Seroloogiliste uuringute tüübid. Seroloogia. Näidustused rakendamiseks

Seroloogia objekt - antigeenid ja antikehad

Seroloogiline testimine (SI) põhineb antigeenide ja antikehade võimel üksteisega seonduda. SI võimaldab täpselt tuvastada teatud viiruse või bakteri esinemist patsiendil, veregruppi ja Rh-d, organismi reaktsioonivõimet antibiootikumidele, autoimmuunhaigusi, hormonaalseid häireid, valkude individuaalset spetsiifilisust ja määrata ravi efektiivsust.

Antigeen ja antikeha sobivad kokku nagu võtmeauk ja võti; kui nad kohtuvad, siis nad kindlasti seostuvad. See seroloogiline reaktsioon võimaldab tuvastada erinevat tüüpi antikehi või antigeene.

Immuunsüsteemi võime toota spetsiaalseid aineid, mis neutraliseerivad kahjulikke osakesi, on teadlastele teada juba ammu. Kuid alles 19. sajandi lõpus oli võimalik laboris näha antigeen-antikeha reaktsiooni. Leiti, et sideaine moodustumise tulemusena kompleksid sadestuvad, moodustades helbeid või udu. Selliseid reaktsioone nimetatakse aglutinatsiooniks ja sadenemiseks. 20. sajandil arenes kiiresti seroloogia, teadus seerumi omadustest, avastati uusi diagnostilisi meetodeid, mis põhinesid antigeen-antikeha reaktsioonidel. Praeguseks on immuunkomplekside tuvastamiseks palju võimalusi ning SI on diagnoosimisel, ravil ning uute ravimite ja vaktsiinide loomisel asendamatu lüli.

Näidustused analüüsiks.

Seroloogilist testimist kasutatakse sünnitusabis laialdaselt

Seroloogilised uuringud saadavad tänapäeva inimest kogu tema elu. Esimesed testid teatud antikehade tuvastamiseks tehakse siis, kui laps on veel emakas. Rase naine loovutab verd erinevatele SI-dele, et teha kindlaks võimalik Rh-konflikt või infektsioonid, mis võivad lootele kahjustada. Kui laps sünnib, ootavad teda seroloogilised testid kaasasündinud haiguste diagnoosimiseks. Seejärel antakse analüüse järgmistel põhjustel:

Soovitatav on lõpetada ravimite võtmine testi eelõhtul

Kuna seroloogilised testid hõlmavad paljusid teste, võib igal konkreetsel juhul olla vajalik ettevalmistus, kuid seroloogilise testi tegemiseks kehtivad üldreeglid:

• Päev enne uuringut tuleks dieedis piirata rasvaseid ja praetud toite ning välistada alkohol.
• Viimane söögikord tuleks lõpetada 10-12 tundi enne analüüsi.
• Vereloovutuse päeval ei tohi juua kohvi, teed ega muid jooke. Väikestes kogustes võite juua puhast vett.
• Ravimid enne analüüsi on välistatud. Kui kohtumist ei ole võimalik tühistada, on vaja arstile esitada ravimite täielik loetelu, sealhulgas vitamiinid, suukaudsed rasestumisvastased vahendid.
• Kõik muud uuringud või meditsiinilised manipulatsioonid viiakse läbi pärast SI-d.
• Soovitatav on suitsetamisest loobuda 12 tundi enne vereproovi võtmist.
• Eelmisel päeval tuleks vältida füüsilist ja emotsionaalset pinget ning enne uuringut on soovitatav istuda 15 minutit täielikus rahus.
• SI määratakse hommikul ja võetakse tühja kõhuga.

Seroloogilise uuringu läbiviimise meetodid.

Seroloogias saab kasutada suurt hulka meetodeid

Kõik meetodid antigeen-antikeha komplekside (Ag-Ab) määramiseks põhinevad tuntud Ag või Ab kasutamisel tundmatu otsimisel. Kui on vaja tuvastada Ag, on vaja spetsiifilisi Abs sisaldavaid diagnostilisi immuunseerumeid. Kui SI eesmärk on Ab identifitseerimine, kasutatakse diagnostilisi - teatud Ag-sid sisaldavaid suspensioone.

Seroloogilised testid võivad kajastada kvalitatiivset või kvantitatiivset tulemust. Kvalitatiivses uuringus võib tulemus olla negatiivne või positiivne, see tähendab, et soovitud element kas leitakse või mitte. Kvantitatiivset kogusummat väljendatakse numbrilise väärtusena või "+" märkidena (tavaliselt ühest neljani).

Kaudne hemaglutinatsioon on üks diagnostilisi meetodeid

Seroloogilised uurimismeetodid:

• Aglutinatsioon. Ab seondumine Ag-ga koos järgneva helveste või setete moodustumisega. Antikehade tuvastamiseks seerumis kasutatakse otseseid, kaudseid, üksikasjalikke orienteerivaid reaktsioone.
• Hemaglutinatsioon. Kasutatakse erütrotsüüte, millele on adsorbeerunud Ag või Ab, mis jäävad kokku vastava Ab ja Ag-ga. Moodustunud kompleksid sadestuvad kihilise sette kujul.
• sademed. Ag-At kompleksi moodustumine, millele järgneb sadestumine udu kujul, mida nimetatakse sademeks.
• koagulatsioon. Ag tuvastamine stafülokokirakkude valgule adsorbeeritud Ab abil.
• Hemaglutinatsiooni pärssimine. Immuunseerumi viiruse Ag pärssimisel kaotavad viirused võime erütrotsüütidega kokku kleepuda.
• Kaudne Coombsi reaktsioon. Määratakse erütrotsüütide abs kuni pindmine Ag.
• Rõngaste sademed. See viiakse läbi lahustuva Ag kihiga immuunseerumi alusel.
• Kahekordne radiaalne immunodifusioon. Reaktsioon põhineb antiseerumi ja Ag komponentide difusioonil agari või agaroosi süvendites.
• Komplemendi sidumisreaktsioon. Ag ja Ab seosega kaasneb komplemendi adsorptsioon, indikaatorina kasutatakse oina erütrotsüüte ja neile hemolüütilise seerumi osana Ab.
• Neutraliseerimine. Põhineb viiruse tekitaja neutraliseerimisel antikehade poolt.
• Reaktsioonid, mis põhinevad Ab ja Ag märgistamisel fluorestseeruva või ensüümkompositsiooniga - immunofluorestsents- (RIF) ja ensüümi immuunanalüüsi (ELISA) meetodid.

Immunofluorestsentsi meetod.

"Hõõgumine" tumevälja mikroskoobis

See meetod põhineb fluorestseeruva ainega märgistatud Ab kasutamisel. Enamasti kasutatakse märgisena fluorestseiini isotiotsüanaati, millel on ultraviolettkiirtes roheline helendus. Analüüsi tulemust hinnatakse kuma heleduse astme järgi. Kasutada saab käsitsi määramismeetodit fluorestsentsmikroskoobiga, luminestsentsotsikuga optilist mikroskoopi, aga ka automaatset meetodit mikrokiibi tsütomeeri, voolutsütomeeri või robotfluorestsentsmikroskoobi abil.

RIF viiakse läbi otseste ja kaudsete meetoditega. Otsene meetod tähendab adsorbeeritud Ag otsest sidumist märgistatud Ab-ga. Kaudne meetod hõlmab märgistamata Ab-de kasutamist Ag-ga seondumiseks ja seejärel märgistatud Ab-de lisamist, mis väldib mittespetsiifilisi reaktsioone.

Seotud immunosorbentanalüüs.

ELISA kui seroloogilise diagnostika meetod

ELISA põhineb Ag-Ab komplekside tuvastamisel ühe komponendi märgistamise teel. Märgisena kasutatakse erinevaid ensüüme, mis ensümaatilise reaktsiooni tulemusena moodustavad värvumise. ELISA meetodeid on mitmesuguseid, neid võib liigitada homogeenseteks ja heterogeenseteks meetoditeks.

Homogeenne tähendab, et kõik reaktsioonietapid toimuvad lahuses.

Heterogeensed meetodid hõlmavad faaside eraldamist, kasutades tahket kandjat.

Homogeensed-heterogeensed meetodid põhinevad sellel, et lahuses moodustuvad Ag-Ab kompleksid ja seejärel kasutatakse eraldamiseks tahket faasi.

"Võileiva" meetodi põhimõte

ELISA meetoditel on palju variatsioone, mõned neist on toodud allpool.

1. Võileiva meetod. Immobiliseeritud Ab-le lisatakse lahus Ag-ga, pärast komplekside moodustumist pestakse kandja liigsetest komponentidest ja lisatakse märgistatud Ab. Selle tulemusel jääb Ag immobiliseeritud ja märgistatud Ab-i lõksu, sellest ka meetodi nimi.
2. Mittekonkureeriv kaudne ELISA. Immobiliseeritud Ag külge kinnitatakse At-ga uuritud seerum. Kui kompleksid moodustuvad, pestakse üleliigsed Ab-d maha ja lisatakse märgistatud Ab-sid, mis võivad seonduda süvendite pinnale kinnitatud immuunkompleksidega.
3. Konkureeriv otsene ELISA. Immobiliseeritud Ag-le lisatakse testitav seerum ja märgistatud Ab-d sisaldav konjugaat. Moodustuvad mitut tüüpi Ag-Ab kompleksid: märgistatud Ab-dega ja märgistamata Ab-dega, mis konkureerivad üksteisega Ag-ga sidumise pärast.

Milliseid infektsioone saab avastada seroloogilise testiga.

Seroloogiline diagnostika võimaldab tuvastada patogeeni

SI võimaldab tuvastada konkreetse haiguse, kui seda kahtlustatakse, st analüüs põhineb teadmisel, millist elementi otsida.

Kui patsiendil on teatud sümptomid või muud uuringud viitavad haigusele, on ette nähtud seroloogiline analüüs.

Seroloogilisi uuringuid kasutatakse järgmiste infektsioonide diagnoosimiseks:

• hepatiidi viirus A, B, C, D, E;
• süüfilis;
• herpes;
• tsütomegaloviirus;
• punetised;
• leetrid;
• mumps;
• Epstein-Barr;
• helikobakter;
• klamüüdia;
• mükoplasmad;
• toksoplasma;
• lamblia;
• helmintid;
• ureaplasma;
• parvoviirus;
• tuulerõugete viirus;
• puukentsefaliidi viirus;
• dengue viirus;
• läkaköha;
• borrelia;
• legionella.

Seroloogilised uuringud võimaldavad tuvastada laboris mis tahes infektsioone, kui nakkustekitaja antigeen on olemas.

Seroloogilise uurimismeetodi eelised infektsioonide diagnoosimisel.

Seroloogiline diagnostika – kiire ja soodne

1. Kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus.
2. Lai valik tuvastatavaid infektsioone.
3. Infektsiooni varajane diagnoosimine.
4. Võimalus jälgida haiguse arengut.
5. Täitmise kiirus ja lihtsus.
6. Uuritava materjali minimaalse mahu kasutamise võimalus.
7. Õppimise ohutus.

Tänapäeval tuleb elus päris palju katseid teha. Selles artiklis käsitleme sellist tüüpi analüüsi kui seroloogia vereanalüüsi. See analüüs tehakse selleks, et vastata küsimusele, kas inimesel on nakkushaigusi ja kas tema tervisega on kõik korras. Nakkushaigused võivad levida ka sugulisel teel ning selliseid haigusi saab määrata seroloogilise vereanalüüsi meetodil.

Mis on seroloogiline vereanalüüs

Seroloogiline vereanalüüs on analüüs, mis võib näidata nakkus-, viirus- ja mikroobsete haiguste esinemist.

Põhimõtteliselt põhineb selline analüüs võõrkehade määratlusel, nimelt halva kvaliteediga bakterid, infektsioonid ja muud organismid, mis võivad inimestel haigusi põhjustada.

Tõenäoliselt teavad paljud, et kui inimkehasse satub võõrkeha, bakter või muu infektsioon, hakkab organism aktiivselt eritama spetsiifilisi antikehi, mis seejärel eritavad valku. Just see valk aitab kaasa võitlusele võõraste mikroorganismide vastu. Kuid mõnikord vajab meie keha abi, kuna valk, mis võitleb organismi tervenemise ja puhastamise eest ning seroloogiline vereanalüüs võimaldab arstidel kindlaks teha, millist haigust on vaja ravida ja kuidas valida tõhus ravimeetod.

Kuidas tehakse seroloogilist vereanalüüsi?

Seroloogiline vereanalüüs tehakse kahel meetodil.
Esimene meetod hõlmab seerumi sisseviimist inimese verre, et hiljem tekiks antikehareaktsioon, ja selgitada välja, kui palju patoloogilisi rakke kehas on.

See meetod on ette nähtud haiguse enda, selle ohu kindlakstegemiseks ja sobiva ravitaktika valimiseks.

Teine meetod eelistab inimese verest spetsiifiliste antikehade seerumisse viimise protsessi. Seda meetodit kasutatakse ainult mõnel juhul, kui haigus on juba kindlaks tehtud, kuid meditsiinispetsialistid peavad lihtsalt teadma antikehade kogust.

Milliseid tunnuseid tuleks seroloogilise vereanalüüsi tegemisel arvesse võtta

Fakt on see, et sellised tooted võivad oluliselt mõjutada vere koostist, kõik, mida sööme, võib sadestuda meie verre ja just seetõttu peate järgima 3-päevast dieeti, et keha saaks end veidi puhastada. enne analüüsi.

Ärge mingil juhul tehke seroloogia vereanalüüsi, kui selle koostises on alkoholi, nii et saate mitte ainult diagnoosi rikkuda, vaid ka teenida endale halva maine.
Verd tuleb loovutada tühja kõhuga, sest tühja kõhuga on veres nähtavad ainult leukotsüüdid, erütrotsüüdid, vereliistakud, valgud ja antikehad. Seega annab analüüs täpsema vastuse.
Samuti tasub annetada bioloogilist materjali (verd), et meditsiinivaldkonna spetsialistid saaksid hõlpsasti õiget diagnoosi panna, näha, kuidas antikehad interakteeruvad antigeenidega ning lõpuks õige ja tõhusa ravi ära tunda.
Suitsetajatel tasub meeles pidada ka seda, et 2 päeva enne vere loovutamist tuleb loobuda tubakast, kuna see on ka veres nähtav.
Väga oluline on ka vaimne-emotsionaalne seisund, mis on samuti inimese heaolu ja seisundit mõjutav tegur. Stressiolukordades ei ole vereanalüüs tõenäoliselt ebarahuldav.

Norm ja kõrvalekalded analüüsis

Kui meditsiinispetsialistid selliseid teste teevad, on nende tulemus väga oluline, sest just tema saab näidata, kuidas keha seerumile reageerib.

Kui inimesel pole üldse antikehi veres, siis see on väga hea tulemus sellest, et tal pole haigust. Kuid seda juhtub äärmiselt harva, kuna meie keha on mehhanism, mis võitleb pidevalt millegagi, mõnikord mikroobide, mõnikord viirustega, sest iga päev kõnnime tänavatel, kus õhus on juba mikroobe ja baktereid.

Tavaliselt tehakse sellist vereanalüüsi 2 korda, et veenduda konkreetses diagnoosis.
Kui inimesel tuvastatakse suur hulk antikehi, tähendab see, et inimkehas on viirus või infektsioon. Sellistel juhtudel määratakse koheselt ravi ja läbivaatus.

Kuidas vereanalüüsi dešifreerida

Sellise analüüsi tulemuste kohta tõendi saanud inimene ei pruugi lihtsalt millestki aru saada, kuna seal on palju terminoloogiat, mis võib hiljem tavainimesele arusaamatuks jääda, kuid selliseid järeldusi ja tulemusi näeb raviarst. suudab tulemust täpselt öelda ja analüüsi dešifreerida.

Kui aga midagi on valesti, peab arst sellest patsiendile kindlasti teatama, sest see on tema töö.

Nagu eespool mainitud, tehakse selline analüüs peamiselt antikehade koguse määramiseks, normaliseeritud versioonis peaks nende arv olema võrdne nulliga.

Tulemus

Kõige sagedamini arvavad inimesed, et vereloovutamine on väga hirmutav ja valus, kuid see pole nii. Ometi vajame me kõik vereloovutust, et inimene teaks, mis tema veres on ja kas tema kehas on haigusi. Oluline on meeles pidada, et igasugune emotsionaalse seisundi halvenemine, stress või hirm millegi ees võib põhjustada emotsioonide tormi, mis seejärel lisatakse otse analüüsile endale. Peaasi, et ei muretse, tervise nimel tehakse seda ju.

Seroloogia on immunoloogia haru, mis uurib antigeenide reaktsioone seerumi antikehadele.

Seroloogiline testimine on meetod teatud antikehade või antigeenide uurimiseks patsientide vereseerumis. Need põhinevad immuunvastustel. Neid uuringuid kasutatakse laialdaselt erinevate nakkushaiguste diagnoosimise protsessis ja isiku määramisel.

Kellele määratakse seroloogiline uuring

Seroloogiline analüüs on ette nähtud nakkushaiguse kahtlusega patsientidele. See analüüs diagnoosiga vastuolulistes olukordades aitab kindlaks teha haiguse põhjustaja. Samuti sõltub edasine ravi suuresti seroloogiliste uuringute tulemustest, kuna konkreetse mikroorganismi määramine aitab kaasa spetsiifilise ravi määramisele.

Millist materjali katsetatakse

Seroloogilised uuringud hõlmavad patsiendilt bioloogilise materjali proovide võtmist järgmisel kujul:

vereseerum;

Fekaalne aine.

Materjal peaks olema võimalikult kiiresti laboris. Muidu säilib külmkapis temperatuuril +4 või lisades säilitusainet.

Proovide võtmine

Patsienti ei ole nende analüüside kogumiseks vaja ette valmistada. Uurimine on ohutu. Vereanalüüs võetakse hommikul tühja kõhuga nii kubitaalveenist kui ka sõrmusesõrmest. Pärast proovi võtmist tuleb veri asetada steriilsesse suletud torusse.

Seroloogiline vereanalüüs

Inimese veri täidab organismis paljusid funktsioone ja on väga laia tegevusvaldkonnaga, mistõttu on ka vereanalüüside tegemiseks palju võimalusi. Üks neist on seroloogilised vereanalüüsid. See on põhianalüüs, mis tehakse teatud mikroobide, viiruste ja infektsioonide ning nakkusprotsessi arenguastme tuvastamiseks. Seroloogilisi vereanalüüse kasutatakse:

Viiruste ja mikroobide vastaste antikehade hulga määramine organismis. Selleks lisatakse vereseerumile haiguse tekitaja antigeen, mille järel hinnatakse käimasolevat keemilist reaktsiooni;

Antigeeni määramine sisestamise teel;

Veregrupi määratlus.

Seroloogilised vereanalüüsid määratakse alati kaks korda - haiguse dünaamika kindlaksmääramiseks. Antigeenide ja antikehade interaktsiooni ühekordne määramine näitab ainult nakatumise fakti. Täieliku pildi kajastamiseks, kus võib täheldada immunoglobuliinide ja antigeenide vaheliste ühenduste arvu suurenemist, on vaja uuesti läbi vaadata.

Seroloogilised uuringud: analüüsid ja nende tõlgendamine

Antigeeni-antikeha komplekside arvu suurenemine organismis näitab infektsiooni esinemist patsiendi kehas. Spetsiifiliste keemiliste reaktsioonide läbiviimine nende näitajate suurenemisega veres aitab kaasa haiguse ja selle staadiumi määratlemisele.

Kui analüüsi tulemus näitab patogeenide antikehade puudumist, näitab see infektsiooni puudumist organismis. Seda juhtub aga harva, kuna seroloogilise analüüsi määramine näitab juba konkreetse infektsiooni sümptomite avastamist.

Mis võib analüüsi tulemust mõjutada

Peate hoolikalt jälgima vere võtmise tingimusi. Midagi võõrast verre lasta on võimatu. Päev enne analüüsi ei tohiks keha üle koormata rasvase toidu, alkoholi ja magusate jookidega. Vältige stressirohke olukordi ja vähendage füüsilist aktiivsust. Bioloogiline materjal tuleb võimalikult kiiresti laborisse toimetada, kuna seerumi pikaajaline säilitamine põhjustab antikehade osalise inaktiivsuse.

Seroloogilised uurimismeetodid

Laboratoorses praktikas on seroloogiline vereanalüüs lisaks peamistele esitatud meetoditele:

1. Fluorestsentsreaktsioon, mis viiakse läbi kahes etapis. Esiteks tuvastatakse ringlevas antigeenikompleksis antikehad. Seejärel kantakse kontrollproovile antiseerum, millele järgneb preparaatide inkubeerimine. RIF-i kasutatakse haiguse tekitaja kiireks tuvastamiseks uuritavas materjalis. Reaktsioonide tulemusi hinnatakse fluorestsentsmikroskoobi abil. Hindas esemete sära olemust, kuju, suurust.

2. Aglutinatsioonireaktsioon, mis on diskreetsete antigeenide lihtne aglutinatsioonireaktsioon, kasutades antikehi. Eraldage:

Otsesed reaktsioonid, mida kasutatakse antikehade tuvastamiseks patsiendi vereseerumis. Seerumile lisatakse teatud kogus tapetud mikroobe ja see põhjustab helveste kujul sademe moodustumist. Tüüfuse seroloogilised uuringud viitavad otsesele aglutinatsioonireaktsioonile;

Passiivsed hemaglutonatsioonireaktsioonid, mis põhinevad erütrotsüütide võimel adsorbeerida oma pinnal olevat antigeeni ja põhjustada kleepumist selle kokkupuutel antikehaga ja nähtava sademe kadumist. Seda kasutatakse nakkushaiguste diagnoosimise protsessis, et tuvastada ülitundlikkust teatud ravimite suhtes. Tulemuste hindamisel võetakse arvesse setete välimust. Rõnga kujul olev sade toru põhjas näitab negatiivset reaktsiooni. Ebaühtlaste servadega pitsiline sete näitab infektsiooni olemasolu.

3. mis põhineb ensüümmärgise antikehadele kinnitamise põhimõttel. See võimaldab teil näha reaktsiooni tulemust ensüümi aktiivsuse ilmnemise või selle taseme muutumise järgi. Sellel uurimismeetodil on mitmeid eeliseid:

Väga tundlik;

Kasutatavad reaktiivid on universaalsed ja püsivad kuus kuud;

Analüüsi tulemuste salvestamise protsess on automatiseeritud.

Ülaltoodud seroloogilistel uurimismeetoditel on bakterioloogilise meetodi ees mõned eelised. Need meetodid võimaldavad teil mõne minuti või tunniga määrata patogeenide antigeene. Pealegi võivad need uuringud tuvastada patogeeni antigeene isegi pärast ravi ja seda põhjustavate bakterite surma.

Uuringu diagnostiline väärtus

Seroloogiliste uuringute tulemused on väärtuslik diagnostiline meetod, kuid neil on abiväärtus. Diagnoosi aluseks on endiselt kliinilised andmed. Diagnoosi kinnitamiseks tehakse seroloogilised uuringud, kui reaktsioonid ei ole kliinilise pildiga vastuolus. Nõrgalt positiivsed uuringud ilma seda kinnitava kliinilise pildita ei saa olla diagnoosi seadmise aluseks. Selliseid tulemusi tuleks arvesse võtta, kui patsiendil oli varem sarnane haigus ja ta sai sobivat ravi.

Vere pärilike tunnuste määramine, isaduse kinnitamine või ümberlükkamine, pärilike ja autoimmuunhaiguste uurimine, nakkuse olemuse ja allika kindlakstegemine epideemiate korral - kõik see aitab tuvastada seroloogilisi vereanalüüse. Tulemuste tõlgendamine annab teavet spetsiifiliste valkude olemasolu kohta selliste infektsioonide jaoks nagu süüfilis, hepatiit, HIV, toksoplasmoos, punetised, leetrid, kõhutüüfus.

SEROLOOGILISED UURINGUD(lat. seerumi seerum + kreeka logose doktriin) - immunoloogia meetodid, mis uurivad inimese või looma vere spetsiifilisi omadusi, et seroloogiliste reaktsioonide abil tuvastada antigeene või antikehi.

S. algus ja. pandi eelmise sajandi lõpus, pärast seda, kui leiti, et antigeeni seost antikehaga (vt Antigeen - antikeha reaktsioon) kaasnevad mitmed visuaalseks vaatluseks kättesaadavad nähtused - aglutinatsioon (vt.), sadestumine (vt) või lüüsi. Antigeenide (vt) või antikehade (vt) spetsiifilise äratundmise võimalus oli, kui üks neist komponentidest on teada.

1897. aastal teatas F. Vidal, et kõhutüüfusehaigete vereseerum aglutineerib selektiivselt tüüfuse baktereid ja seetõttu saab seda reaktsiooni (vt Vidali reaktsioon) laboris rakendada. kõhutüüfuse diagnoosimine. Samal aastal näidati, et katku-, tüüfuse- ja koolerabakterite kultuurifiltraadid moodustavad koos vastavate immuunseerumitega helbeid või sadet.

Sadestamisreaktsioon osutus sobivaks mis tahes valguantigeenide tuvastamiseks. Aastatel 1900-1901. K. Landsteiner leidis, et inimese erütrotsüütides on kaks erinevat antigeeni (A ja B) ning vereseerumis kaks aglutiniini (a ja P), mis aitasid kaasa hemaglutinatsioonireaktsiooni kasutamisele veregruppide määramisel (vt.).

Veregrupi ja Rh-faktori määramise aglutinatsioonireaktsiooni kasutatakse sünnitusabi praktikas koos vereülekannete ja kudede siirdamisega. Rh-faktori vastased antikehad (vt) on mittetäielikud antikehad, nad ei ole võimelised Rh-positiivsete erütrotsüütidega otseselt reageerima, seetõttu kasutage nende tuvastamiseks Coombsi reaktsiooni (vt Coombsi reaktsioon), mis põhineb mittetäielike antikehade tuvastamisel antiglobuliini abil. seerumid. Teadaoleva spetsiifilisusega erütrotsüütidele lisatakse uuritav seerum, seejärel antiglobuliini seerum IgG vastu (kaudne Coombsi reaktsioon). Uuritud vereseerumi mittetäielike antikehade Fab-fragmendid kinnituvad erütrotsüütidele ja IgG-vastased antikehad kinnituvad nende antikehade vabadele Fc-fragmentidele ning toimub erütrotsüütide aglutinatsioon. Hemolüütilise aneemia diagnoosimiseks kasutatakse otsest Coombsi reaktsiooni.Selliste patsientide kehas ühinevad punased verelibled veres ringlevate Rh-faktori vastaste antikehadega. Nende tuvastamiseks lisatakse patsiendilt võetud erütrotsüütidele IgG-vastased antikehad. Erütrotsüütide aglutinatsiooni ilmnemine kinnitab haiguse diagnoosi.

Hemaglutinatsiooni inhibeerimise reaktsioon - RTGA (vt Hemaglutinatsioon) - põhineb nähtusel, mis takistab (inhibeerib) erütrotsüütide hemaglutinatsiooni viiruste poolt immuunseerumi abil. Viiruse hemaglutinatsiooni nähtus ei ole serool. reaktsioon ja tekib viiruse seose tulemusena erütrotsüütide retseptoritega, kuid HTA on seroloogiline test, mida kasutatakse viirusevastaste antikehade tuvastamiseks ja tiitrimiseks. RTGA on peamine gripi, leetrite, punetiste, mumpsi, puukentsefaliidi ja teiste viirusnakkuste serodiagnostika meetod, mille tekitajatel on hemaglutineerivad omadused.

Passiivsete ehk kaudsete hemaglutinatsioonide reaktsioon, Kasutatakse erütrotsüüte või neutraalseid sünteetilisi hchateraale (nt lateksiosakesed), mille pinnale sorbeeritakse antigeenid (bakteriaalsed, viiruslikud, koed) või antikehad (vt Boydeni reaktsioon). Nende aglutinatsioon toimub sobivate seerumite või antigeenide lisamisel. Antigeenidega sensibiliseeritud RBC-sid nimetatakse antigeenseteks erütrotsüütide diagnostikaks ja neid kasutatakse antikehade tuvastamiseks ja tiitrimiseks. Antikehadega sensibiliseeritud erütrotsüüte nimetatakse immunoglobuliini erütrotsüütide diagnostikaks (vt) ja neid kasutatakse antigeenide tuvastamiseks:

Passiivset hemaglutinatsioonireaktsiooni kasutatakse bakterite (tüüfus ja paratüüfus, düsenteeria, brutselloos, katk, koolera jt), algloomade (malaaria) ja viiruste (gripp, adenoviirusnakkused, puukentsefaliit, Krimmi hemorraagiline palavik) põhjustatud haiguste diagnoosimiseks. jne) . Passiivse hemaglutinatsiooni reaktsioon tundlikkuses ei ole madalam kui viiruse eraldamise meetod arenoviirushaiguste korral (vt eriti lümfotsüütilise kooriomeningiidi korral). Lümfotsüütilise kooriomeningiidi viirusantigeen tuvastatakse viirusekandjatel (koduhiirtel) passiivse hemaglutinatsioonireaktsiooni käigus ekstraheeritud elundite suspensioonidega, mis on lahjendatud kümneid tuhandeid kordi. Salmonelloosi korral tuvastatakse passiivses hemaglutinatsioonireaktsioonis baktereid kuni mitmesaja mikroobikeha kontsentratsioonis 1 g väljaheites, düsenteeriabakterid toiduainetes, kui 1 g materjali sisaldus on vähemalt 500 mikroobikeha.

Passiivset hemaglutinatsiooni reaktsiooni kasutatakse viirusliku B-hepatiidi diagnoosimisel ja ennetamisel. Nõukogude Liidus valmistatakse ägeda B-hepatiidiga patsientide veres HBs antigeeni (vt Austraalia antigeen) tuvastamiseks diagnostiline aine, milleks on kana erütrotsüüdid. sensibiliseeritud kitse immunoglobuliiniga HBs antigeeni vastu. Diagnostika tilk kombineeritakse uuritavate inimeste võrdse koguse vereseerumiga ja kui selles esineb HBs antigeen, tekib aglutinatsioon. Reaktsioon on võimeline hõivama kuni 1,5 ng/ml HBs antigeeni. HBs antikehade tuvastamiseks kasutatakse erütrotsüüte, millele on adsorbeeritud HBs antigeen, mis on eraldatud patsientide verest. Passiivse hemaglutinatsiooni reaktsiooni kasutatakse ka patsiendi ülitundlikkuse tuvastamiseks ravimite ja hormoonide, näiteks penitsilliini või insuliini suhtes. Sel juhul sensibiliseeritakse inimese 0-veregrupi erütrotsüüdid raviainega ja seejärel tuvastatakse nende aglutiniinid patsiendi vereseerumis.

Passiivse hemaglutinatsiooni reaktsiooni kasutatakse gonadotropiini tuvastamiseks uriinis, et tuvastada rasedus (vt kooriongonadotropiin). Selleks inkubeeritakse selle hormooni standardseerumit uuritava uriiniga. Pärast erütrotsüütide lisamist neile adsorbeeritud hormooniga aglutinatsiooni ei toimu (positiivne vastus), kuna uriinis sisalduv hormoon neutraliseerib aglutineerivad antikehad.

Sademete nähtusel põhinevad reaktsioonid

Neid kasutatakse mitmesuguste antigeenide ja antikehade tuvastamiseks. Kvalitatiivse reaktsiooni lihtsaim näide on läbipaistmatu sadestumisriba tekkimine katseklaasis oleva antikeha antigeeni sadestumise piiril. Laialdaselt kasutatakse erinevat tüüpi sadestamisreaktsioone poolvedelagar või agaroosgeelides (Ouchterloni topeltimmunodifusioonimeetod, radiaalne immunodifusioonimeetod, immunoelektroforees), to-rukis on nii kvalitatiivsed kui ka kvantitatiivsed (vt Immunodifusioon, Immunoelektroforees).

Topeltimmunodifusiooni seadistamiseks valatakse klaasplaadile kiht sulatatud geeli ja pärast kõvenemist lõigatakse välja 1,5-3 mm läbimõõduga augud. Testitavad antigeenid asetatakse süvenditesse ringikujuliselt ja teadaoleva spetsiifilisusega immuunseerum asetatakse kesksesse süvendisse. Üksteise poole difundeerudes moodustavad homoloogsed seerumid ja antigeenid sademe. Radiaalse immunodifusiooniga (vastavalt Mancini meetodile) viiakse agarisse immuunseerum. Süvenditesse asetatud antigeen difundeerub läbi agari ning immuunseerumiga sadestamise tulemusena tekivad süvendite ümber läbipaistmatud rõngad, mille välisläbimõõt on võrdeline antigeeni kontsentratsiooniga. Selle reaktsiooni modifikatsiooni kasutatakse gripi diagnoosimisel IgM ja IgG antikehade tuvastamiseks (vt Immunoglobuliinid). Gripi antigeen viiakse agarisse ja vereseerum süvenditesse. Seejärel töödeldakse plaate IgM või IgG antikehade vastaste immuunseerumitega, mis aitab tuvastada vastavate antikehade reaktsiooni antigeenidega. Meetod võimaldab üheaegselt määrata antikehade tiitreid ja nende kuulumist teatud immunoglobuliinide klassi.

Immunoelektroforeesi tüüp on radioimmunoforees. Sel juhul valatakse pärast antigeenide elektroforeetilist eraldamist antigeenide liikumisega geelis paralleelselt lõigatud soonesse esmalt radioaktiivse joodiga märgistatud immuunseerum määratavate antigeenide vastu ja seejärel immuunseerum. IgG antikehad, mis sadestavad moodustunud antikeha kompleksid antigeeniga. Kõik seondumata reagendid pestakse välja ja antigeen-antikeha kompleks tuvastatakse autoradiograafiaga (vt.).

Täiendage reaktsioone. Komplemendi osalusega reaktsioonid (vt) põhinevad Cl (Clq) komplemendi alamkomponendi ja seejärel komplemendi teiste komponentide võimel ühineda immuunkompleksidega.

Komplemendi sidumise reaktsioon võimaldab teil tiitrida antigeene või antikehi vastavalt antigeeni-antikeha kompleksi komplemendi sidumise astmele. See reaktsioon koosneb kahest faasist: antigeeni interaktsioon uuritava vereseerumiga (testimissüsteem) ja hemolüütilise seerumi interaktsioon lamba erütrotsüütidega (indikaatorsüsteem). Testisüsteemi positiivse reaktsiooni korral toimub komplemendi sidumine ja seejärel antikehaga sensibiliseeritud erütrotsüütide lisamisel hemolüüsi ei täheldata (vt Komplemendi sidumise reaktsioon). Reaktsiooni kasutatakse laialdaselt vistseraalse süüfilise (vt Wassermani reaktsioon) ja viirusnakkuste (vt Viroloogilised uuringud) serodiagnostikaks.

Tsütolüüs. Rakustruktuuride vastased antikehad võivad komplemendi osalusel lahustada neid struktuure kandvad rakud. RBC lüüsi saab kergesti hinnata hemoglobiini vabanemise astme ja intensiivsuse järgi. Tuumarakkude lüüsi hinnatakse surnud rakkude protsendi loendamisega, mis ei värvu metüleensinisega. Sageli kasutatakse ka radioaktiivset kroomi, mis on varem rakkudega keemiliselt seotud. Hävitatud rakkude arvu määrab rakkude lüüsi käigus vabanenud sidumata kroomi hulk.

Geelis võib tekkida erütrotsüütide radiaalse hemolüüsi reaktsioon. Lamba erütrotsüütide suspensioon asetatakse agaroosigeeli, lisades sinna komplemendi; süvendid tehakse klaasile külmutatud kihina ja neile lisatakse hemolüütilist seerumit. Antikehade radiaalse difusiooni tulemusena moodustub süvendite ümber hemolüüsi tsoon. Hemolüüsi tsooni raadius on otseselt võrdeline seerumi tiitriga. Kui erütrotsüütidele adsorbeerub antigeen, näiteks gripiviiruse, punetiste või puukentsefaliidi glükoproteiin hemaglutiniin, võib nende viiruste immuunseerumi hemolüüsi nähtust taastoota. Radiaalse hemolüüsi reaktsioon geelis on leidnud rakendust viirusnakkuste diagnoosimisel, kuna on lihtne määrata staadium, tundlikkus seerumi inhibiitorite suhtes ja võime tiitrida vereseerumit vastavalt hemolüüsitsooni läbimõõdule ilma seerialahjendusi kasutamata.

immuunsuse adhesioon. Erütrotsüütide, trombotsüütide ja teiste vererakkude pinnal on kolmanda komplemendi komponendi (C3) retseptorid. Kui antigeenile (bakterid, viirused jne) lisada sobiv immuunseerum ja komplement, moodustub antigeen-antikeha kompleks, mis on kaetud komplemendi C3 komponendiga. Trombotsüütidega segamisel settib komplemendi C3 komponendi tõttu antigeen-antikeha kompleks rakkudele ja põhjustab nende aglutinatsiooni (vt Immuunadhesioon). Seda reaktsiooni kasutatakse HLA-süsteemi antigeenide määramiseks (vt Transplantatsiooniimmuunsus) ja mitmete viirusnakkuste (puukentsefaliit, denguepalavik) uurimisel kaasneb to-rukkiga immunopatool. protsessid ja viiruse antigeenide ringlus veres kombinatsioonis antikehadega.

Neutraliseerimisreaktsioon põhineb antikehade võimel neutraliseerida makromolekulaarsete või lahustuvate antigeenide teatud spetsiifilisi funktsioone, näiteks ensüümide aktiivsust, bakteriaalseid toksiine, viiruste patogeensust. Bakterioloogias kasutatakse seda reaktsiooni antistreptolüsiinide, antistreptokinaasi ja antistafülolüsiinide tuvastamiseks. Toksiinide neutraliseerimise reaktsiooni saab hinnata biol. toime, näiteks tiitritakse teetanuse- ja botuliinivastaseid seerumeid (vt Toksiini - antitoksiini reaktsioon). Loomadele manustatud toksiini ja antiseerumi segu hoiab ära nende surma. Viroloogias kasutatakse neutraliseerimisreaktsiooni erinevaid variante. Segades viirused sobiva antiseerumiga ja viies selle segu loomadesse või rakukultuuridesse, neutraliseeritakse viiruste patogeensus.

Reaktsioonid keemiliste ja füüsikaliste märgiste abil

Koonsi (AN Coons) 1942. aastal välja töötatud immunofluorestsents hõlmab serooli kasutamist. fluorokroomiga märgistatud seerumite reaktsioonid (vt Immunofluorestsents). Fluorokroomiga märgistatud seerum moodustab antigeeniga antigeen-antikeha kompleksi, mis muutub mikroskoobi all vaatlemiseks kättesaadavaks ultraviolettkiirtes, mis ergutavad fluorokroomi sära. Otsest immunofluorestsentsreaktsiooni kasutatakse rakuliste antigeenide uurimiseks, viiruse tuvastamiseks nakatunud rakkudes ning bakterite ja riketsia tuvastamiseks määrdudes. Seega töödeldakse marutaudi diagnoosimiseks viirusekandjates kahtlustatavate loomade ajutükkide jälgi luminestseeruva marutaudivastase seerumiga. Positiivse tulemuse korral täheldatakse närvirakkude protoplasmas erkrohelist värvi tükke. Gripi-, paragripi- ja adenoviirusnakkuse kiirdiagnoos põhineb viiruse antigeenide tuvastamisel nina limaskestalt pärinevate jäljendite rakkudes.

Laialdasemalt kasutatakse kaudse immunofluorestsentsi meetodit, mis põhineb antigeen-antikeha kompleksi tuvastamisel, kasutades IgG antikehade vastast luminestseeruvat immuunseerumit ja mida kasutatakse mitte ainult antigeenide tuvastamiseks, vaid ka antikehade tiitrimiseks. Meetod on leidnud rakendust herpese, tsütomegalipside, Lassa palaviku serodiagnostikas. Laboris tuleb hoida -20°C juures antigeeni sisaldavate rakkude, näiteks viirusega nakatunud VERO rakkude või atsetooniga fikseeritud kanafibroblastide preparaatide varu. Uuritud vereseerum kantakse preparaatidele kihiti, preparaat asetatakse immuunkomplekside moodustamiseks termostaadi f 37 ° juures ja seejärel pärast seondumata reaktiivide mahapesemist tuvastatakse need kompleksid märgistatud luminestseeruva seerumiga inimese globuliinide vastu. Kasutades märgistatud immuunseerumeid IgM või IgG antikehade vastu, on võimalik eristada antikehade tüüpe ja tuvastada varajane immuunvastus IgM antikehade olemasolu järgi.

Ensüümis - immunoloogilisel meetodil kasutatakse ensüümidega konjugeeritud antikehi, hl. arr. mädarõika peroksüdaas või aluseline fosfataas. Märgistatud seerumi seose tuvastamiseks antigeeniga lisatakse substraat, mis laguneb seerumi külge kinnitatud ensüümi toimel kollakaspruuni (peroksidaas) või kollakasrohelise (fosfataas) värviga. Kasutatakse ka ensüüme, mis lagundavad mitte ainult kromogeenset, vaid ka lumogeenset substraati. Sel juhul ilmub positiivse reaktsiooni korral sära. Sarnaselt immunofluorestsentsiga kasutatakse ensüümi immuunanalüüsi antigeenide tuvastamiseks rakkudes või antikehade tiitrimiseks antigeeni sisaldavatel rakkudel.

Kõige populaarsem ensüümi-immunoloogilise meetodi tüüp on immunosorptsioon. Tahkel kandjal võib Krimmis olla tselluloos, polüakrüülamiid, dekstraan ja mitmesugused plastid, adsorbeerida antigeeni. Sagedamini toimib kandjana mikropaneelide kaevude pind. Testitav vereseerum lisatakse sorbeeritud antigeeniga süvenditesse, seejärel märgistatakse ensüümi ja substraadiga antiseerum. Positiivseid tulemusi arvestab vedela keskkonna värvuse muutus. Antigeenide tuvastamiseks adsorbeeritakse antikehad kandjale, seejärel viiakse uuritav materjal süvenditesse ja reaktsioon tuvastatakse ensüümiga märgistatud antimikroobse seerumiga.

Radioimmunoloogiline meetod põhineb antigeenide või antikehade radioisotoopmärgise kasutamisel. Algselt töötati see välja spetsiifilise meetodina veres ringlevate hormoonide taseme mõõtmiseks. Katsesüsteemiks oli isotoobiga märgistatud hormoon (antigeen) ja selle vastane antiseerum. Kui sellisele antiseerumile lisatakse soovitud hormooni sisaldav materjal, siis see seob osa antikehadest, millele järgneva märgistatud tiitritud hormooni sisseviimisega seondub antikehadega võrreldes kontrolliga väiksem kogus seda. Tulemust hinnatakse seotud ja seondumata radioaktiivse märgise kõverate võrdlemisega. Sellist meetodit nimetatakse konkurentsireaktsiooniks. Radioimmunoloogilisel meetodil on ka teisi modifikatsioone. Radioimmunoloogiline meetod on kõige tundlikum meetod antigeenide ja antikehade määramiseks, mida kasutatakse hormoonide, ravimite ja antibiootikumide määramiseks, bakteriaalsete, viiruslike, riketsiaalsete, algloomsete haiguste diagnoosimiseks, verevalkude, kudede antigeenide uurimiseks.

Seroloogiliste uurimismeetodite võrdlevad omadused ja kasutamine meditsiinipraktikas

S. meetodid ja. pidevalt täiustatud tundlikkuse ja kasutuse mitmekülgsuse suurendamise suunas. Esialgu serool. diagnoos põhines antikehade tuvastamisel. 20. sajandi keskpaiga tulekuga Immunofluorestsentsi ja passiivse hemaglutinatsiooni reaktsioonid, millel on suurem tundlikkus, sai võimalikuks tuvastada mitte ainult antikehi, vaid ka antigeeni otse patsientide materjalist. Ensüüm-immunoloogilised ja radioimmunoloogilised meetodid, mille tundlikkus on 2-3 suurusjärku suurem kui immunofluorestsents ja passiivne hemaglutinatsioon, lähenevad biol. bakterite ja viiruste tuvastamine. Nende rakendusala nii antigeenide kui ka antikehade tuvastamiseks on teoreetiliselt piiramatu.

Serodiagnoos inf. haigus põhineb antikehade ilmnemisel isoleeritud või kahtlustatava patogeeni vastu, olenemata sellest, kas patogeen avastati haiguse ägedas staadiumis. Uurige haiguse alguses ja 2-3 nädala jooksul võetud vereseerumite paare. hiljem. Antikehade suurenemine teises vereseerumis vähemalt 4 korda võrreldes esimesega on diagnostiliselt oluline. Samuti on oluline, milline immunoglobuliinide antikehade klass on esindatud. IgM antikehad leitakse haiguse ägeda perioodi lõpus ja taastumise varases staadiumis. IgG antikehad ilmuvad taastumise hilisemates staadiumides ja ringlevad pikka aega. Kui raseduse esimesel trimestril naisel leitakse punetiste viiruse IgM antikehad, on see raseduse katkestamise aluseks, kuna sel perioodil on loode viiruse suhtes eriti tundlik. Erinevatel inf. haigused kasutavad valikuliselt kõige spetsiifilisemaid ja mugavamaid meetodeid.

S. i. kasutatakse laialdaselt epidemioloogias. Erinevate elanikkonnarühmade vereproovide süstemaatiline kogumine ja uurimine võimaldab mõista elanikkonna kontakte aktivaatorite allikaga inf. haigused. Kollektiivse immuunsuse taseme uuring võimaldab tuvastada kõrge riskiga rühmi ja planeerida vaktsineerimistegevusi, uurida nakkuste geograafilist levikut. S. i. elanikkonna erinevad vanuserühmad võimaldasid näiteks tagantjärele tuvastada gripiviiruse erinevate variantide ringlemist teatud ajaperioodidel.

S. i. omavad suurt tähtsust pärilike haiguste (vt.) ja autoimmuunhaiguste uurimisel, millega kaasnevad vastavaid sihtrakke hävitavate koe- ja elundispetsiifiliste antikehade ilmumine, samuti onkoloogias kasvajaantigeenide tuvastamisel. Seega põhineb maksavähi immuundiagnostika alfa-fetoproteiini ja teiste embrüonaalsete antigeenide määramisel patsientide vereseerumis immunodifusiooni ja radioimmunoanalüüsi meetoditega.

Tänu serooli kasutamisele saavutatakse märkimisväärne teaduse edu rakuliste antigeenide, bakterite ja viiruste antigeensete peenstruktuuri uurimisel. monoklonaalsete antikehade reaktsioonid, rukkile on võimalik eraldada antigeenideterminandid.

Bibliograafia: Immunoloogia uurimismeetodid, toim. I. Lefkovits ja B. Pernis, tlk. inglise keelest, M., 1981; Immunoloogia juhend, toim. O. E. Vjazova ja Sh. X. Hodžajev Moskva, 1973. Kliinilise laboratoorse diagnostika juhend, toim. V. V. Menšikov, Moskva, 1982. Immunology, toim. autor J.-F. Bach, N.Y., 1978.

S. Ya. Gaidamovitš.