroonilise protsessi aktiivsuse suurendamisest.

Kõigepealt peate mõistma, et sellist analüüsi pole - "ELISA jaoks lihtsalt veri". Analüüs tehakse hepatiidi, mõnikord ureaplasma või süüfilise suhtes. Seega saab ELISA jaoks vere annetamist suunata ainult soovitud nakkuse otsimisele. On lihtsalt nii ebaselge, miks annetada verd veenist, teadmata, mida otsida. Seetõttu on ensüümi immuunanalüüsi meetod võimas tööriist, mis on diagnostilises otsingus oluline. Selle testi saab määrata ainult arst, kuna ta otsib konkreetselt infektsiooni, mida need sümptomid iseloomustavad. Tavainimene võib muidugi tellida ELISA meetodil 150 vereanalüüsi “kõikide infektsioonide” puhul, kuid see oleks ebamõistlik ja kulukas lähenemine diagnoosimisele, kõigele testimisele.

Need testid on kõige nõudlikumad järgmiste haiguste ja seisundite puhul:

Erinevad mikroobsed ja viirusnakkused, nakkushaiguste sümptomid - lööve, palavik, kollatõbi, lümfisõlmede turse, kõhulahtisuse sündroom, sugulisel teel levivate haiguste kahtlus.

ELISA meetod aitab määrata ureaplasma ja mükoplasma, süüfilise ja klamüüdia, tuberkuloosi ja tsütomegaloviiruse infektsiooni, herpese, viirushepatiidi ja Epstein-Barri viiruse. Praegu saab ensüümi immuunanalüüsi meetodi abil kontrollida umbes 500 erinevat infektsiooni,

Kui kahtlustatakse helmintia infestatsiooni ja ilmnevad sellised sümptomid nagu allergiad, eosinofiilia veres, nahasügelus, düspepsia ja kehakaalu langus,

Angioödeemi, urtikaariat, õhupuudust ja astmaatilise lämbumise rünnakuid põhjustavate allergeenide tuvastamisel.

Sel juhul tuvastatakse spetsiifilised Ig E ja on olemas terved allergeenipaneelid, mis aitavad allergeeni täpselt määrata - kalmaar või krevetid, dafniat sisaldav kuiv kalatoit, kodutolm. Heinapalaviku korral võimaldab see meetod leida täpselt rohu, põõsa või puu, mis põhjustab kevadist aevastamist ja pisaravoolu,

• See meetod on näidustatud autoimmuunhaiguste kahtluse korral, mida ravivad reumatoloogid,
• Kui kahtlustatakse kasvaja kasvu ja aktiivsust,
• Immuunpuudulikkuse seisundite ja HIV-nakkuse komplekssel diagnoosimisel
• Verehaiguste korral ja transplantoloogias, immuunsuse igakülgseks hindamiseks, näiteks enne maksa- või neerusiirdamist.

Nüüd teame, miks peame ELISA jaoks verd loovutama. Uurime, kuidas seda uurimistööd tehakse.

Kuidas analüüsi tehakse?

Klassikaline materjal on patsiendi venoosne veri. Kuid vajadusel saab uurida väga erinevaid vedelikke ja kudesid: lima, sülge, emakakaela sekreeti, tserebrospinaalvedelikku, silma klaaskeha, nabaväädi sisu ja lootevett. Oluline on meeles pidada, et erinevate ravimite võtmine, liigne füüsiline aktiivsus ja alkoholi kuritarvitamine võivad testitulemusi oluliselt moonutada.

Seda analüüsi võimaldavad mitmed meetodid. Kliinilistes laborites kasutatakse kõige sagedamini fotomeetrilist meetodit. Sel juhul kasutatakse värvainega märgistatud aineid, mille reaktsiooni ja antigeeni-antikeha kompleksi märgistamise järel nende värvus muutub. Selle tulemusena muutub ka lahuse optiline tihedus ja see muutus on otseselt võrdeline tuvastatud antikehade kontsentratsiooniga. Nende kõrvalekallete mõõtmiseks on edukalt kasutatud laboratoorseid spektrofotomeetreid.

ELISA läbiviimiseks kasutatakse ka fluorimeetrilist meetodit, mille aluseks on fluorestsents. Ka siin arvutatakse uuritavatele proovidele ladestunud fluorestseeruvate ainete intensiivsus.

Lõpuks kasutatakse immunoloogilises analüüsis elektrokeemilisi meetodeid, et määrata ensüümide aktiivsust, mis on antigeenide ja antikehade erimärgised. Ensüümi immuunanalüüsi meetod ise hõlmab kõige sagedamini selliste ensüümide kasutamist nagu leeliseline fosfataas, mädarõika peroksüdaas ja galaktosidaas. Need ensüümid on võimelised seonduma antikehade või antigeenidega ja neid oma aktiivsuse tõttu märgistama.

Meetodi puudused ja selle eelised

Ilmsed "eelised" hõlmavad testi taskukohast hinda ja selle sõeluuringu kasutamise võimalust laiade elanikkonnarühmade seas, näiteks rasedate naiste HIV-i skriinimisel. Ensüümi immuunanalüüsi meetod on üsna spetsiifiline ja seda saab kasutada paljude haiguste ravikvaliteedi kontrollimiseks. Oluline on, et analüüs valmiks kiiresti, oleks lihtne ja patsiendile ohutu.

Siiski on palju lõkse. Seega, kui immunoglobuliine ei tuvastata, ei näita see haiguse 100% puudumist. Tõepoolest, immuunpuudulikkuse taustal ei pruugi kehal lihtsalt "jõudu" antikehi sünteesida. Kui patsiendil on raske maksapuudulikkus, ei suuda maks lihtsalt sünteesida valku - antikehade ehitusmaterjali. Sel juhul nimetatakse tulemust seronegatiivseks ning nakkuse kinnitamiseks on vajalik otsene ja kõige arenenum uurimismeetod – PCR ehk polümeraasi ahelreaktsioon. Erinevalt ensüümi immuunanalüüsist ei näita see meetod organismi reaktsiooni nakkusprotsessile (mis võib olla defektne või üldse puududa); PCR määrab otseselt päriliku materjali või patogeeni enda.

ELISA analüüs (ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs) on kaasaegne diagnostiline protseduur, mille eesmärk on tuvastada veres spetsiifilised antikehad mitmete haiguste patogeenide vastu, määrata kindlaks patoloogia arengustaadium ja selle etioloogia. Seda kasutatakse raviprotsessi ja selle efektiivsuse jälgimise meetodina. Uurimisprotsessi käigus analüüsitakse kvalitatiivseid ja kvantitatiivseid näitajaid.

ELISA meetod on väga informatiivne, tulemuste täpsus on üle 96%. Diagnostika on saadaval peaaegu igas laboris ja meditsiiniasutuses.

Peamised näidustused

Sugulisel teel levivate nakkushaiguste esinemise kinnitamiseks on ette nähtud ensüümi immuunanalüüs:

• trihhomonoos;
• klamüüdia;
• ureaplasmoos;
• süüfilis jne.

ELISA-d kasutatakse ka viirushaiguste diagnoosimiseks:

• herpes;
• 4. tüüpi herpes (Epstein-Barri viirus);
• viiruslik hepatiit;
• tsütomegaloviiruse infektsioon.

Kuidas valmistuda uuringuks

Uurimise bioloogiline materjal on veri. Mõni päev enne analüüsi ei tohiks te ravimeid võtta. Antibiootikumid, anthelmintikumid ja viirusevastased ravimid lõpetatakse 14 päeva jooksul.

Materjal kogutakse hommikul tühja kõhuga. Tund enne protseduuri on lubatud juua klaas gaseerimata vett, toidu tarbimine on välistatud.

Analüüsi omadused

Uuringu läbiviimiseks võetakse venoosset verd vähemalt 5 ml mahus. Mõnel juhul kasutatakse biomaterjalina tserebrospinaalvedelikku, lootevett või klaaskeha sisu.

Valepositiivsete tulemuste vältimiseks võetakse vereproovid süstlanõelaga, rangelt tühja kõhuga. Suitsetamine ja alkohoolsete jookide joomine tuleb lõpetada 12 tundi enne. Narkootiliste ainete kasutamisel analüüsitulemusi moonutatakse.

Kui järeldus näitab immunoglobuliinide G, A, M negatiivseid väärtusi, näitab see patoloogilise protsessi arengu algfaasi või selle puudumist. See tulemus registreeritakse pärast ravi täielikku taastumist.

Negatiivne IgM ja IgA tulemus ning positiivne IgG tulemus viitavad immuunsuse tekkele pärast nakkushaigust või vaktsineerimist.

Positiivne IgM tulemus ja negatiivne või positiivne IgG, IgA tulemus viitavad ägeda nakkuspatoloogia olemasolule.

ELISA analüüs tehakse üsna kiiresti, tulemused on valmis päeva jooksul pärast materjali kogumist.

Kaasaegse meditsiini edenedes on võimalik läbi viia põhjalikumat diagnostikat, kui patsiendil kahtlustatakse teatud patoloogiaid. Laboratoorsete uuringute üks informatiivseid meetodeid on ELISA analüüs, mis viiakse läbi venoosse vere kogumise teel. See tähendab, et patsiendi jaoks ei muutu üldiselt midagi. Kuid labori assistent-ELISA analüsaator viib kogutud biomaterjali uurimiseks läbi keeruka tehnika. Mis on ELISA testid ja millised on ELISA meetodi kui diagnostilise meetodi kasutamise peensused, saame aru allolevast materjalist.

Mis on ensüümi immuunanalüüs?

Antikehade tootmist provotseerivad inimkehasse tunginud antigeenid ise. Keha tervise “lahingusse” astudes näivad antikehad markeerivat antigeene, mida laborant verd uurides näeb. See tähendab, et kogutud biomaterjalis on pärast keha täielikku taastumist võimalik jälgida mitte ainult infektsiooni olemasolu, vaid ka selle jälgi.

Seega, määrates patsiendile ensüümiga seotud immunosorbenttesti vere jaoks, saab raviarst jälgida infektsiooni kestust, selle progresseerumise astet või tuvastada immuunsuse olemasolu konkreetse infektsiooni suhtes.

ELISA diagnostikaprotsess näeb välja järgmine:

• Kogutud venoosne veri muudetakse laboris vereseerumiks;
• Seejärel kasutab laborant spetsiaalset salve rakkudega, millest igaüks sisaldab juba kõiki vajalikke antigeene. Piisab lihtsalt vereseerumi tilgutamisest igasse rakku ja jälgida immunoglobuliinide (antikehade) reaktsiooni antigeenidele. Soovitud reaktsiooni olemasolu näitab testitava materjali värvi muutus. Seejärel uurib laborant uuritava keskkonna optilist tihedust.

• Ascariasis ja enterobiasis (ümarussid ja pinworms);
• Trihhinoos;
• Opisthorchiaas ägedas ja kroonilises vormis;
• Giardiaas;
• amööbioos;
• toksoplasmoos;
• Leishmaniaas mis tahes kujul.

Tähtis: ensüümi immuunanalüüs võib olla nii kvalitatiivne kui ka kvantitatiivne. Esimesel juhul laborant ainult kinnitab või eitab soovitud aine olemasolu veres. Teisel juhul näitab analüüsi tulemus selle kontsentratsiooni patsiendi kehas.

Meetodi puudused

Arvestades selle diagnostikameetodi kõiki eeliseid, tasub mõista, et ensüümiga seotud immunosorbentvereanalüüs ei ole viis patsiendi haiguse põhjuse leidmiseks, vaid ainult raviarsti pakutud diagnoosi kinnitamise meetod. Ja kuna uuringud on üsna kallid, tuleb seda mõistlikult kasutada. Sel juhul peaks uuringu tulemusi tõlgendama ainult kvalifitseeritud spetsialist.

Tulemuste dekodeerimine

Pärast seda, kui oleme välja selgitanud lühendi ELISA ja mis see on ─ teada, tasub edasi liikuda tulemuste tõlgendamise juurde. Siinkohal on oluline mõista, et kui analüüs viidi läbi kvalitatiivselt, on tulemus ainult positiivne või negatiivne. See tähendab, et diagnoos kas kinnitab arsti kahtlusi teatud diagnoosi suhtes või lükkab need ümber. Sel juhul sisaldab vorm vastavalt sümboleid “+” või “-”.

Tähtis: negatiivne testitulemus ei viita alati infektsiooni puudumisele. Fakt on see, et antigeenide vastased antikehad võivad tekkida 14 päeva jooksul pärast nakatumist ja on tõenäoline, et need pole veel moodustunud.

Kui tehakse kvantitatiivne analüüs, määratakse antikehade tüüp, nende kogus ja aktiivsusaste. Eelkõige määratakse selle diagnoosi käigus antikehad (immunoglobuliinid) IgG ja IgM, mis moodustuvad infektsiooni progresseerumise erinevatel perioodidel. Sel juhul on kõige levinumad tulemused:

• Suurenenud IgM ja IgG täielik puudumine. See pilt näitab hiljutist infektsiooni ja patoloogia ägedat faasi.
• Mõlemat tüüpi immunoglobuliinide (IgM ja IgG) aktiivsuse suurenemine. See räägib nakkusprotsessi pikaajalisest ja kroonilisest käigust.
• IgG aktiivsus ja IgM täielik puudumine. Nakatumine toimus vähemalt kuus kuud tagasi ja praegu on viirus pikaleveninud kroonilises staadiumis.
• IgG ja IgA antikehade puudumine. Tulemus on määramata.
• IgM, IgA ja IgG antikehade puudumine. Näitab immuunsuse puudumist teatud infektsiooni suhtes.
• IgG, IgM ja IgA antikehade aktiivsus viitab kroonilise protsessi ägenemisele.

Lisaks antikehade tüüpide tuvastamisele märgib laborant vormi spetsiaalsesse veergu ka nende koguse veremahu suhtes. Pidage meeles, et kui olete aru saanud, mis ELISA meetod on, ärge tõlgendage tulemusi ise. Saadud tulemusi saab täpselt tõlgendada ainult raviarst, sõltuvalt eeldatavast diagnoosist, mis põhineb patsiendi kliinilisel pildil.

Kuidas ELISA uuringut tehakse?

Reaktsioonimehhanism

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs põhineb antigeeni immuunreaktsioonil antikehaga ning ensüümmärgise kinnitamine antikehadele võimaldab võtta arvesse antigeen-antikeha reaktsiooni tulemust ensümaatilise aktiivsuse ilmnemise või Selle taseme muutus. Lihtsustatud kujul võib reaktsioonimehhanismi esitada järgmiselt:

Tulemuste arvutamine

Ensüümi immuunanalüüsi läbiviimine

Serodiagnostikaks kasutatakse 96 süvendiga polüstüreenplaate, mille rakkude seintele antigeen on eelnevalt adsorbeeritud. Testseerum lisatakse tableti lahtrisse. Sellisel juhul kinnitatakse sellele antigeenile homoloogsed antikehad. Kinnitumata antikehad eemaldatakse pesemisega. Järgmisena lisatakse rakkudele inimese immunoglobuliinide vastased antikehad (antikehad), mis on märgistatud ensüümiga. Kui testitavas seerumis leidus tuvastatavaid antikehi, toimivad need selles etapis antigeenidena, millega märgistatud antikehad reageerivad. Kromogeense aine (värvi) lisamine pärast pesemist võimaldab meil arvestada rakkudes tekkiva värvuse reaktsiooniga. Värvuse intensiivsus on võrdeline ensüümi kogusega ja seega ka antikehade hulgaga Mõõtes rakus oleva vedeliku optilist tihedust (OD) ja võrreldes seda kontrollprooviga, arvutatakse antikehade kontsentratsioon ühikutes. Kõige sagedamini kasutatakse tulemuste arvutamist optilise tiheduse ühikutes. Tuleb arvestada, et igal testimissüsteemil on tulemuste registreerimiseks oma näitajad ning normaalsuse ja patoloogia näitajad, millest tuleks lähtuda tulemuste tõlgendamisel. tulemused.

Milliseid infektsioone saab ELISA abil tuvastada?

Peamiselt tänapäevases venereoloogias kasutatakse seda süüfilise (kombinatsioonis muude reaktsioonidega), HIV-nakkuse, viirushepatiidi diagnoosimisel.Klamüüdiainfektsiooni, tsütomegaloviirusnakkuse ja teiste herpeediliste infektsioonide diagnoosimisel on piiratud väärtus.Kasutatakse ka ELISA meetodit erinevate nakkushaiguste antikehade, hormoonide taseme, autoantikehade ja erinevate vähimarkerite määramiseks.

Kuidas tõlgendada ELISA tulemusi

Erinevate klasside antikehade olemasolu ja taseme uurimine aitab mõnel juhul määrata nakkusprotsessi etappe

Paraku ei oma nii oluline ELISA eelis nagu antikehade kvantitatiivne määramine praktilises töös suurt tähtsust – s.t. ei võimalda täpset diagnoosi teha ega mõjuta ravimite annust ega ajastust.

Milline on ELISA meetodi roll süüfilise diagnoosimisel

ELISA meetodit süüfilise diagnoosimisel kasutati esmakordselt aastal 1975. Praegu on see Venemaal laialdaselt kasutusel süüfilise seroloogiliseks diagnoosimiseks ja süüfilise kinnitava testina, tavaliselt viiakse läbi uuring, mis tuvastab nn. Treponema pallidum'i antigeenide (IgM ja IgG) vastaseid üldantikehi, kuigi mõnel juhul on võimalik määrata ainult "varajasi" M-klassi antikehi. Süüfilise ELISA muutub positiivseks 3 nädala pärast nakatumise hetkest ja jääb positiivseks üsna pikka aega. pikka aega ka peale ravi (vahel kogu elu).Seetõttu süüfilise paranemist kinnitava testina ELISA-t ei kasutata.Enamasti tehakse ainult ELISA kvalitatiivne määramine - st. ainult positiivne või negatiivne tulemus, kuigi võimalik on ka kvantitatiivne määramine.